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摘要:目的 通过调查参与社区慢性病群体管理联合个体管理患者管理前后的心身情况,评估南京市鼓楼区慢性病管理的效果.方法 在社区群体管理的基础上,对南京市鼓楼区社区卫生服务中心来诊的慢性病患者进行个体管理,即收集和补充收集患者信息、登记和建立健康档案、评估和诊断、制定管理方案、效果评估和管理方案调整.采用整群抽样的方法,选265例患者进行了问卷调查,分别从生命质量、行为改变、客观指标3方面进行评价.结果 管理后,慢性病患者的精力、社会功能得分明显高于管理前;心理健康得分明显低于管理前(P<0.05);慢性病患者经常自我监测血糖、自行检查足部、按照医生建议服用降糖药物、增加进食高纤维的食物、减轻体质量的行为发生率较管理前明显增加(P<0.05);不吸烟和不饮酒者较管理前减少(P<0.05).结论 慢性病社区管理需要在群体管理的基础上加强个体管理.个体管理后患者的生命质量、行为等方面均能得到一定程度改善.应加强对社区全科医生疾病管理技能的培训,在管理过程中根据患者疾病情况进行补充评估、调整管理方案,做到连续性管理.
摘要:目的:利用基因工程技术获得与结缔组织生长因子(CTGF)特异性结合的小肽.方法:设计并合成带有肠激酶切割位点的基因片段,插入pET-32(a)+质粒载体中硫氧化还原蛋白基因下游,构建重组质粒,转入E.coli BL21表达菌中,用终浓度1mmol·L-1的IPTG诱导表达融合蛋白;用热变性和硫酸铵分级沉淀对融合蛋白进行初步纯化,然后用亲和层析进一步纯化,经肠激酶切割,最后用凝胶过滤层析分离获得目的小肽;用反相色谱对所获小肽进行纯度鉴定.结果:所构建的重组质粒测序结果与预期一致;诱导表达后用SDS-PAGE鉴定,发现在相对分子质量20 000处有浓密的表达条带出现,与预期一致;融合蛋白用热变性和硫酸铵分级沉淀进行初步纯化,得率分别为78.6%和52.3%;用亲和层析纯化得率为50.5%;经肠激酶切割后用凝胶过滤层析分离获得目的小肽,用反相色谱鉴定其纯度大于95%;最终每升发酵液获得3.4mg目的肽.结论:成功制备CTGF特异性结合肽,为进一步研究该小肽的生物学活性打下基础.
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的:从随机十二肽库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆.方法:用基因重组方法制备硫氧化还原蛋白(TrxA)以及硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白;噬菌体肽库经TrxA预吸附后,与TrxA-CTGF结合,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取10个克隆,提取单链DNA后测序;用直接和间接ELISA方法检测噬菌体阳性克隆与CTGF结合的特异性.结果:10个克隆中8个DNA序列完全一致(810A),另有2个有不同序列(810B,810C);3个阳性克隆用直接和间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.05).结论:成功获得与CTGF特异结合的噬菌体克隆,为CTGF小分子抑制剂的研究打下基础.
摘要:目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列.方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取8个克隆,提取DNA后测序;测序阳性的DNA转化E.coli HB2151,IPTG诱导后用间接ELISA方法检测培养上清单链抗体的活性.MTT法测定单链抗体对CTGF促人近曲肾小管上皮HK-2细胞增殖作用的影响.结果:从8个克隆中获得7个完全一致的DNA序列(W0616);另有1个克隆丢失了重链,且轻链框架区(FR)和互补决定区(CDR)序列与W0616不一致;阳性克隆经诱导后,培养上清用间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.001).同时,该单链抗体片段能明显抑制CTGF引起的HK-2细胞的增殖.结论:成功获得与CTGF特异结合的人源单链抗体可变区序列,为CTGF抑制剂的研究奠定基础.
[硕士论文] 王明虹
内科学(心血管) 东南大学 2008(学位年度)
摘要:目的:纤维化是多种慢性病的常见病理过程之一。作为多个信号通路中的下游作用因子,结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)在纤维化的发生、发展过程中起着关键作用,因此CTGF是一个更具特异性的靶点。对于细胞因子拮抗剂的研究是目前纤维化疾病治疗中的热点。本研究试图从随机十二肽库中筛选与CTGF特异性结合的噬菌体克隆,利用基因工程技术获得与CTGF特异性结合的小肽,初步研究该小肽是否能抑制CTGF促人脐静脉内皮细胞增殖及迁移的活性。为开发CTGF小分子抑制剂打下基础,进而为纤维化疾病的治疗提供新途径。 方法:1.用基因重组方法制备硫氧化还原蛋白(TrxA)及硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白;噬菌体随机十二肽库经TrxA预吸附后,与TrxA-CTGF结合,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取10个阳性克隆,提取单链DNA后进行测序;用直接噬菌体-ELISA试验检测噬菌体刚性克隆与CTGF结合的特异性。2.设计并合成一段带有肠激酶切割位点的基因片段,插入pET-32(a)+质粒载体中硫氧化还原蛋白基因下游,构建重组质粒,转入E.coliBL21表达菌中,用终浓度1mmol·L-1的IPTG诱导表达融合蛋白;用热变性和硫酸铵分级沉淀对融合蛋白进行初步纯化,用亲和层析进一步纯化,经肠激酶切割后用凝胶过滤层析分离获得目的小肽;用反相色谱对所获小肽进行纯度鉴定。3.体外培养人脐静脉内皮细胞,采利用MTT试验观察所获小肽是否能抑制CTGF促人脐静脉内皮细胞增殖的作用、利用Transwell试验观察所获小肽是否能抑制CTGF促人脐静脉内皮细胞迁移的作用。 结果:1.10个噬菌体阳性克隆中8个DNA序列完全一致,命名为810A,另有2个序列各不相同,分别命名为810B、810C;根据三联密码子推导810A、810B、810C的氨基酸序列分别为LLADXXXXRPWT、HATGXXXXSLSH、TSGYXXXXGRWR;计算其相对分子量分别为1448.627D、1218.315D、1502.725D,等电点分别为7.985、8.075、12.185;阳性噬菌体克隆810A用直接噬菌体-ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.05)。2.所构建的重组质粒测序结果与预期序列一致;诱导表达后经SDS-PAGE鉴定,发现在相对分子量20000D处有浓密的表达条带出现,与预期分子量一致;融合蛋白用热变性、硫酸铵分级沉淀、亲和层析、肠激酶切割、凝胶过滤层析分离获得目的小肽,用反相色谱鉴定其纯度大于95%;最终每升发酵液获得3.4mg目的肽。3.0.1μg·mL-1CTGF能促进人脐静脉内皮细胞增殖,与阴性对照比较差异显著(P<0.05),浓度为10μg·mL-1的小肽810A能抑制0.1μg·mL-1CTGF促人脐静脉内皮细胞增殖的作用,与阳性对照比较差异显著(P<0.05),而浓度分别为2μg·mL-1、0.4μg·mL-1、0.08μg·mL-1、0.016μg·mL-1、0.0032μg·mL-1、0.00064μg·mL-1的小肽810A不能抑制0.1μg·mL-1CTGF促人脐静脉内皮细胞增殖的作用,与阳性对照比较无显著差异(P>0.05):1μg·mL-1CTGF可促进人脐静脉内皮细胞迁移,与阴性对照相比有显著差异(p<0.05),浓度分别为1mg·mL-1、100μg·mL-1、10μg·mL-1、1μg·mL-1、0.1μg·mL-1的小肽810A能抑制1μg·mL-1CTGF促人脐静脉内皮细胞迁移的作用,与阳性对照比较差异显著(P<0.05)。 结论:1.成功获得3个与结缔组织生长因子特异性结合的噬菌体克隆,分别命名为810A、810B、810C,并通过测序获得其DNA编码序列。2.成功制备与结缔组织生长因子特异性结合的小肽810A。3.一定浓度的小肽810A可抑制结缔组织生长因子促人脐静脉内皮细胞增殖及迁移的作用。
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