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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:应用非洲绿猴肾细胞(Vero)从山东省诸城市疑似犬瘟热(canine distemper,CD)感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒.分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应(CPE),经毒力测定、血清学、RT PCR检测及测序、回归动物试验证明为犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV),命名为CDV诸城分离株(CDV-ZC).采用RT PCR方法分段克隆分离株的全基因序列并测序,测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对.结果表明,CDV-ZC株全基因(KJ994343)与标准美洲型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%~92.0%.血凝素(H)基因序列分析表明,CDV ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子(SLAM)受体结合区即542~544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点(N-X-S/T).致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,为CD的有效预防、诊断及控制提供理论依据.
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:[目的]探索迟缓爱德华菌LuxS/AI-2型密度感应系统关键基因luxS的分布及在不同生长时期的表达特征和生物功能.[方法]克隆迟缓爱德华菌luxS基因,利用生物信息学工具和网络数据库分析该基因序列的特征及编码蛋白的基本特征和保守结构;原核表达LuxS蛋白,纯化后制备抗LuxS的抗体,运用Western-blot技术分析LuxS在不同毒力、不同来源迟缓爱德华菌中的分布情况及在不同生长时期的表达水平;利用抗体中和方法,分析抗LuxS抗体对迟缓爱德华菌生长的影响,探索LuxS是否为信号分子AI-2的特异依赖模式.[结果]克隆到迟缓爱德华菌luxS基因,长度为516 bp,序列分析结果表明,该基因在迟缓爱德华菌属中高度保守;对多株迟缓爱德华菌LuxS蛋白的检测结果表明,该基因在该菌属中普遍存在;对不同生长时期LuxS蛋白的检测结果表明,LuxS蛋白的表达量在迟缓期较低,进入对数生长期逐渐增加,在对数生长后期最大,稳定后期逐渐减少;抗体中和生长试验结果表明,1%抗血清(效价1:40000)能延长迟缓爱德华菌生长的平台期,但对细菌生长无显著影响.[结论]LuxS/AI-2介导的密度感应系统在迟缓爱德华菌中普遍存在;关键基因luxS的序列高度保守,在不同生长时期表达量不一致,在对数生长后期达到峰值.
摘要:日本沼虾,别名青虾或河虾,隶属于节肢动物门、甲壳纲、十足目、长臂虾科、沼虾属,是我国重要淡水食用虾,经济效益显著,但近年来随着养殖规模的发展,养殖密度的提高,人工饵料的投喂,水体有机质的积累,疾病危害越来越严重,制约日本沼虾养殖业发展.本文主要介绍几种常见疾病及其防治技术,供养殖工作者参考.1 黑鳃病该病是近年来日本沼虾的常见病,该病传染性强,发病率高,常引起大量死亡.1.1 致病因素 (1)弧状杆菌感染;(2)虾塘有机物过多,导致病菌繁殖感染虾体;(3)聚缩虫寄生虫感染;(4)饲料中缺乏Vc.1.2 临床症状 体色黑,复眼变白,多集中在岸边浅水处,行动迟缓,对外界刺激反应不灵敏,病虾鳃部成红色,上有黑色斑点,严重的鳃为全黑色,胃呈透明色,内充盈液体,无食物,肝胰腺红黄色,质脆易碎,肌肉韧性较差.
摘要:应用Vero细胞从山东省诸城市疑似犬瘟热感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒.分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应,经毒力测定、血清学、RT-PCR检测及基因测序、回归动物试验证实为犬瘟热病毒,命名为ZC株.采用RT-PCR方法分段克隆分离株的全基因组序列并测序,依次拼接得到全基因组序列进行序列比对分析.结果表明,CDV-ZC株全基因(GenBank登录号KJ994343)与美洲基因型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%-92.0%.血凝素基因序列分析表明,CDV-ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1基因型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子受体结合区的542-544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点.致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,对CD的有效预防、诊断及控制具有指导意义.
摘要:细菌菌蜕是通过调控噬菌体PhiX1 74的裂解基因E在革兰氏阴性细菌中表达而形成的无细胞浆和繁殖能力的细菌空壳,是一种理想的新型疫苗体系。本研究成功构建溶菌质粒载体,并将其转入迟缓爱德华菌,通过温度诱导制备出迟缓爱德华菌菌蜕疫苗。分别用1×105cells/ml(A组)、1×106cells/ml(B组)、1×107cells/ml(C组)的迟缓爱德华菌菌蜕疫苗和PBS (D组)免疫黑鲷30尾,在免疫后的第0、3、7、14、21和28 d采样,并测定血清抗体水平和白细胞吞噬活性。
摘要:细菌菌蜕是通过调控噬菌体PhiX174的裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达而形成的无细胞浆和繁殖能力的细菌空壳,具有天然的佐剂和候选疫苗的性质,可作为蛋白质抗原、核酸、药物和易溶化合物的递送体系。因此,本研究拟构建表达副溶血弧菌外膜蛋白OmpK抗原的重组迟缓爱德华菌溶菌质粒载体,并制备菌蜕疫苗。我们在前期研究的基础上构建了plysis-OmpK质粒,转入大肠杆菌Top10经测序正确后转入迟缓爱德华菌,通过高温诱导制备出了表达副溶血弧菌外膜蛋白OmpK的迟缓爱德华菌菌蜕,并跟踪检测了其溶菌动力学过程。
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