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[期刊论文] 王小龙 宋青 王志勇 韩芳
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CSTPCD 北大核心
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摘要:锰超氧化物歧化酶(MnSOD)是一种含金属辅基的抗氧化酶,广泛存在于各种需氧生物中,能将氧自由基快速歧化为分子氧(O2)和过氧化氢(H2O2).本研究首次获得了黄姑鱼MnSOD基因的cDNA序列,其全长958 bp,包括47 bp的5'端非编码区(untranslated region,UTR)、233 bp的3'UTR和678 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码225个氨基酸残基(aa).氨基酸序列分析显示,MnSOD含有一条信号肽序列(1~27 aa),4个Mn结合位点(His 53、101、190和Asp 186)和一条保守的锰/铁SOD特征序列(186~193 aa).系统进化树分析显示,黄姑鱼MnSOD在进化上与大黄鱼最近,并与其他鱼类(斜带石斑鱼、暗纹东方鲀、牙鲆、斑马鱼和日本鳗鲡)聚为一支.荧光定量PCR检测显示,MnSOD基因在所检测的11个黄姑鱼组织/器官中均有表达,其中心脏中表达量最高,其次为脑、肝脏、鳃、中肾、肠、胃、头肾、肌肉和鳔,在脾脏中表达量最低.氨氮和亚硝态氮对黄姑鱼的急性毒性实验显示,黄姑鱼对氨氮胁迫更为敏感,其氨氮和亚硝态氮的96 h半致死浓度(LC50)分别为20.23 mg/L(换算成非离子氨0.57 mg/L)和99.08 mg/L,安全浓度分别为2.02 mg/L(换算成非离子氨0.06 mg/L)和9.91 mg/L.此外,黄姑鱼经氨氮和亚硝态氮急性攻毒后,其肝脏、鳃和头肾中MnSOD基因的表达水平均不同程度上调,推测MnSOD的上调是为了及时清除由氨氮和亚硝态氮刺激产生的氧自由基,或可用作水体污染检测的早期生物标志物....
摘要:克隆大黄鱼脾酪氨酸激酶基因(Larimichthys crocea spleen tyrosine kinase,LcSyk)并分析其结构,通过荧光定量PCR技术分析该基因的组织表达谱以及受LPS、PolyI:C和灭活副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)免疫刺激后的表达变化规律.结果显示:LcSyk基因cDNA全长2761 bp,其中开放阅读框为1851 bp,编码616个氨基酸,预测相对分子质量为70527,理论等电点为8.13;LcSyk在所检测到的大黄鱼组织(心脏、肝脏、脾脏、头肾、中肾、鳃、肠、胃、脑)中均有表达,属广谱型表达;不同组织间LcSyk的表达量存在差异,其中在头肾中的表达量最高,在中肾和脾脏中的次之,在胃中的表达量最低;大黄鱼受到LPS、Poly I:C和灭活副溶血弧菌免疫刺激后,脾脏、头肾和肝脏中LcSyk基因的表达水平明显上调,表明LcSyk在大黄鱼抵御病毒和细菌病原的免疫机制中发挥了重要作用....
摘要:克隆了大黄鱼ras-related C3 botulinum toxin substrate 2(Rac2)基因(命名为lycRac2),并从本实验室大黄鱼基因组数据库中获得了lycRac2基因的全长序列.lycRac2基因全长1670.427 kb,包含7个外显子、6个内含子,其cDNA序列全长1221 bp,ORF为579 bp,编码192个氨基酸.同源性比较结果显示,从鱼类到哺乳动物,RAC2蛋白的氨基酸序列相当保守,其基因均具有7个外显子和6个内含子,但不同物种之间7个外显子和6个内含子的长度都不一致.实时定量PCR检测结果显示,lycRac2基因在肝脏、 脾脏、 肠、 胃、 肾、 头肾、 肌肉、 皮肤、 脑、 鳃、 心脏、 血液中均有不同程度表达,其中在头肾中表达量最高,肌肉中表达量最低.大黄鱼受到LPS(脂多糖)、polyI:C、 副溶血弧菌刺激后,肝脏、 脾脏、 头肾中lycRac2基因表达量明显上调,显示lycRac2基因参与了大黄鱼的免疫反应,其可能具有对细菌和病毒的抗病免疫作用.通过原核表达还获得lycRAC2蛋白,为进一步研究其性质和功能奠定了基础....
[硕士论文] 王小龙
生物学 集美大学 2018(学位年度)
摘要:超氧化物歧化酶(SOD,EC1.15.1.1)是一种关键的酶类抗氧化物质,筑起了生物体针对氧毒性的第一道防线,将氧自由基快速歧化为普通分子氧(O2)和过氧化氢(H2O2)。本研究从已构建的黄姑鱼(Nibea albiflora)转录组数据库中筛选出三种SOD基因:胞质型铜锌SOD(IcSOD,MG208871)、胞外型铜锌SOD(EcSOD,MF974567)和锰SOD(MnSOD,MG208872),并对它们的分子特征及功能进行了研究,结果如下:
  (1)在氨氮和亚硝态氮急性毒性实验中,黄姑鱼表现出对氨氮胁迫更为敏感,其氨氮和亚硝态氮的96小时半致死浓度(LC50)分别为20.23mg/L(换算成非离子氨0.57mg/L)和99.08mg/L,安全浓度分别为2.02mg/L(换算成非离子氨0.06mg/L)和9.91mg/L。
  (2)黄姑鱼IcSOD(NaIcSOD)cDNA全长793bp,包括58bp的5'非编码区(UTR)、270bp的3’非编码区(UTR)和465bp的开放阅读框(ORF),编码154个氨基酸。NaIcSOD不具有信号肽和跨膜区。NaIcSOD mRNA在所检测的11个组织或器官(心脏、肝、脾脏、头肾、中肾、鳃、肠、胃、脑、肌肉和鳔)中均有表达,在头肾中表达量最高,其次为脑、肝脏、心脏和鳃,在肌肉中表达量最低。黄姑鱼经氨氮/亚硝态氮急性攻毒后,其肝脏、鳃和头肾组织的NaIcSOD mRNA均不同程度上调。此外,通过原核表达获得了具有生物活性的NaIcSOD,研究表明该酶具有良好的温度和pH稳定性。
  (3)黄姑鱼EcSOD(NaEcSOD)cDNA全长1101bp,包括224bp的5'UTR、229bp的3'UTR和648bp的ORF,编码215个氨基酸。氨基酸序列分析表明,NaIcSOD不具有跨膜区,含有1条信号肽序列(0-26aa)。NaEcSOD mRNA在所检测的11个组织或器官中均有表达,肝脏中表达量最高,其次为脑、鳔和胃,在肌肉中最低。黄姑鱼经氨氮/亚硝态氮急性攻毒后,其肝脏、鳃和头肾组织的NaEcSOD mRNA均有不同程度上调。通过原核表达,获得了具有生物活性的NaEcSOD,测得该酶具有良好的温度和pH稳定性。此外,GST pull-down实验表明NaEcSOD蛋白与膜联蛋白A4(annexin A4)存在相互作用。
  (4)黄姑鱼MnSOD(NaMnSOD)cDNA全长949bp,包括38bp的5'UTR、233bp的3'UTR和678bp的ORF,编码225个氨基酸。NaMnSOD无跨膜区,含有1条信号肽序列(0-27aa)。NaMnSOD mRNA在所检测的11个组织或器官中均有表达,心脏中表达量最高,其次为脑、肝脏和鳃,在脾脏中最低。黄姑鱼经氨氮/亚硝态氮急性攻毒后,其肝脏、鳃和头肾组织的NaMnSOD mRNA均不同程度上调。
  上述研究结果表明,黄姑鱼对氨氮和亚硝态氮的耐受力差,在黄姑鱼的约化养殖过程中,对养殖水体中氨氮和亚硝态氮的实时监控尤为重要。IcSOD、EcSOD和MnSOD在黄姑鱼抵抗氨氮/亚硝态氮污染中均发挥重要作用,可以作为水体污染监测的早期生物标志物。NaIcSOD和NaEcSOD蛋白均表现出良好的酶活力以及温度/pH稳定性,具有较大的应用前景。
[专利] 发明专利 CN201810058717.X
厦门市产品质量监督检验院 集美大学 2018-08-07
摘要:本发明公开了一种黄姑鱼超氧化物歧化酶MnSOD基因及其应用,其cDNA包括如SEQ ID NO 01所示的序列。本发明首次从黄姑鱼的肝脏组织中克隆到一种超氧化物歧化酶MnSOD基因的cDNA。采用本发明试剂盒首次研究氨氮急性攻毒后,黄姑鱼超氧化物歧化酶MnSOD基因mRNA表达的时相变化,该mRNA表达水平的检测在氨氮对黄姑鱼的污染检测中作为一种生物标记,在黄姑鱼对氨氮环境预警中有重要的应用前景,并为黄姑鱼的健康状态和生长环境安全的检测奠定基础。
[专利] 发明专利 CN201810058725.4
厦门市产品质量监督检验院 集美大学 2018-07-20
摘要:本发明公开了一种黄姑鱼超氧化物歧化酶ecCu/ZnSOD基因及其应用,其cDNA包括如SEQ ID NO 01所示的序列。本发明首次从黄姑鱼的肝脏组织中克隆到一种超氧化物歧化酶ecCu/ZnSOD基因的cDNA。采用本发明试剂盒首次研究亚硝态氮急性攻毒后,黄姑鱼超氧化物歧化酶ecCu/ZnSOD基因mRNA表达的时相变化,该mRNA表达水平的检测在亚硝态氮对黄姑鱼的污染检测中作为一种生物标记,在黄姑鱼对亚硝态氮环境预警中有重要的应用前景,并为黄姑鱼的健康状态和生长环境安全的检测奠定基础。
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