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摘要:在砂培条件下,采用不同浓度的Sr2+ (0、05、1、5、10 mmol/L)对转pprI基因油菜幼苗(Brassica napus L.)和非转基因油菜幼苗处理30 d,分析油菜幼苗对Sr的吸收积累情况,并研究油菜对Sr胁迫的生理生态响应。结果表明:转基因油菜幼苗和非转基因油菜幼苗对Sr2+的吸收量均随Sr2+胁迫浓度的升高而升高,转基因油菜根部的Sr2+含量大于非转基因油菜根部,而地上部分的Sr2+含量却小于非转基因油菜。对照相比,在Sr2+胁迫下的转基因油菜和非转基因油菜脯氨酸(Pro)含量则随Sr2+浓度的提高而升高,而SOD、POD活性和叶绿素含量都随Sr2+浓度的增加呈先上升后下降趋势。非转基因油菜相比,转基因油菜在各种胁迫浓度下的SOD、POD活性、叶绿素含量以及脯氨酸含量都高于非转基因油菜。因此得出结论:转pprI基因油菜较非转基因油菜更具有对Sr胁迫的抗性和耐受能力。...
摘要:渗透胁迫诱导蛋白OsmC有机氢过氧化物抗性蛋白Ohr都属于OsmC超家族抗氧化物酶,在细菌抵御有机或无机过氧化反应的过程中起重要作用。耐辐射异常球菌(D. radiodurans R1)中osmC基因(DR_1538)ohr基因(DR_1857)分别编码了OsmC超家族中的这两种抗氧化物酶。运用体外三段融合PCR方法和线性转化方法,首次构建了壮观霉素抗性完全缺失突变株ΔosmC和卡那霉素抗性完全缺失突变株Δohr。对ΔosmC、Δohr突变株和野生型菌株分别都进行CHP(异丙苯基过氧化氢)、H2O2 和NaCl胁迫处理,结果显示,野生型相比,ΔosmC突变株对H2O2异常敏感,而Δohr突变株对CHP更敏感,两个突变株对NaCl胁迫都没有大的变化。QRT-PCR结果显示在H2O2和NaCl胁迫下野生型菌株中osmC基因都上调,其中H2O2胁迫下基因上调水平显著;在CHP和NaCl胁迫下野生型菌株中ohr基因基因上调大约2倍左右。根据结果推测同属于OsmC超家族的两个过氧化物酶选择底物的偏好性作用方式可能并不一样,OsmC蛋白可能主要是以无机过氧化物作为底物,而Ohr蛋白可能主要是以有机过氧化物为底物。 The osmotic stress induced protein (OsmC) and organic hydroperoxide resistance protein (Ohr) were two antioxidant enzymes which play an important role in bacteria defensing organic or inorganic peroxidation. The osmC gene (DR_1538) and ohr gene (DR_1857) of Deinococcus radiodurans (D. radiodurans R1) encoded the two antioxidant enzymes in the OsmC superfamily. Fusion PCR of three sections in vitro and linear transformation method were used to firstly construct the spectinomycin-resistant mutant stain (ΔosmC) and the kanamycin-resistant mutant strain (Δohr). The ΔosmC, Δohr mutants strain and wild-type strain were treated with CHP (cumene hydroperoxide), H2O2 and NaCl stress treatments. The result showed that ΔosmC mutant is extremely sensitive to H2O2 compared with the wild type, while Δohr mutant is more sensitive to CHP and the two mutant strains had no changes after NaCl stress. QRT-PCR results displayed that the osmC gene of the wild-type strain were up-regulated in both H2O2 and NaCl stress treatments, and the osmC gene in H2O2 stress levels was significantly upregulated. The ohr genes in wild-type strain after CHP and NaCl stress treatments upregulated approximately 2-folds. From above, it was presumed that there may be different at the preference of two peroxidases in OsmC superfamily selecting substrates and the mode of those interacting with their substrate; OsmC proteins may mainly use inorganic peroxide as its substrate and Ohr protein may be primarily based on the organic peroxide as its substrate....
摘要:DR1372基因是在耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans, DR)基因组中克隆得到的一个基因,其蛋白序列存在一个WHy功能域,此功能域可能参油菜的抗旱过程。本研究首先构建植物DR1372- pBI121表达载体,然后利用农杆菌介导法将目的基因DR1372成功转入甘蓝型油菜中,并对影响油菜再生频率以及遗传转化效率的几个因素进行了探讨,初步建立了油菜转DR1372基因遗传转化体系,为DR1372基因的功能研究奠定了基础。...
摘要:以陆地棉种质系Coker 312为材料,探讨了三种氨基酸对棉花转基因胚性愈伤生长、胚状体诱导、萌发及NAA对转基因再生植株生根的影响,建立一个高效的转基因体细胞胚萌发系统。结果表明:单独使用Pro、Glu时能提高转基因胚性愈伤增长、胚状体诱导及萌发能力,但以综合使用效果更为显著,Ala的附加没有显著影响;当生根培养基NAA的浓度为0.3 mg/L,根的诱导数量及质量都优于对照。但NAA的浓度不宜过高,过高则加重了根的褐化程度。对得到的转基因再生植株进行Kan涂抹实验,Kan抗性苗获得率可达到11.53%;PCR检测约83.78%的Kan抗性苗呈阳性。...
摘要:以转IrrE基因非转基因甘蓝型油菜为材料,在自然干旱条件下,比较研究了转基因非转基因油菜植株的干旱耐受性情况。结果表明,在0-35 d的自然干旱情况下,随着盆土中土壤含水量的逐渐降低,转基因非转基因油菜植株的叶片含水量(RWC)也逐渐下降,35 d后他们的含水量降到最低,恢复供水后,其含量均逐渐上升。而油菜叶片的叶绿素含量、可溶性蛋白含量、丙二醛(MDA)含量、SOD和POD酶活性却逐渐上升,恢复供水后,他们的含量和酶活性均逐渐下降,但在干旱胁迫和复水过程中,转基因油菜叶片的含水量、叶绿素含量、可溶性蛋白含量、SOD和POD酶活性均高于非转基因油菜,而丙二醛(MDA)含量始终低于非转基因的含量。说明来源于耐辐射奇球菌的转录调节因子IrrE,参了油菜幼苗对干旱胁迫的耐受性应答过程,从而增强了植株的耐旱能力。...
摘要:以转IrrE基因油菜为材料,以非转基因油菜为对照,砂培条件下研究了油菜对Cs的积累吸收情况和Cs胁迫对油菜SOD、POD酶活性、MDA含量及游离脯氨酸含量的影响.结果表明:随着处理浓度的增大,转基因油菜和非转基因油菜对Cs的吸收量都增大,二者根部的吸收量都大于其地上部分;转基因油菜根部的积累量大于非转基因油菜根部的量,而地上部分积累量小于非转基因油菜的含量;在不同Cs浓度的胁迫下,转基因和非转基因叶片的SOD和POD活性均呈现先升后降的趋势,4种Cs浓度处理下转基因油菜活性都高于非转基因油菜;转基因和非转基因油菜叶片的MDA含量均呈上升的趋势,但转基因油菜体内的MDA含量都低于非转基因油菜;4种处理下油菜叶片脯氨酸含量也表现出上升趋势,而转基因油菜产生的游离脯氨酸高于非转基因产生的.以上结果说明在油菜受到Cs胁迫时,转IrrE基因油菜比非转基因油菜更具有Cs胁迫耐受性....
摘要:以转IrrE基因油菜为材料,以非转基因油菜为对照,砂培条件下研究了油菜对Cs的积累吸收情况和Cs胁迫对油菜SOD、POD酶活性、MDA含量及游离脯氨酸含量的影响.结果表明:随着处理浓度的增大,转基因油菜和非转基因油菜对Cs的吸收量都增大,二者根部的吸收量都大于其地上部分;转基因油菜根部的积累量大于非转基因油菜根部的量,而地上部分积累量小于非转基因油菜的含量;在不同Cs浓度的胁迫下,转基因和非转基因叶片的SOD和POD活性均呈现先升后降的趋势,4种Cs浓度处理下转基因油菜活性都高于非转基因油菜;转基因和非转基因油菜叶片的MDA含量均呈上升的趋势,但转基因油菜体内的MDA含量都低于非转基因油菜;4种处理下油菜叶片脯氨酸含量也表现出上升趋势,而转基因油菜产生的游离脯氨酸高于非转基因产生的.以上结果说明在油菜受到Cs胁迫时,转IrrE基因油菜比非转基因油菜更具有Cs胁迫耐受性....
摘要:本文研究了以下胚轴为外植体材料的棉花组织培养过程中,愈伤组织诱导、胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎(胚状体)的诱导所需要的最佳激素浓度及配比.研究结果表明:以上三个诱导过程所需要的最佳激素浓度及配比分别为IAA、KT(激动素)、2,4-D各0.1mg/l或者ZT(玉米素)0.1mg/l、0.05mg/l IAA+0.1mg/l KT或者0.1mg/l ZT、不加入任何种类的激素或者尽量加入低浓度的激素....
摘要:研究通过花序浸染法,将EPSPS基因导入拟南芥(Arabidopsis thaliana)Col(Columbia)生态型植株中,通过卡那霉素对种子的抗性筛选及常规PCR对再生植株进行阳性鉴定.初步证明,EPSPS基因已经成功转化拟南芥,经过反复筛选,获得转基因纯系植株....
摘要:文章研究了以下胚轴为转化的外植体材料,根癌农杆菌介导的棉花遗传转化过程中,下胚抽、胚性愈伤组织(EC)、体细胞胚胎(胚状体)三种外植体不同的生长阶段,对卡那霉素(Kan)的敏感性差异.结果表明:体细胞胚胎(胚状体)对卡那霉素(Kan)最为敏感,下胚轴次之,胚性愈伤组织(EC)则最不敏感....
摘要:研究采用PCR法以拟南芥cDNA为模板扩增CAPC2基因片段,克隆至原核表达载体PET28a+上,经0.25、0.5mM IPTG分别在37℃和20℃诱导后,再使用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的表达水平.结果表明:原核表达载体PET28a+-GAPC2构建正确,并且能在大肠杆菌BL21中成功表达,其融合蛋白分子量为37KD....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:耐辐射戈壁异常球菌(Deinococcus gobiensis Ⅰ-0)是本研究室分离于戈壁沙漠环境中的微生物,对辐射、氧化和干旱等非生物胁迫有超强的抗性.该菌基因组合有2个冷激蛋白编码基因(csp1,Dgo_CA1136和csp2,Dgo_PA0041),编码蛋白均具有典型的冷激蛋白家族特有的结构域.本研究以戈壁异常球菌Ⅰ-0 Csp1为研究对象,研究表明Csp1能显著增强模式菌株大肠杆菌对低温、高盐、干旱等非生物胁迫的抗性;QRT-PCR分析显示在盐胁迫条件下Csp1表达菌株的海藻糖合成酶基因(otsA和otsB)表达显著上调,其降解基因(treB、treC)无显著变化.Csp1通过调控海藻糖代谢途径,促进渗透保护物的积累,可能是增强细胞盐、干旱等胁迫抗性的有效途径之一....
摘要:LEA3(group 3 late embryogenesis abundant proteins)是一类非生物胁迫响应蛋白,能够保护细胞免受胁迫损伤.戈壁异常球菌(Deinococcus gobiensis)I-0分离于干旱、温差大及强阳光辐射的戈壁沙漠环境,具有超强的耐受紫外(UV)辐射、电离辐射和干燥等胁迫的能力,其基因组中Dgo_CA1631基因编码蛋白LEA3具有一定同源性,将该蛋白命名为Dgl3,并对其生物学功能展开研究.非生物胁迫实验表明,Dgl3蛋白能够显著增强表达菌株BL21对氧化和冷冻胁迫的抗性,最大限度地保护宿主菌免受损伤.体外酶活保护实验结果进一步表明,氧化和反复冻融胁迫条件下Dgl3蛋白能够保护苹果酸脱氢酶(MDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性.因此推测,Dgl3蛋白通过保护细胞体内相关酶类的活性,增强宿主细胞对氧化和冷冻胁迫的抵抗能力....
摘要:耐辐射异常球菌(D.radiodurans R1)ktrA基因(DR_1666)编码的K+吸收蛋白在盐胁迫和渗透胁迫中起着重要作用.采用QRT-PCR分析表明在盐和D-山梨糖醇胁迫条件下,野生型菌株中ktrA基因表达均显著上调.同时采用融合PCR方法和同源重组技术,构建ktrA基因缺失突变株(△ktrA),以野生型菌株DR做对照,分别用不同浓度的氯化钾和D-山梨糖醇对突变株进行胁迫处理.结果显示,突变株△ktrA对氯化钾和D-山梨糖醇的敏感性明显高于野生型,表明ktrA基因在菌株耐受高盐和高渗透胁迫时起重要作用.该结果为深入研究D.radiodurans R1菌株中ktrA基因的功能提供了很好的基础....
摘要:耐辐射异常球菌疏水性LEA5C家族蛋白DrwH参细胞耐受氧化和盐胁迫过程.前期研究发现,DrwH蛋白N端存在19个氨基酸组成的类信号肽序列,为探索该序列对DrwH发挥抗氧化功能的影响,本研究通过对DrwH蛋白进行分段截短,构建含有不同区段的重组大肠杆菌菌株,比较分析重组菌株在正常培养和氧化胁迫下的生长能力.结果 表明,含有类信号肽序列的融合蛋白过量表达不仅抑制了大肠杆菌的生长,而且使DrwH蛋白失去抗氧化能力.荧光定量PCR显示经IPTG诱导后,合类信号肽全长蛋白DrwH和结构域蛋白WHy在转录水平大量累积,蛋白在过量积累条件下发挥其生物学功能.由此表明,类信号肽对全长蛋白DrwH表达及其发挥抗氧化功能具有重要影响....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:耐辐射异常球菌(D.radiodurans)超强的辐照抗性归因于其高效的DNA损伤修复系统,磷酸戊糖途径(PPP)作为细胞各种糖类代谢枢纽,是合成核苷酸和核酸所需的核糖以及生成细胞还原力(NADPH)的重要途径.为探究D.ra diodurans R1中PPP对DNA损伤修复的影响,本研究敲除PPP中编码限速酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的基因zwf,比较UV辐照后突变株△zwf野生型D.radiodurans的生理生化差异.结果表明,zwf突变导致菌株对UV辐照敏感;UV辐照后△zwf胞内NADPH、D-核糖、核苷酸合成前体IMP、UMP含量明显降低;葡萄糖酸-δ-内酯及D-核糖能完全和部分恢复△zwf的UV辐射抗性.综上可知PPP通过提供DNA损伤修复原料及还原力,在DNA损伤修复过程中起着重要作用.本研究结果为DNA损伤修复机理提供参考....
摘要:研究了在盐胁迫条件下外源水杨酸(SA)对水稻幼苗耐受性应答的影响.本研究以水稻为材料,用1 mmol/L的外源水杨酸对水稻幼苗叶片进行喷雾处理,静置24h后,经SA处理后的水稻幼苗再经过100 mmol/L的NaCl胁迫处理0-48 h.结果表明,经外源水杨酸处理的水稻幼苗,能显著增强体内脯氨酸(Pro)、可溶性蛋白的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)等保护酶的活性,显著降低丙二醛(MDA)的含量.表明在盐胁迫条件下,外源水杨酸能增强水稻幼苗自身抗氧化系统中酶的活性,减轻和缓解盐胁迫带来的伤害....
摘要:耐辐射异常球菌(D.radiodurans R1)osmC基因(DR_1538)编码的渗透诱导胁迫蛋白是一种在氧化胁迫中起重要作用的过氧化物酶.用PCR方法从耐辐射异常球菌中扩增出osmC基因的全长序列(441bp),采用原核表达系统对其进行表达纯化,获得了分子量大小约为18.7 kDa的带有His标签的融合蛋白.利用在线网站对OsmC蛋白的生物信息学分析,结果表明:OsmC蛋白由146个氨基酸组成,理论等电点为5.81,为亲水性蛋白;二级结构主要是由α-螺旋及不规则卷曲组成.OsmC蛋白的纯化及生物信息学分析为后续深入研究其功能奠定了基础....
摘要:通过露地盆栽试验,研究了转基因和非转基因油菜幼苗对土壤中不同浓度的133Cs或88Sr单一胁迫的生理响应.结果表明,在不同浓度的133Cs或88Sr处理时,随处理浓度的增加,不管是转基因还是非转基因油菜,其幼苗对133Cs或88Sr的吸收量都增加,其中二者根部的33Cs或88Sr含量均大于地上部分的含量,同时二者根部对88Sr的吸收大于对133Cs的吸收.但是转基因植株根系吸收133Cs或88Sr的含量大于非转基因油菜根系吸收量,转基因油菜地上部分的133Cs或88Sr含量却小于非转基因油菜地上部分的含量,表明转基因油菜根系更易于吸收和固着133Cs或88Sr,并向地上部分进行运输.随核素浓度增加,非转基因和转基因油菜苗叶片中的丙二醛含量逐渐增加,根系活力均表现为不断减弱,幼苗叶片的可溶性蛋白、POD和SOD活性都呈现先上升后下降的趋势;但在相同浓度的133Cs或88Sr处理后,转基因油菜的丙二醛含量总低于非转基因油菜,转基因油菜的可溶性蛋白含量、POD和SOD活性均高于非转基因油菜,同时转基因油菜的根系活力也略高于非转基因油菜.研究表明:转pprI基因油菜比非转基因油菜具有更强的应对133Cs或88Sr胁迫的抗性能力.本研究为进一步研究pprI基因的调控机理及该基因对137Cs成90 Sr协迫响应提供理论和实验基础....
摘要:研究了在盐胁迫条件下外源水杨酸(SA)对水稻幼苗耐受性应答的影响.本研究以水稻为材料,用1 mmol/L的外源水杨酸对水稻幼苗叶片进行喷雾处理,静置24h后,经SA处理后的水稻幼苗再经过100 mmol/L的NaCl胁迫处理0-48 h.结果表明,经外源水杨酸处理的水稻幼苗,能显著增强体内脯氨酸(Pro)、可溶性蛋白的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)等保护酶的活性,显著降低丙二醛(MDA)的含量.表明在盐胁迫条件下,外源水杨酸能增强水稻幼苗自身抗氧化系统中酶的活性,减轻和缓解盐胁迫带来的伤害....
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