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摘要:目的 研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ (CaMKⅡγ) RNA干扰对破骨细胞分化和骨吸收的影响.方法 构建3个CaMKⅡγ RNA慢病毒重组干扰载体;阴性载体转染RAW264.7细胞, 确定最适转染滴度值 (MOI) 和转染效率.用重组载体转染细胞, 确定干扰效果最佳的重组载体用于后续实验.细胞分为对照组、阴性载体组、干扰载体组;病毒转染5 d后通过TRAP染色及牙本质磨片骨吸收陷窝检测3组破骨细胞生成及骨吸收情况.结果 成功构建了3个CaMKⅡγ重组干扰载体;最适MOI值为30, 转染效率>80%.#3重组载体干扰效果最佳, 干扰效率在mRNA及蛋白水平分别为78.16%和67.02% (P <0.01) .3组细胞中, 干扰载体组多核破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数和面积较对照组分别下降了59.99%、54.19%和57.94% (P <0.01) , 而阴性载体组和对照组比较差异无显著性 (P> 0.05) .结论 CaMKⅡγ RNA干扰可显著抑制破骨细胞生成和骨吸收功能.
摘要:目的 比较结肠镜操作时注空气法、注水法、透明帽法与透明帽联合注水法在结肠镜检查中的效果,探究透明帽联合注水法对结肠镜操作质量的影响.方法 选取2015年9月至2016年8月在唐山市某三甲医院消化内科门诊及病房的结肠镜受检者400例为研究对象,将其按照就诊顺序分为4组,每组各100例.分别用注空气法、注水法、透明帽法、透明帽联合注水法行结肠镜操作.操作结束后对插镜时间、退镜时间、插镜深度、插镜成功率、黏膜损伤发生率、腹部疼痛评分及大肠腺瘤检出率进行评价.结果 透明帽联合注水法、透明帽法注、注水法及注空气法的插镜时间分别为(312.4±284.8)、(330.2±298.6)、(386.5±274.8)及(413.2±268.5)s;退镜时间分别为(498.4±66.8)、(474.9±60.2)、(502.6±76.4)及(468.5±72.6)s;腹痛评分分别为(2.8±2.4)、(3.2±2.1)、(3.5±1.8)及(4.4±3.2)分;大肠腺瘤检出率分别为35%、33%、21%、18%,4种方法比较差异均有统计学意义(P<0.05).在插镜深度、插镜成功率及黏膜损伤发生率等方面差异无统计学意义(P>0.05).结论 透明帽联合注水法可缩短结肠镜插镜时间、减轻受检者痛苦,提高大肠腺瘤检出率,可以在临床推广应用.
摘要:目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ(CaMKⅡγ)在破骨细胞分化中的表达规律,以揭示其作用.方法:用50 ng/mL核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,于诱导后第0,1,3,5天收获细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价破骨细胞生成情况,并用RT-PCR、Western印迹、免疫荧光细胞化学法检测CaMKⅡγ mRNA和蛋白表达.结果:多核破骨细胞在诱导后第3天开始出现,第5天达到最多.分化第0,1,3,5天,CaMKⅡγ mRNA相对表达水平分别为(1.067±0.179),(1.840±0.070),(9.493±0.453)和(30.767±0.573);蛋白相对表达水平分别为(0.454±0.065),(0.613±0.021),(0.858±0.019)和(0.980±0.023);除第1天的蛋白相对水平外,其他时间点CaMKⅡγ mRNA和蛋白表达差异均有统计学意义,且呈时间依赖性增强(P<0.01).免疫荧光细胞化学法检测也显示CaMKⅡγ蛋白表达在破骨细胞分化过程中逐步增加.结论:CaMKⅡγ表达随破骨细胞分化呈时间依赖性增加,提示其在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用.
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CSTPCD 北大核心
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摘要:目的 研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞分化中钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)以及下游信号基因表达的影响.方法 将小鼠破骨前体细胞RAW264.7细胞分为对照组和ZOL组;两组细胞均用50 μg/L核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导与第5天收获,ZOL组同时加用1×10-6mol/L ZOL处理2d.5d后收获细胞,检测破骨细胞生成及CaMKⅡδ、活化T细胞核因子蛋白c1(NFATc1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及c-Src基因表达情况.结果 ZOL组TRAP+多核破骨细胞数目、牙本质吸收陷窝数目和面积分别是(20.0±3.2)、(18.0±4.2)和(6 335.3士1 043.2)μm2,显著低于对照组的(36.0±8.4)、(37.2±5.0)和(11 636.2±3 661.1)μtm2(P<0.05或P<0.01),分别下降了44.4%、51.6%和45.6%.ZOL处理还使破骨细胞分化中CaMKⅡδ及下游因子NFATc1、TRAP和c-Src基因表达产生显著抑制,mRNA水平分别下降了44.1%、49.0%、53.8%和49.6%(P<0.05或P<0.01),蛋白水平分别下降了43.5%、32.2%、45.5%和48.0%(P<0.05或P<0.01).免疫荧光化学检测显示ZOL组CaMKⅡδ、NFATc1、TRAP和c-Src的荧光强度较对照组也明显减弱.结论 ZOL可显著抑制破骨细胞生成和骨吸收功能,并下调破骨细胞分化中CaMKⅡδ及下游NFATc1、TRAP和c-Src基因表达.
摘要:目的 探讨唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)与钙调蛋结合及下游活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activation of T cells-1,NFATc1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)基因表达的影响,探索其抑制破骨细胞分化的分子机制.方法 将小鼠RAW264.7细胞分为A、B两组,每组均以5x103个/孔接种于直径为30 mm的培养皿中培养.A组(对照组)在NF-κB受体激活蛋白配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导下向破骨细胞形成,B组(唑来膦酸组)在RANKL诱导培养1d后加用1×10-6mol/L唑来膦酸处理2d.应用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)及反向Co-IP对CaMKⅡ与钙调蛋白的结合进行分析;应用蛋白质印迹法及免疫荧光细胞化学检测两组NFATc1、TRAP蛋白表达,并对破骨细胞生成进行评价.结果 B组新生多核破骨细胞数、牙本质吸陷窝数和面积分别为(11.3±1.5)个、(8.7±2.1)个和(5 034.4±775.4) μm2,均显著低于A组[分别为(37.7±5.7)个、(23.0±4.0)个和(15 042.7±1 906.0) μm2](P<0.01).Co-IP及反向Co-IP检测显示,B组CaMKⅡ与钙调蛋白的结合较A组分别显著下降了59.8%和50.9%(P<0.01);在总蛋白中,B组钙调蛋白与CaMKⅡ蛋白较A组,分别显著降低了52.1%和51.5%(P<0.01).NFATc1、TRAP蛋白水平B组较A组显著下降了52.4%和38.9%(P<0.01);免疫荧光化学检测也显示B组蛋白表达强度较A组弱.结论 唑来膦酸可以显著抑制破骨细胞分化中CaMKⅡ与钙调蛋白的结合,并下调下游NFATc1、TRAP的蛋白表达.
摘要:大学艺术教育是大学教育中的一个重要组成,对培养学生的创新性,发展学生的综合素质等都能够产生非常积极的作用。然而现阶段,我国高校在艺术教育培养创新人才方面存在问题,这无疑会制约大学艺术教育事业的发展,也会对创新人才的培养效果产生不良影响。因此,广大教育者应深入研究现阶段大学艺术教育在培养创新人才方面存在的问题,基于问题及时设计应对措施,提高大学艺术教育的实效性。
摘要:第四次产业革命的来临,对人才培养提出了新的要求,大学生文化创造力水平的高低不仅会影响大学生自身的发展,还会影响国家未来的竞争力,因而培养的重要性显而易见。现阶段,我国大学生普遍存在文化创造力不足问题,积极采取措施提高大学生的文化创造力重要且必要,高校方面需要予以重视。
摘要:① 目的 探讨基于微信的健康教育对结肠镜检查者心身健康的影响.② 方法 选取2016年6~12月在唐山市某三甲医院行结肠镜检查的80例患者为研究对象,将其随机分为对照组(40例)和干预组(40例).对照组按照传统护理干预模式进行肠道准备教育,干预组在此基础上通过微信给予肠道准备教育,比较两组受检者结肠镜检查知识知晓状况 、肠道清洁度 、疼痛程度 、不良反应发生率及焦虑水平等.③ 结果 干预后,干预组患者结肠镜知识知晓状况 、肠道清洁度 、腹胀发生率及焦虑水平均明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);疼痛程度和不良反应发生率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).④ 结论 基于微信的肠道准备教育在改善患者肠道准备质量的同时,减轻了患者对结肠镜检查的不适反应,是一种比较适宜的肠道准备教育干预方式.
摘要:国内外文献对于牙周炎与骨质疏松症之间的关系尚不确切,本研究的目的是通过寻找最佳证据系统评价牙周炎与骨质疏松症的相关性.检索2016年5月之前在PubMed、The Cochrane Library、CBM、CNKI、万方数据库中发表的文献,语言是英语和汉语.2名研究者分别按照纳入和排除标准进行文献筛选、质量评价、数据提取,共检索到305篇文献,初步纳入文献29篇,全文阅读后最终纳入7篇文献,采用Revman 5.3软件进行数据分析并绘制森林图,效应指标是OR值和95%CI.共纳入7篇文献,合计3 779例研究对象,其中病例组906例,对照组2 873例.本研究表明牙周炎与骨质疏松症之间具有显著的相关性(OR=1.70,95%CI [1.36,2.13],p<0.000 01).
摘要:校园文化具有导向功能、教化功能、激励功能及人格塑造功能等德育功能。通过营造校园物质文化、培育制度文化、培养精神文化三个主要途径达到实现校园文化德育功能的目的。
[硕士论文] 王会
口腔临床医学 华北理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Calmodulin-dependent kinase Ⅱ,CaMKⅡ)γRNA干扰对破骨细胞生成、骨吸收功能以及下游信号分子活化T-细胞核因子c1(Nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic1,NFATc1)、非受体酪氨酸激酶(cell-sarcoma receptor coactivator,c-Src)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)基因表达的影响,以证实CaMKⅡγ在破骨细胞分化中的关键调控作用和分子机制。
  方法:
  1.破骨细胞分化中CaMKⅡγ基因表达规律研究。应用50ng/ml受体活化核因子-κB配体(Receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化,并于诱导第0d、1d、3d、5d四个时间点收获细胞,采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光细胞化学法检测破骨细胞分化中CaMKⅡγ基因的表达规律。
  2.唑唻膦酸对破骨细胞分化及相关基因表达影响的研究。小鼠RAW264.7细胞分为两组:A组为对照组,B组为唑来膦酸处理组。两组细胞均用50ng/ml RANKL诱导细胞向破骨细胞分化;B组在培养1d后,加用1×10-6mol/L的唑来膦酸处理2d,然后撤掉唑来膦酸,继续培养。于第5d、7d收获细胞进行相关检测。应用TRAP染色、牙本质磨片吸收陷窝检测评价两组细胞破骨细胞生成及骨吸收情况;并通过实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光细胞化学检测两组细胞CaMKⅡγ、NFATc1、TRAP、c-Src基因表达情况。
  3.唑来磷酸对破骨细胞分化中CaMKⅡ和Colmodulin蛋白结合的影响。小鼠RAW264.7细胞分为A、B两组:A组为对照组,B组为唑来磷酸处理组。两组均用50ng/ml RANKL诱导,B组在1d后加用1×10-6 M唑来膦酸处理2d。应用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)及反向Co-IP对CaMKⅡ与Colmodulin蛋白结合进行分析。
  4.CaMKⅡγ RNA干扰对破骨细胞分化及相关基因表达的影响。应用携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体构建三个CaMKⅡγ重组RNA干扰载体。阴性载体转染RAW264.7细胞,确定最适的病毒转染滴度MOI值和转染效率。在最佳MOI值下用CaMKⅡγ重组RNA干扰载体转染RAW264.7细胞,通过实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测破骨细胞向分化中三个CaMKⅡγ重组载体的干扰效果,确定干扰效果最佳的重组干扰载体,用于下一步实验。实验分为A、B、C三组:A组为对照组、B组为阴性载体组、C组为干扰载体组。细胞转染12小时后,换用含50ng/ml RANKL的培养基诱导细胞向破骨细胞分化,并于诱导5天后收获细胞。通过TRAP染色及牙本质磨片吸收陷窝检测评价三组细胞破骨细胞生成及骨吸收情况;通过实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光细胞化学检测三组细胞CaMKⅡγ及其下游相关基因NFATc1、TRAP、c-Src基因表达情况。
  结果:
  1.破骨细胞分化第0d、1d、3d、5d,CaMKⅡγ mRNA水平分别为1.067±0.179、1.840±0.070、9.493±0.453和30.767±0.573;蛋白水平分别是494.567±20.121、663.533±38.741、858.600±19.367和980.367±23.403;与第0d比较,除第1d蛋白水平外(P>0.05),各时间点mRNA水平(P<0.01)及蛋白水平(P<0.01)均呈时间依赖性表达增强。免疫荧光检测显示第0d和1d蛋白表达较弱,而在第3d和第5d蛋白表达强度明显增加,并有多核破骨细胞形成。
  2.唑唻膦酸处理下B组多核破骨细胞数、牙本质吸陷窝数目和面积分别为11.33±1.52(个)、8.66±2.08(个)和5034.35±775.42μm2,较对照组的37.66±5.68(个)、23.00±4.00(个)和15042.71±1906.03μm2显著减少(P<0.01),下降幅度分别为69.91%、62.60%和66.53%。唑来膦酸对破骨细胞分化过程中CaMKⅡγ及其下游因子NFATc1、TRAP和c-Src mRNA及蛋白水平也产生了抑制作用;与A组比较,B组上述4个基因mRNA水平分别下降了44.603%、54.126%、58.942%和51.546%(P<0.01);蛋白水平分别下降了46.127%、36.799%、27.140%和32.060%(P<0.01);免疫荧光细胞化学也证实B组蛋白水平明显下降。
  3.Co-IP及反向Co-IP检测显示,B组CaMKII与Calmodulin蛋白结合较A组显著降低,分别下降了59.75%和50.87%(P<0.01);在总蛋白中,B组Calmodulin与CaMKⅡ蛋白较A组也显著下降,分别降低了52.12%和51.49%(P<0.01)。
  4.本实验成功构建了CaMKⅡγ重组慢病毒干扰载体。最适病毒滴度MOI值是30,其转染效率>80%。经实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测,#3重组载体对CaMKⅡγ干扰效果最佳,干扰效率在mRNA及蛋白水平分别为78.158%和62.226%;因而应用#3重组干扰载体进行下面实验。经转染后,三组细胞中C组(干扰载体组)多核破骨细胞数、牙本质吸陷窝数目和面积在分别为10.670±1.52(个)、87.330±1.528(个)和4922.000±64.086μm2,显著低于B组(阴性载体组)的22.670±1.2528(个)、12.670±2.082(个)、0924.330±66.905μm2和A组(对照组)的26.670±1.528(个)、16.000±1.000(个)、11980.000±70.000μm2(P<0.05);而A组和B组之间无显著性差异(P>0.05)。CaMKⅡγRNA干扰显著抑制了CaMKⅡγ及其下游因子NFATc1、TRAP、c-Src的表达。实时荧光定量PCR检测表明C组CaMKⅡγ、NFATc1、TRAP、c-Src mRNA水平较A组分别下降了79.872%、49.856%、43.649%和53.567%(P<0.01);蛋白质印迹法检测显示C组上述4个基因蛋白水平较A、B组也显著减弱(P<0.01),下降幅度与B 组比较分别为61.70%、54.22%、46.75%和45.86%;免疫荧光化学检测也证实C组上述基因荧光强度明显弱于A、B组。
  结论:
  1.CaMKⅡγ在破骨细胞分化中呈时间依赖性表达增强,提示其在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用;
  2.唑来膦酸可显著抑制破骨细胞生成、骨吸收及CaMKⅡγ、NFATc1、c-Src、TRAP基因表达;上述基因可能参与了唑唻膦酸对破骨细胞的抑制;
  3.唑来膦酸可显著抑制破骨细胞分化中CaMKⅡ与Calmodulin的蛋白结合,这可能与其诱发的破骨细胞抑制有关;
  4.CaMKIIγ RNA干扰可显著抑制破骨细胞生成、骨吸收功能及下游基因NFATc1、c-Src、TRAP的表达;上述基因可能介导了CaMKⅡγ对破骨细胞分化的调控。
摘要:牙周炎和骨质疏松症是全球性公共卫生问题,严重影响着中老年人的健康.随着社会人口老龄化的增长,牙周炎和骨质疏松症的发病率也在逐渐增高,骨丧失是两种疾病的共同特征,且两者之间有一些共同的危险因素,如增龄、吸烟和内分泌等,这些危险因素影响着牙周炎和骨质疏松症的发生发展.近年来的研究表明牙周炎与骨质疏松症间存在着一定的关系,但国内外文献对牙周炎和骨质疏松症之间的具体关系尚存在争议,本研究对牙周炎与骨质疏松症之间的关系作一综述.本研究所说的骨质疏松是原发性骨质疏松症.
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