绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 1
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 2 条结果
摘要:为了研究分枝杆菌热休克蛋白(Hsp70)对猪圆环病毒2型(PCV2) Cap蛋白的免疫佐剂作用,以自聚肽ELK16为纯化标签,分别与Hsp70和PCV2 Cap基因融合后诱导表达,利用离心洗涤法进行融合蛋白纯化,获得了纯化的融合蛋白ELK16-Cap、ELK16-Hsp70和ELK16-Cap-Hsp70,其纯度高达95%、96%和85%,产量分别为92、84和83 mg/L;接着用PBS、ELK16-Cap、ELK16-Cap+弗氏不完全佐剂(IFA)、ELK16-Cap+ELK16-Hsp70和ELK16-Cap-Hsp70分别免疫小鼠,初免后21 d ELK16-Cap-Hsp70免疫组抗体水平达到最高;在二免后2周取免疫小鼠脾脏淋巴细胞,用试剂盒检测细胞因子表达,TNF-α浓度依次为588.55、802.55、995.55、1 382.55和1 719.55 pg/mL,IFN-γ浓度依次为46.30、92.22、155.56、470.37和518.15 pg/mL,IL-12浓度依次为14.72、28.06、20.83、31.39和34.72 pg/mL.这些研究结果表明,Hsp70对刺激PCV2 Cap蛋白ELISA抗体产生的作用优于IFA,但两者融合蛋白的刺激作用较强;与Cap蛋白融合的Hsp70对刺激TNF-α、IFN-γ和IL-12产生的作用较强,而ELK 16-Hsp70+ELK 16-Cap对3种细胞因子产生的刺激作用次之....
[硕士论文] 王亚杰
微生物学 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:猪圆环病毒2型(PCV2)是猪皮炎与肾病综合征(PDNS)、断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等猪病的主要病原。PCV2在世界范围内流行,给养猪业造成了巨大的经济损失。目前PCV2防控主要依靠疫苗免疫,上市的疫苗有全病毒灭活苗、重组嵌合苗和亚单位疫苗,其中制备全病毒灭活苗所用病毒滴度较低,制备成本较高;大肠杆菌和昆虫细胞/杆状病毒表达系统生产的亚单位疫苗工艺复杂、价格高昂,因此研制安全、高效的新型PCV2亚单位疫苗很有必要。
  自聚肽ELK16能在大肠杆菌内形成活性包涵体,其融合蛋白可用离心洗涤法纯化。结核杆菌热应激蛋白70(Hsp70)是重要的病原相关分子模式,通过Toll样受体2(TLR-2)刺激先天性免疫细胞,释放TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10和IL-12等细胞因子具有免疫佐剂作用。本研究以自聚肽ELK16为纯化标签,用于PCV2Cap蛋白和结核分枝杆菌Hsp70的融合表达和纯化,旨在简化PCV2亚单位疫苗和Hsp70分子佐剂的制备工艺。进而以小鼠为动物模型,评价分子佐剂对候选亚单位疫苗的免疫佐剂作用,为PCV2新型亚单位疫苗研制奠定基础。
  以自聚肽ELK16为纯化标签,分别与结核分枝杆菌Hsp70和PCV2Cap基因融合,在重组大肠杆菌中进行诱导表达。在优化条件下,利用离心洗涤法进行融合蛋白纯化,获得了纯化的融合蛋白ELK16-Cap、ELK16-Hsp70和ELK16-Cap-Hsp70,其纯度高达95%、96%和85%,产量分别为92mg/L、84mg/L和83mg/L细菌培养。分别用ELK16-Cap、ELK16-Cap+弗氏不完全佐剂(IFA)、ELK16-Cap+ELK16-Hsp70和ELK16-Cap-Hsp70免疫小鼠,设PBS对照组。初免后7、14、21和28天采血分离血清,用间接ELISA进行抗体检测,结果显示:在初免后7天,IFA+ELK16-Cap和ELK16-Hsp70+ELK16-Cap免疫组即为ELISA抗体检测阳性,其他三组为特异抗体阴性;从初免后14天开始,四个免疫组的抗体水平呈逐渐上升趋势,其中ELK16-Hsp70+ELK16-Cap免疫组抗体水平最高,IFA+ELK16-Cap免疫组次之,ELK16-Cap免疫组抗体水平最低;从初免后21天开始,四个免疫组的抗体水平进一步上升,ELK16-Cap-Hsp70免疫组抗体水平最高,ELK16-Hsp70+ELK16-Cap免疫组抗体水平次之,ELK16-Cap免疫组抗体水平最低。在二免后两周取免疫小鼠脾脏淋巴细胞,用试剂盒检测细胞因子表达。结果显示:PBS对照组、ELK16-Cap免疫组、ELK16-Cap+IFA免疫组、ELK16-Hsp70+ELK16-Cap免疫组和ELK16-Cap-Hsp70免疫组的TNF-α浓度分别为588.55、802.55、995.55、1382.55和1719.55pg/mL,IFN-γ浓度分别为46.30、92.22、155.56、470.37和518.15pg/mL,IL-12浓度分别为14.72、28.06、20.83、31.39和34.72pg/mL。这些研究结果表明,分子Hsp70对刺激PCV2Cap蛋白ELISA抗体产生的作用优于IFA,但两者融合蛋白的刺激作用较强;与Cap蛋白融合的Hsp70对刺激TNF-α、IFN-γ和IL-12产生的作用较强,而ELK16-Hsp70+ELK16-Cap对三种细胞因子产生的刺激作用次之。
  为了优化PCV2重组抗原的抗原性,将His标签与PCV-2a、PCV-2d、PCV-2e中和表位和PCV-2b Cap基因进行融合表达,并将结核分枝杆菌Hsp70基因与4Cap-His进行融合表达,利用亲和层析法纯化得4Cap-His、Hsp70-His和4Cap-hsp70-His融合蛋白。将30只小鼠分为5组,分别为PBS对照组、4Cap-His免疫组、4Cap-His+Hsp70-His免疫组、4Cap-hsp70-His组和4Cap-His+IFA免疫组。初免后7和14天采血,用间接ELISA测定Cap蛋白特异抗体;在二免后14天取免疫小鼠脾淋巴细胞,用试剂盒测定细胞因子浓度。每组三只免疫小鼠用2×103TCID50PCV2b攻毒,第3和7天采血分离血清,用定量PCR检测病毒血症。结果显示:在初免后第七天,4Cap-His+Hsp70-His和4Cap-hsp70-His即为ELISA抗体检测阳性,其他三组为抗体检测阴性;初免后14天,对照组和4Cap-His免疫组仍为抗体检测阴性,4Cap-His+IFA免疫组为抗体检测阳性,但低于4Cap-hsp70-His免疫组;从初免后21天,四个免疫组的抗体水平明显上升,其中4Cap-hsp70-His免疫组的抗体水平最高。与对照组相比,四个免疫组的TNF-α、IFN-γ和IL-12表达水平明显上升,并高于刀豆蛋白A刺激组。与对照组相比,所有含4Cap重组蛋白的免疫组血清中病毒载量均呈降低趋势,攻毒后7天比3天明显下降,4Cap-hsp70-His免疫组病毒载量下降最多,4Cap-His+Hsp70-His免疫组次之,4Cap-His免疫组病毒载量下降最低。这些研究结果表明,ELK16标签对Hsp70刺激PCV2Cap蛋白ELISA抗体产生无明显影响,两种方式融合Hsp70的体液免疫刺激作用优于IFA,均能刺激小鼠产生TNF-α、IFN-γ和IL-12表达,并且Hsp70融合PCV2Cap蛋白的刺激作用较强。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

万方选题

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部