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摘要:目的 获得粉尘螨(Dermatophagoides farinae)变应原Der f 8全长基因并构建其原核表达质粒.方法 参考GenBank登录号为AY283295的Der f8部分序列设计并合成引物.以粉尘螨总RNA为模板,RT-PCR扩增获得Der f 8部分片段.采用5'cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得Der f 8全长序列,连接至pMD19-T载体,热转化至大肠埃希菌(Escherichia coli),挑取阳性菌落,抽提质粒后测序.根据Der f 8全长序列设计并合成引物,以粉尘螨总RNA为模板进行RT-PCR扩增,产物回收后连接pCold TF载体,热转化至E.coli涂板过夜培养后,挑取阳性菌落,抽提质粒后测序.将pCold TF-Der f 8质粒转化至E.coliBL21,异丙基-3-D-硫代半乳糖苷诱导表达,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物.采用生物信息学软件预测Derf 8的理化特性、结构和功能,并构建系统进化树.结果 以Der f 8部分序列设计的引物行RT-PCR扩增获得Der f 8部分片段,长度为600bp;5'RACE获得Der f 8剩余序列,长度为300 bp;以全长基因序列设计的引物进行RT-PCR扩增获得了Der f 8基因CDS区,长度为696 bp,测序均正确.SDS-PAGE结果显示,目的蛋白为可溶性表达,相对分子质量(Mr)为81 000,与预期大小一致.序列经生物信息学分析结果显示,Der f 8全长序列与参考序列(GenBank登录号为AY283295)同源性为98.49%,预测其编码的疏水性蛋白具有谷胱甘肽S转移酶活性,二级结构包括α-螺旋(45.45%)、延伸主链(11.26%)和无规卷曲(43.29%).系统进化树结果显示,粉尘螨与户尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)聚成一簇. 结论 获得了Der f 8全长基因及其原核表达质粒....
摘要:目的:克隆表达粉尘螨变应原第7组分(简称Der f 7)重组蛋白,制备抗Der f 7单克隆抗体,并进行鉴定.方法:用pET28a(+)-Der f 7原核表达体系表达Der f 7重组蛋白,以此免疫BALB/c小鼠,将骨髓瘤细胞和脾细胞融合,经ELISA法筛选杂交瘤细胞.用杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔,获得腹水,经蛋白A琼脂糖介质纯化,后鉴定抗体的效价、纯度,采用免疫印迹法鉴定抗体的特异性.结果:获得三株稳定分泌重组Der f 7单克隆抗体的杂交瘤细胞,产生的抗体纯度高,效价高于1∶243 000.Western blot显示能很好地识别Der f 7重组蛋白.为Der f 7变应原的定量、定位及相关过敏性疾病的诊疗奠定基础.结论:成功获得粉尘螨变应原第7组分(Der f7)重组蛋白单克隆抗体,且抗体效价纯度及特异性较好....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的 探讨急性游泳运动对小鼠心肌电压依赖性钾离子通道E家族成员1(KCNE1)表达水平的影响.方法 雄性BALB/c小鼠42只,随机分7组,每组6只.非运动为对照组,余6组于急性游泳运动30min后即刻(A组)、1h(B组)、3h(C组)、6h(D组)、12h(E组)和24 h(F组)取心肌组织;用RT-PCR和Western blot技术分别检测各组小鼠心肌KCNE1的表达水平.结果 与对照组相比,A、C和D组心肌KCNE1表达水平明显升高(P<0.05).结论 急性运动引起心肌KCNE1表达水平一过性升高,可能是交感紧张增强后心脏电生理活动发生改变的原因之一....
摘要:目的:研究小鼠心肌细胞上七种Mg2+转运体mRNA在不同发育时期的表达情况.方法:提取不同发育时期小鼠心脏组织mRNA,用七对Mg2+转运体特异性引物进行RT-PCR扩增,经凝胶成像仪进行凝胶荧光定量检测.结果:经RT-PCR半定量检测后,观察到小鼠心肌细胞上七种转运体mRNA在不同时期都有不同程度的表达,其中TRPM7和MagT1两种转运蛋白在各个时期表达较稳定,并且表达量明显高于其他五种Mg2+转运体.结论:TRPM7和MagT1在小鼠心肌细胞不同发育时期Mg2+调控过程中可能发挥主导作用....
摘要:目的 采用Meta分析对1982-2015年发表的有关我国人居环境中螨类分布的流行病学文献进行归纳汇总,综合分析我国人居环境中尘螨分布情状. 方法 收集公开发表的有关我国人居环境螨类分布文献,采用Meta Analyst Beta 3.13软件Meta分析法分析我国人居环境螨类分布状况,运用Arcview GIS 3.3绘制我国人居环境螨类孳生率、孳生密度分布地图. 结果 纳入34篇文献,总标本量25 102份,我国人居环境螨类孳生率加权合并值为60.3%(95 %CI:54.9%-65.5%),其中南部城市螨类孳生率71.4%(95%CI:58.9%-81.3%),中东部孳生率61.8% (95%CI:54.7%-68.5%),北部孳生率40.3%(95%CI:25.8%-56.6%),屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)和粉尘螨(D.farinae)是我国人居环境中广泛分布的优势螨种,南部与中东部城市的尘螨优势螨种多样化趋势明显,5 7月均存在尘螨孳生高峰,而北部地区的高峰期在9月份. 结论 我国不同地理区域人居环境中螨类种群分布具有多样性,季节消长趋势也有所不同,可为螨类过敏性疾病的防治提供参考....
[硕士论文] 滕飞翔
生物学;生理学 东南大学 2011(学位年度)
摘要:MagT1,是一种特异性通道样Mg2+转运体,含有335个氨基酸,分子量为38KDa。它含有4个跨膜区域,N末端和C末端都在细胞外。MagT1在哺乳动物的各组织和器官中有广泛表达,可能与Mg2+转运入细胞有关。Mg2+是一种对心肌细胞生命活动有重要影响的二价阳离子,特别是对心肌细胞的离子通道。临床观察表明,当心肌细胞内游离Mg2+浓度低于生理水平(0.4-1.0mM)时,会导致心律失常等症状。
   本研究发现,MagT1在大鼠和小鼠心肌细胞均有较高的表达。在各个发育时期的大鼠心肌细胞中,MagT1表达水平呈相对稳定,说明MagT1可能在维持心肌细胞Mg2+内稳态过程中起重要的作用。我们应用siRNA下调大鼠心肌细胞中的MagT1后观察到心肌细胞内Mg2+浓度出现明显下降,其中48h下降了24%(p<0.05),60h下降了36%(p<0.01)。伴随着心肌细胞Mg2+浓度的下降,心肌细胞还出现了凋亡,siRNA下调MagT148h和60h后:细胞凋亡率分别达到31.2%(p<0.01)和40.6%(p<0.01),比对照细胞有显著提高。我们在调查凋亡的信号通路时发现,凋亡细胞的线粒体膜电位显著降低,其中48h下降了21%(p<0.05),60h下降了30%(p<0.01)。而caspase-9活性则在60h后有显著提高。这说明线粒体介导的信号通路参与了心肌细胞凋亡。另外,我们把心肌细胞培养液中的Mg2+浓度由1mM增加为10mM时,细胞的凋亡率会显著降低,其中48h下降了8.4%(p<0.05),60h下降了13.9%(p<0.05)。这说明下调MagT1所致的胞内Mg2+下降可能是诱发细胞凋亡的上游起始信号。 以上结果提示:①MagT1是心肌细胞的重要镁离子转运体,其功能与心肌细胞内的Mg2+摄入/平衡有关;②siRNA下调大鼠心肌细胞MagT1后,会使细胞内Mg2+浓度显著降低并伴随有细胞凋亡,机制与线粒体凋亡信号通路有关。其对心肌细胞电生理的影响尚待进一步研究。
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