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摘要:目的 探寻细胞体外生长理想的三维支架结构的.方法 人脂肪细胞外基质的制备:通过物理、化学、酶处理联合的方法进行脂肪组织脱细胞处理,获得人脂肪细胞外基质成分,制备成基质材料;并对人脂肪细胞外基质材料进行评价.采用CCK-8法检测基质材料的细胞毒性,观察基质材料的体外黏附情况;采用Ki67染色来观察hADSC-gfp在基质材料的增殖情况,观察脂肪间充质干细胞的分化功能.结果 (1)脂肪组织经脱细胞处理可制备不同形状的基质材料.(2)基质材料脱细胞彻底.(3)基质材料中含丰富的胶原蛋白、层黏连蛋白等有效成分.(4)基质材料无细胞毒性;细胞在基质材料上的黏附及增殖能力强;接种基质材料上的脂肪来源干细胞可诱导向表皮细胞分化.结论 人脂肪细胞外基质制作方法简单,脱细胞较彻底,有效成分保留较好,无细胞毒性,易于细胞黏附、增殖及分化....
[硕士论文] 温艳玲
外科学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:通过系统化的方式将脂肪组织进行脱细胞处理,提取细胞外基质成分,制备脱细胞基质材料,通过组织学、细胞学及动物学检查,证实人脂肪脱细胞基质材料有利于促进体细胞及干细胞的粘附、增殖、迁移及干细胞的分化,有利于促进SD大鼠全层皮肤缺损的创面愈合,可作为理想的组织修复材料之一。
  方法:通过乳糜化处理、胰酶消化、异丙醇萃取等相关处理进行脂肪组织脱细胞化,提取细胞外基质成分,冻干制成脂肪脱细胞基质材料。通过HE染色、DAPI染色、油红O染色、扫描电镜观察评价脱细胞基质材料内细胞及细胞成分清除情况。通过病理切片染色进行细胞外基质主要成分胶原蛋白的定性检测。通过体外条件下在脱细胞基质材料上接种人脐静脉内皮细胞,观察不同时间段人脐静脉内皮细胞与细胞基质材料的粘附及增殖情况。通过诱导接种到脱细胞基质材料上的人脂肪干细胞向脂肪细胞分化,观察脱细胞基质材料促进脂肪干细胞分化功能。建立SD大鼠全层皮肤缺损模型,设立自愈组、脂肪脱细胞基质材料组、人脂肪干细胞组,比较不同组间创面愈合时间及病理学改变,观察脂肪脱细胞基质材料在促进创面愈合的作用。
  结果:通过乳糜化处理、胰酶消化、异丙醇萃取后制备的脂肪脱细胞基质材料脱细胞彻底,无细胞及细胞成分残留,细胞外基质的主要成分胶原蛋白保存较好,具有适宜细胞良好生长的孔径,有利于促进体细胞及干细胞的粘附、迁移、增殖及干细胞分化的能力,并具有促进血管内皮细胞呈现“管腔”样分布。脱细胞基质材料能够有效的促进SD大鼠全层皮肤缺损的创面愈合,并能较好的改善创面愈合的质量。
  结论:研究结果表明脂肪脱细胞基质支架材料脱细胞彻底,有效成分保留良好,具有良好的生物相容性,有利于促进体细胞及干细胞的粘附、迁移、增殖及干细胞分化的能力,并可以有效的促进SD大鼠全层皮肤缺损创面愈合,并能较好的改善创面愈合的质量,可作为创面修复良好的生物支架材料。
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