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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA EI CBST
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摘要:利用微通道结合结晶致孔方法制备了孔隙发达、粒径分布均匀的聚甲基丙烯酸羟乙酯(pHEMA)晶胶微球.晶胶微球平均粒径924.4μm,一致性多分散系数0.21.晶胶微球填装于直径10 mm层析柱内,填充高度91 mm;经甲基丙烯酸二甲氨乙酯(DMAEMA)修饰后应用于三磷酸腺苷(ATP)分离.层析过程流速为2 cm?min?1,以0.01 mol?L?1 HCl为缓冲液,分别用0.03 mol?L?1和1 mol?L?1 NaCl溶液进行洗脱.利用晶胶微球填充床从三组不同ATP含量转化液中可获得纯度达93.4%~96.9%的ATP,总回收率为47.0%~82.7%....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA EI CBST
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摘要:气液两相流流型预测是微流动系统设计和控制的基础.实验在带有“十”字形和“T”字形的矩形微通道(主通道水力直径0.29 mm)内,以氮气作为气相,分别以乙醇-表面活性剂水溶液或丙酮-表面活性剂水溶液为互溶混合液相,对气液两相流型及转换边界进行了研究.气相表观速度和混合液相表观速度分别在0.012~22.391 m·s-1和0.006~1.508 m·s-1,利用可视化研究方法,观察到泡状流、弹状流、扰动流及分层流四种流型,并绘制出流型图,将所得流型图与文献中的流型转变边界线作了比较.利用文献中流型转变关联式预测实验条件下流型边界,发现其对弹状流向扰动流转变的预测较为符合,并通过韦伯准数修正关联式得出本实验中弹状流向扰动流转变的流型边界....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:为了鉴定耐辐射奇球菌类胡萝卜素C3',4'-脱氢酶(DR2250)催化底物的特异性,利用PCR方法将dr2250基因的克隆到载体pUC19上,形成了重组载体pUC-CRTD.利用质粒共转化方法将不同组合的质粒pACCRT-EBIEu、pRK-CRTC和pUC-CRTD转化到大肠杆菌中,筛选阳性克隆并提取其色素进行产物分析.结果表明,DR2250修饰的底物具有选择性,它不能以未经过羟基化修饰的直链类胡萝卜素为底物,而能在Cl(1')羟基修饰的羟基化类胡萝卜素的基础上进行C3',4'-脱氢反应....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA EI CBST
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摘要:研究了一种用T型微通道制备固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles,SLN)的新方法.以softisan100(C_(10)~C_(18)的混合脂)丙酮溶液作为脂相,以Poloxamer 188水溶液为水相,用注射泵分别将脂相和水相注入T型通道的主道和支道内,两相在交叉口接触后形成明显的相界面,并继续沿主道向前流动.脂相中丙酮通过相界面迅速向水相扩散,随着流体的向前运动,脂相中脂的浓度不断增大至过饱和而形成固体脂质纳米粒(SLN).实验考察了两相流速和微通道尺寸对SLN粒径大小和粒径分布的影响.结果表明:在实验条件下,制得的SLN粒径在110~350 nm之间,多分散性指数小于0.24;T型通道交叉口的流场分布受两相相对流速的影响,并直接影响成粒规律,在不出现两相返混条件下,保持水相流速不变,SLN粒径随脂相流速增大而增大;保持脂相流速不变,粒径随水相流速的增大略有增大;通道尺寸越小所制得粒径也越小....
[成果] 1500290127 浙江
O629.4 基础研究 自然科学研究与试验发展 公布年份:2014
成果简介:类胡萝卜素是由八个类异戊二烯单位构成的碳氢化合物及其衍生物,类胡萝卜素是生物体内活性氧的重要清除剂,但是人体自身不能合成类胡萝卜素,必须通过外界摄入,补充物质能有效地预防癌症的发生,因此,类胡萝卜素具有广泛的医疗、保健、营养等价值。随着国家对化学合成色素的逐步限制使用,微生物合成生产天然类胡萝卜素具有巨大的价值,利用微生物的胞内酶系统已经实现了合成β-胡萝卜素、番茄红素等。但是,类胡萝卜素产品的可持续发展问题已迫在眉睫,具体表现为类胡萝卜素产品主要集中在几个品种 (β-胡萝卜素、番茄红素、虾青素等),对新型功能性类胡萝卜素的需求不断增加,因此,发现新的特种高效类胡萝卜素并阐明其生物合成代谢途径具有重要的科学意义和应用价值。在国家自然科学基金和863课题等支持下,课题组发现在极端环境微生物中存在特殊功能的类胡萝卜素,但国内外关于这些类胡萝卜素是如何生物合成的机制和功能还缺乏研究。该项目组围绕极端微生物-耐辐射菌的特种高效类胡萝卜素,研究了耐辐射奇球菌特殊类胡萝卜素的合成机制、抗氧化活性及其对菌体极端抗性的贡献。科学发现点一:首次系统阐明了耐辐射奇球菌特种高效类胡萝卜素的合成代谢途径、机制及其合成酶(CrtE、CrtB、CrtI、CrtD、CrtO和CruF)。其中发现的CruF型1',2'-胡萝卜素水和酶为首次在非光合细菌中发现,这种类型的水和酶在分子进化上不同于在光合细菌中发现的CrtC型水和酶;科学发现点二:发现了特种类胡萝卜素产物的抗氧化能力显著高于β-胡萝卜素、番茄红素等类胡萝卜素,通过对生物大分子如DNA、蛋白质等的保护参与了生物体的极端抗性。研究成果在学科权威SCI期刊 Trends in Microbiology、Molecular Microbiology、Journal of Bacteriology等共发表论文30篇,影响因子大于5的5篇,代表性10篇论文SCI他引达116次,单篇(Biochimica et Biophysica Acta, 2007, 1770:902-911)最高他引次数为 43 次。研究成果得到了法国科学院院士 Miroslav Radman教授发表在《Cell》上论文的正面评价。新型类胡萝卜素的合成和制备方法获得授权发明专利2项,为工业化合成特种高效类胡萝卜素的应用和改造生物体抗性的代谢工程策略提供了技术支撑。
摘要:研究利用同心管微通道制备固体脂质纳米粒(SLNs),即借助外管长内管短的同心管微通道提供脂相和水相,当两相在外管中相遇时,由于溶剂间的快速相互扩散,使脂相中脂质体达到过饱和而生成SLNs.将结果与注射法对比,并考察同心管管径及弹状流对颗粒制备的影响.根据高速摄像拍摄的两相流场分布特点,对两相间的扩散传质及SLNs成形进行初步分析.结果表明:用同心管法可制备得到粒径小(100~350 nm)、分布均匀(多分散性指数小于0.25)的SLNs;与注射法相比,该方法所得颗粒粒径更小,但分布范围略宽;同心管内管内径越小,所得SLNs平均粒径越小;引入弹状流后,SLNs粒径分布变化不大,但可较好地缓解微通道内的堵塞现象;两相间传质过程可以用稳态层流传质模型近似描述....
[专利] 发明专利 CN200810162819.2
浙江大学 2009-06-10
摘要:本发明提供一种耐辐射奇球菌类胡萝卜素水合酶基因crtC,具有SEQ IDNo.1所述的核苷酸序列,该基因所编码的多肽具有SEQ ID No.2所述的氨基酸序列,该序列不同于其他生物来源的crtC,与其他来源crtC的亲缘关系较低。通过构建转化载体和转基因大肠杆菌,在含有链孢红素或番茄红素的大肠杆菌中表达crtC基因,能产生羟基化类胡萝卜素产物。本发明的类胡萝卜素水合酶基因crtC为通过基因工程技术生产高抗氧化活性的羟基化类胡萝卜素产物奠定基础。
[专利] 发明专利 CN200810121883.6
浙江大学 2009-04-08
摘要:本发明提供一种提高耐辐射奇球菌类胡萝卜素产量的方法,是将发酵培养到稳定早期的耐辐射奇球菌通过光照诱导处理和后培养,诱导菌体类胡萝卜素大量合成,以提高其产量。本发明的菌体经过离心分离,低温有机溶剂提取,所获得的类胡萝卜素产量比未经光照处理的提高了25%以上。本发明方法设计合理,条件温和、操作简便,可用于有效提高发酵法生产类胡萝卜素的产量。
[博士论文] 沈绍传
生物物理学 浙江大学 2011(学位年度)
摘要:耐辐射球菌(Deinococcus radiodurans)是地球上最耐辐射的生物之一,对各种极端压力具有超强的抗性,成为研究极端环境生物适应机理的模式生物之一。D.radiodurans所具有的超强抗氧化特性对其极端抗性起重要作用,而抗氧化相关酶及其催化合成的产物在保健食品、医药等人类健康相关领域具有广阔的应用前景。本实验室之前开展的研究证明D.radiodurans体内合成的类胡萝卜素Deinoxanthin具有超强的抗氧化能力,并且已经鉴定了该类胡萝卜素合成途径的多个关键基因(酶)。已有文献根据同源序列分析,推断D.radiodurans体内存在编码催化合成类胡萝卜素关键前体的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(Geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPS)的可能同源基因CrtE,但相关的实验研究工作包括功能鉴定和酶的分离等一直没有展开。
   本论文通过生物信息学分析和分子生物学手段鉴定D.radiodurans体内CrtE基因编码GGPPS。通过序列分析,D.radiodurans体内可能存在2个编码GGPPS相关的基因dr1395和dr0932;从进化亲缘关系上看,dr1395与已经鉴定的T.thermophilus的GGPPS基因P74906_THETH更接近。进一步通过构建突变株、补偿突变株、表达质粒以及与pRK-BI共转化大肠杆菌的类胡萝卜素产物HPLC分析等过程和方法,鉴定了D.radiodurans CrtE基因具有编码GGPPS的功能。进一步,利用新型金属螯合晶胶层析技术,从带His-tag的CrtE表达菌株破胞液中直接分离获得高纯度的GGPPS。一步分离所得的GGPPS纯度达91.4%。对所用的金属螯合晶胶,即Cu2+-IDA-晶胶,在用于分离GGPPS之前进行了结合实验和毛细管模型的性能表征,模型分析结果与实验数据吻合良好,说明该模型适用于相关材料的性能表征。
   类胡萝卜素和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是D.radiodurans体内的2种主要抗氧化物质。由于它们具有广阔的市场应用前景,本论文还就如何高效低成本获得这些产物的进行了研究。对于类胡萝卜素,主要考察了光照和金属离子这2类因素对其诱导合成的影响。发现较低剂量的光照可以有效诱导类胡萝卜素的高效合成,在光强度100-150μmol·m-2·S-1下,0.5 hr的光照和2hr的诱导后培养对色素合成较为有利。而过高的光照可能会起抑制。金属离子Fe3+、Zn2+和Cu2+对类胡萝卜素的合成具有诱导作用,而Fe2+和Mn2+对类胡萝卜素的合成具有抑制作用。一般情况下,D.radiodurans体内主要存在Mn-SOD,本论文通过添加Mn2+诱导Mn-SOD的大量合成,并尝试利用通过金属螯合晶胶分离技术高效获得较高纯度的Mn-SOD。
   本论文在鉴定D.radiodurans类胡萝卜素合成关键基因CrtE的基础上,利用金属螯合晶胶层析技术高效分离其表达蛋白GGPPS,并研究了光照和金属离子对类胡萝卜素的诱导合成作用。此外,进行了利用金属螯合晶胶直接分离Mn2+诱导的D.radiodurans Mn-SOD的初步研究。
[专利] 发明专利 CN201110236064.8
浙江工业大学 浙江大学 中国地质大学(武汉) 2012-03-21
摘要:本发明提供了一种超大孔晶胶微球,微球粒径范围500~1500μm,平均粒径800~1300μm,粒径多分散指数0.16~0.3,孔径1~80μm,孔隙率90~98%,以聚丙烯酰胺为骨架材料制得。本发明利用微通道流体聚焦技术成滴,形成的微滴尺寸均一,经结晶致孔和聚合反应形成的晶胶微球,其粒径分布窄,粒径大小通过油水相的流动进行调节,实现了晶胶微球颗粒的可控制备;制得的晶胶微球粒径分布范围窄,粒径大小较均匀,孔隙尺寸大,孔隙率高,孔道连通性好,具有一定的机械强度,干燥后重新吸水迅速恢复原来的形状。
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