绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 1
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 9 条结果
摘要:目的:探讨特异性抑制溴结构域(bromodomain and extra-terminal,BET)蛋白对血管内皮细胞激活与早期动脉粥样硬化形成的作用及其分子机制.方法:1.原代分离培养脐静脉内皮细胞和小鼠心脏血管内皮细胞后用肿瘤坏死因α(TNFα)刺激模拟炎症过程,以小分子化合物JQ1特异性抑制BET蛋白,分组如下:(1)对照组;(2)TNFα(25 ng/mL)处理组;(3) TNFα+JQ1处理组.采用Realtime-PCR及流式细胞术检测各组细胞炎症因子mRNA及蛋白水平的表达,采用5XκB荧光素酶报告基因检测各组核转录因子kappa B(NF-κB)转录活性.2.LDL受体基因敲除(LDLR-/-)小鼠随机分为2组:JQ1组(n=8,JQ1腹腔注射,50 mg/kg,每天一次)和对照组(n=8,DMSO溶媒组),同时给予高胆固醇饮食8周,采用免疫组化方法检测主动脉弓部血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达水平.结果:与对照组相比,TNFα组炎症因子mRNA、蛋白表达明显上调(P<0.01),使用JQ1干预后,炎症因子E选择素(E-selectin)、P选择素(P-selectin)、VCAM-1及白细胞介素-8(IL-8)mRNA及蛋白表达均明显下调(P<0.01).LDLR-/-小鼠高脂饮食诱导8周后JQ1显著下调了主动脉弓部VCAM-1蛋白表达.5XκB荧光素酶报告基因结果显示,与TNFα(-)相比,TNFα㈩组荧光素酶报告基因活性增强,JQ1可以显著下调报告基因活性(P<0.01).结论:BET蛋白通过调控NF-κB信号通路参与了血管内皮炎症基因转录;抑制BET蛋白下调了NF-κB目的基因表达从而减轻了内皮激活及高脂诱导的早期动脉粥样硬化病理改变....
摘要:目的:探讨ROCK通路抑制剂Y-27632对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)基质金属蛋白酶2和9(matrix metalloproteinase 2 and 9,MMP2,MMP9)的表达与活性的影响.方法:体外培养原代HUVEC,分别予以TNF-α (25 ng/mL)、TNF-α+Y-27632(10 μmol/L)处理24 h.Real-time PCR检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、MMP2和MMP9 mRNA的表达水平;明胶酶谱检测MMP2和MMP9蛋白活性的改变情况.结果:与对照组相比,TNF-α明显上调ICAM-1,VACAM-1,MMP2,MMP9 mRNA的表达(P<0.01)和MMP2,MMP9的蛋白活性(P<0.05);与TNF-α处理组相比,Y-27632可显著抑制ICAM-1,VCAM-1,MMP2和MMP9 mRNA的表达(P<0.01),下调MMP2和MMP9的蛋白活性(P<0.05).结论:Y-27632可以抑制TNF-α诱导的HUVEC炎症反应和MMP2,MMP9 mRNA和蛋白活性水平....
[期刊论文] 段琼 杨天伦
-
北大核心 CSTPCD CSCD AJ CBST
-
摘要:血管内皮由内皮细胞和细胞下基质组成,构成了血液与周围组织物质交换的第一道屏障.传统的观念认为血管内皮主要参与防止血液凝固,保持血液在血管内的正常流动性....
摘要:uPA系统包括尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasminogen activator, uPA)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase plasminogen activation receptor, uPAR)和纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor, PAI),它们参与了多种人类恶性肿瘤的局部侵袭和转移,是目前肿瘤治疗重要的分子靶点.uPA能激活纤溶酶原降解细胞外基质与基底膜,uPAR则能显著提升uPA的激活纤溶酶原的功能,两者结合能够增强肿瘤的侵袭性与转移能力.PAI主要通过促进血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,促进新生血管的形成,从而促进肿瘤的局部侵袭,但PAI又可通过抑制uPA-uPAR复合体的生物学活性来抑制肿瘤的局部侵袭.神经胶质瘤是最常见的颅内肿瘤,很少转移到颅外,局部侵袭是其预后不良的主要原因.近年来发现uPA系统的表达水平与神经胶质瘤的恶性程度呈正相关.本文综述了uPA系统对神经胶质瘤局部侵袭的影响及其在治疗中的意义....
摘要:目的:研究GPI-PLD基因转染并过度表达对HepG2细胞的影响.方法:用脂质体转染法将本室已经构建的GPI-PLD真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPI-PLD转入HepG2细胞,以未转染的HepG2细胞及转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞为对照,G418筛选出阳性细胞克隆.用自制具完整GPI结构的胎盘碱性磷酸酶为底物,定量检测GPI-PLD活性,RT-PCR法确定GPI-PLD mRNA表达水平.细胞计数绘制生长曲线,荧光染色观察HepG2细胞形态学改变,流式细胞术检测凋亡,台盼蓝排斥法观察补体介导的细胞毒(CDC)杀伤率,ELISA检测癌胚抗原(CEA)的表达情况.结果:阳性细胞克隆GPI-PLD酶活性水平比对照组升高约2倍,GPI-PLD mRNA表达水平约增加5倍;GPI-PLD基因过度表达可促进GPI锚定的蛋白质如CEA和PLAP等被大量水解释放入培养基,导致细胞增殖能力减弱,对补体杀伤的敏感性增强,细胞呈现典型的凋亡形态特征,流式细胞术检测到凋亡峰,细胞凋亡率明显增加.结论:成功将GPI-PLD基因转染入HepG2细胞,并在细胞中稳定表达.GPI-PLD过表达能抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,增强肿瘤细胞对补体杀伤的敏感性....
-
CSTPCD 北大核心
-
摘要:目的 观察抑制含溴结构域和ET域(BET)蛋白能否影响结肠癌细胞的有氧糖酵解,并进一步探讨其影响机制是否通过下调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路活性实现.方法 选择人结肠癌RKO、LS174T、HCT116细胞株.实验分成DMSO组和JQ1组.DMSO组分别于RKO、LS174T、HCT116细胞株中加入溶媒DMSO处理,JQ1组分别于RKO、LS174T、HCT116细胞株中加入BET蛋白抑制剂JQ1(将1μmol/LJQ1溶于DMSO中)处理,每组每个细胞株设3个副孔.测定两组各细胞株的乳酸含量和计算糖耗量,通过细胞计数观察RKO细胞的增殖密度.为研究JQ1能否协同低糖环境发挥其效应,另取未经处理的HCT116细胞株加入低糖DMEM培养基(葡萄糖浓度6.1 mmol/L)中培养,进行细胞计数.采用Western印迹法测定mTOR下游蛋白表达情况.结果 JQ1组RKO、LS174T、HCT116细胞株的乳酸含量和糖耗量均显著低于DMSO组同细胞株(P值均<0.01).JQ1组RKO细胞株和LS174T细胞株的细胞计数均显著少于DMSO组(P值均<0.01).高糖或低糖培养基中,JQ1组HCT116细胞株的细胞计数均显著少于DMSO组(P值均<0.05).光学显微镜下见,JQ1组RKO细胞增殖密度明显减少.Western印迹法结果显示,JQ1组RKO细胞株mTOR下游蛋白(抗磷酸化的核糖体S6蛋白)、HCT116细胞株mTOR下游蛋白(抗磷酸化的核糖体S6蛋白、抗4E结合蛋白1、抗S6蛋白激酶1蛋白)表达的灰度值均显著低于DMSO组(P值分别<0.05、0.01).结论 抑制BET蛋白可能通过抑制mTOR通路影响结肠癌细胞有氧糖酵解,从而抑制结肠癌细胞增殖....
[期刊论文] 段琼 杨天伦
-
CSTPCD 北大核心
-
摘要:随着人民生活水平提高,生活方式发生改变,人均寿命延长,心脑血管病与糖尿病的发病率逐年增加.据《中国心血管病报告2011》估计,我国高血压、冠状动脉性心脏病(冠心病)、心力衰竭、脑卒中等心血管病现患人数达到了2.3亿,每年因心血管病死亡约350万人,占总死亡人数的40%....
[硕士论文] 段琼
生物化学与分子生物学 中南大学 2009(学位年度)
摘要:目的: 通过比较正常人与神经胶质瘤患者脑脊液中uPAR浓度以及GPI-PLD酶活性,间接反映两者与神经胶质瘤局部侵袭的关系。同时利用GPI-PLD基因转染人神经胶质瘤U251细胞,初步研究GPI-PLD基因过度表达对细胞膜上糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定的蛋白质uPAR等的影响,以及神经胶质瘤细胞体外侵袭性的改变,探讨GPI-PLD基因在胶质瘤生长、凋亡和侵袭中的作用,为该基因神经胶质瘤靶向治疗提供了初步理论依据。 方法: 1.分别取30例正常人、15例神经胶质瘤患者脑脊液测定其uPAR浓度与GPI-PLD酶活性; 2.用脂质体转染法将本室已经构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPI-PLD转入U251细胞,以未转染的U251细胞及转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞为对照,以G418筛选出阳性细胞克隆。RT-PCR法鉴定GPI-PLD基因的mRNA表达水平,利用自制具完整GPI结构的胎盘型碱性磷酸酶(PLAP)做底物,通过曲拉通-114(TX-114)分相,定量检测GPI-PLD活性;基因稳定转染后观察细胞生物学特性的变化包括MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡变化。以未转及转染空载体pcDNA3.1(+)细胞为对照组,pcDNA3.1(+)/GPI-PLD细胞为试验组通过Transwell小室检测U251细胞的体外侵袭能力。 结果: 1.病人组和正常对照组脑脊液GPI-PLD酶活性(%)分别为30.7±4.6和44.1±4.4,两组差异有显著性(P<0.05);uPAR浓度分别为2.4±0.6和3.6±0.5(ng/ml),差异有显著性意义(P<0.05)。 2.RT-PCR结果和GPI-PLD酶活性测定表明,稳定高表达GPI-PLD的U251细胞系已经建立。(1)G418筛选后,GPI-PLD稳定转染U251细胞的GPI-PLDmRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染组明显增高,差异有显著性(P<0.05)。(2)GPI-PLD稳定转染U251细胞后,GPI-PLD活性较转染空质粒组和未转染组明显增高,差异有显著性意义(P<0.01),转染组细胞的GPI-PLD活性(%)达到13.1±5.6,而其它组细胞GPI-PLD活性较低,分别为5.7±3.0和5.9±2.6。(3)GPI-PLD稳定转染U251细胞后,细胞释放uPAR明显增加。pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251较pcDNA3.1(+)/ U251、U251细胞组培养基上清uPAR浓度显著提高,增高水平达4倍,而pcDNA3.1(+)/ U251和U251细胞组见无明显差异。 3.GPI-PLD转染前后U251细胞生物学特性的改变。(1)MIT法显示pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251、pcDNA3.1(+)/U251、U251细胞组吸光度的平均水平分别为0.392±0.104、0.631±0.187和0.621±0.194;其中,pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251组比pcDNA3.1(+)/U251和U251组吸光度值明显下降,差异有显著性(P<0.01),pcDNA3.1(+)/U251和U251组无明显差异。表明GPI-PLD基因过表达能抑制U251细胞的增殖。(2)细胞流式术显示pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251、pcDNA3.1(+)/U251、U251细胞组S期细胞数分别为9.33%、16.46%、17.1%;但细胞凋亡率没有明显差别。(3)体外侵袭实验24h后,每个样本分别计数5个视野。结果显示pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251、pcDNA3.1(+)/U251、U251三组细胞侵袭性显著不同(P<0.01)。pcDNA3.1(+)/GPI-PLD/U251细胞侵袭性明显低于pcDNA3.1(+)/U251、U251,提示GPI-PLD能分解GPI锚,导致uPAR从细胞表面脱落,抑制其定位与uPA降解基质的功能和uPAR-uPA介导的信号转导,从而降低U251细胞的体外侵袭性。 结论: 1.神经胶质瘤患者脑脊液中GPI-PLD酶活性以及uPAR的浓度均较正常人降低,差异具有显著性。 2.成功将GPI-PLD基因转染入神经胶质瘤U251细胞,并在该细胞中稳定表达。 3.GPI-PLD基因转染U251细胞后能影响该细胞周期并降低神经胶质瘤细胞的体外侵袭性。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

万方选题

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部