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[硕士论文] 武晓君
生物化学与分子生物学 内蒙古大学 2018(学位年度)
摘要:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球癌症死亡的第二大原因,威胁着人类的生命[1,2]。HCC发病率逐年升高,由于其遗传异质性、多种病因和并发慢性肝病使得HCC患者的诊断和治疗面临一定的困难[3]。长链非编码RNA(Long-chain non-coding RNA,lncRNA)是非编码RNA的一种,长度超过200个bp,很少或没有蛋白质编码能力[4]。近几年的研究显示,很多lncRNA与癌症相关,而lncRNA小核仁RNA宿主基因5(Smallnucleolar RNA host gene5,SNHG5)已发现在胃癌、结直肠癌、食管癌等癌症中存在表达异常,但在肝癌中目前还没有报道。
  为探究SNHG5在肝癌中是否也有一定的作用,首先通过实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测了SNHG5在正常肝脏细胞HL7702和肝癌细胞系HepG2、MHCC97L、MHCC97H、QGY-7701、SK-Hep1中的表达,结果显示SNHG5在上述几种肝癌细胞系中都表达上调。随后通过siRNA干扰技术将HepG2中的SNHG5沉默,结果发现沉默后HepG2的增殖、迁移、细胞周期和克隆形成均被明显抑制,而凋亡显著增加。此外,查找文献发现富含丝氨酸精子发生相关蛋白2(Spermatogenesis-associated serine-rich protein2,SPATS2)和PITRM1(Pitrilysin metallopeptidase1)可能是SNHG5的相关靶基因。因此进一步通过qRT-PCR与Western blot对靶基因进行检测。结果表明,当抑制或过表达SNHG5时,SPATS2和PITRM1的mRNA和蛋白表达水平会随之下调或上调。此后通过双荧光素酶报告基因实验对SPATS2进行检测,结果显示SPATS2与SNHG5存在互补结合位点。最后通过转染siSPATS2或siPITRM1,将HepG2中的SPATS2或PITRM1沉默,进一步探究它们对HepG2生物学功能的影响。结果表明,在HepG2中沉默SPATS2或PITRM1后能显著抑制HepG2的增殖、迁移、周期和克隆形成,同时显著促进凋亡,与在HepG2中沉默SNHG5的效果类似。
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