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摘要:原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)起源于原肠胚阶段,是生殖细胞的前体细胞,由特定细胞经过一系列分子调控特化而成.PGCs完成特化后迁移进入生殖嵴,在迁移过程中存在一系列的表观遗传修饰的动态变化,包括DNA甲基化和组蛋白修饰等.PGCs迁移的后期会发生两性分化,迁入生殖嵴的PGCs影响原始性腺的发育.有关小鼠PGCs特化、迁移/增殖和两性分化等的机制已得到了广泛研究,而在人类中则由于伦理以及材料获取困难等因素还有待更深入的研究.该文综述了人原始生殖细胞(human PGCs,hPGCs)的特化机制、表观遗传调节在其特化和迁移过程中的作用以及hPGCs对性腺形成的影响....
[硕士论文] 樊春彪
动物学 内蒙古大学 2018(学位年度)
摘要:原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)是雌雄生殖细胞的前体细胞,小鼠PGCs(mouse PGCs,mPGCs)是由早期着床后胚胎的上胚层细胞受来自胚外信号的作用特化而成,PGCs特化后经迁移到达生殖嵴参与性腺发生。PGCs的迁移过程受多因素调控,但目前对参与调节的分子及作用机制还缺乏了解。
  本研究首先利用流式细胞法从OCT-4标记的小鼠胚胎分离获得9.5天(embryo day9.5,E9.5)和12.5天(E12.5)的mPGCs两组样品分别代表迁移阶段和迁移到达生殖嵴阶段,其中,为排除性别分化对迁移基因调控的影响,E12.5天分为雌雄两组。随后,利用hiseq4000测序平台结合PE101测序方法对获得的细胞进行单细胞表达谱测序(RNA Sequencing,RNA-seq)分析。测序结果共获得13,977个转录本,其中9,822个属于已知蛋白编码基因的转录本,1,048个属于未知的转录本。在表达谱测序结果比较中,E9.5天与雌性E12.5天(E12.5F)mPGCs有7,395个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),其中包括上调基因4,792个和下调基因2,603个(FDR≤0.001且变化倍数≥2)。E9.5天与雄性E12.5天(E12.5M)mPGCs相比,共检测到7,289个DEGs,包括4,287个上调基因和3,002个下调基因。为验证测序结果的准确性,随机挑选26个mRNA差异表达基因进行实时荧光定量分析,结果显示与RNA-seq得到的基因表达差异趋势一致,表明RNA-seq测序结果可靠。
  为阐明mPGCs迁移过程中的调控网络,通过表达基因通路(pathway)分析发现,测序所获得的DEGs中有75个通路在Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)数据库中被注释(P<0.01)。通过比较,在雌性mPGCs迁移过程中涉及56个信号通路;在雄性中,涉及56个信号通路。其中37个信号通路是雌性和雄性mPGCs迁移过程中共同拥有的,这些通路涉及细胞存活15个,细胞增殖14个,细胞粘附7个,细胞迁移5个和细胞分化3个。其中ErbBs信号通路位于上述所有类型的信号通路中。通过对ErbBs信号通路以及其上下游调控通络的分析,表明上游Ras信号通路,EGFR酪氨酸激酶抑制剂阻断信号通路和下游Focal adhesion信号通路同时发生改变。并对涉及这些通路的LRRC58和RHOA蛋白进行免疫荧光分析和8个基因进行qPCR验证,验证结果与分析结果相符。因此,表明ErbBs信号通路可能在mPGCs迁移过程中发挥作用。
  本研究通过对mPGCs迁移过程的基因表达谱解析,为进一步深入研究mPGCs的迁移机制及阐明小鼠配子发生和分化过程奠定了基础。
摘要:该研究探讨了人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)提取物对人肺腺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响及其作用机制.利用超声破碎法制备hUC-MSCs提取物,并处理经链球菌溶血素O(streptolysin O,SLO)通透的A549细胞.采用MTT法、平板克隆形成实验检测hUC-MSCs提取物对A549细胞增殖的影响,Transwell实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR检测促凋亡基因胱冬肽酶-3(caspase-3)、胱冬肽酶-9(caspase-9),抑癌基因RUNX3(runt-related transcription factor 3)和存活蛋白基因(survivin)的rnRNA水平,亚硫酸氢盐测序检测R UNX3启动子区CpG岛甲基化水平.结果发现,经hUC-MSCs提取物处理后,A549细胞的增殖、迁移能力均显著降低,caspase-3、caspase-9和RUNX3 mRNA水平显著升高,survivin mRNA的表达量显著降低,UNX3启动子区CpG岛显著去甲基化.该研究结果表明,hUC-MSCs提取物可能通过逆转RUNX3启动子区甲基化状态恢复其表达,并通过提高caspase-3、caspase-9表达及降低survivin的表达来抑制A549的增殖及迁移能力....
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