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摘要:目的:研究饮食诱发的高脂血症长爪沙鼠模型的关键基因及代谢性炎症通路调控网络。方法利用RNA-Seq测序技术及生物信息学技术对正常组与模型组两个RNA池进行测序和分析。结果 De novo拼接后获得有效长爪沙鼠基因47522个(即≥100 bp的unigene),大小26.9 Mb,与GenBank中现有的基因比对结果表明,约82.53%的序列与基因组上的外显子序列同源;诱发高脂血症动物与正常动物之间共获得21125个差异基因,其中16087个下调,5038个上调,模型组相对于正常组存在显著的下调关系( P<0.01)。其中与长爪沙鼠高脂血症代谢性炎症密切相关的通路有8个(P<0.01),这8个通路所表达的基因中有15个与免疫和炎症相关的基因显著下调( P<0.01)。结论 RNA-Seq测序和生物信息技术可作为研究高脂血症动物模型的整体基因转录的工具,筛选出的关键基因和通路可作为研究的候选基因或操作靶点。...
摘要:目的 研究运行中的实验动物屏障系统微生物的情况.方法采用沉降菌法、棉拭子法等方法,研究运行中的屏障系统不同区域、不同环境指标下屏障系统内微生物的状况.结果 动态下的屏障系统微生物情况与国标GB14925-2001中静态环境有较大不同,动物饲养室和动物实验室沉降菌浓度远高于静态要求;辅助区域在规范化消毒及严格管理的情况下,能达到国标要求.屏障系统的微生物情况存在一定的昼夜变化规律,在晚间出现峰值.结论 合适的换气次数可有效控制实验动物屏障系统的沉降菌浓度;加强消毒及硬件的管理,是屏障系统内环境稳定的保障....
摘要:目的 比较4种独立通风笼具(individually ventilated cages,IVC)的环境参数.方法 参考GB14925-2001的检测方法 对分别来自4个厂家生产的4种不同的IVC进行环境检测.结果 4种IVC在空气洁净度、落下菌、噪声和照度等4个指标检测数据较为一致;在梯度压差、换气次数、气流速度等3个指标存在较大的差别;而温湿度等指标取决于IVC所处的外部环境.结论 目前缺乏国家标准对IVC环境指标进行限定,各厂家所生产的IVC存在差异,需要在此方面加强研究,以促进IVC的标准化,更好的服务于实验动物行业....
摘要:目的 对无菌大鼠进行无菌检测,分析其微生物污染的多种影响因素.方法 通过采集无菌隔离器内环境、无菌大鼠及其粪便等标本,选用合适的培养基在不同的条件下对其进行培养,并于第7天和第14天转种于血平皿,以此来判断无菌动物的无菌状态,并分析出现微生物污染的影响因素.结果 在被检的163例标本中,检出阳性13例,且各平行样检测结果一致.经复检确认,阳性结果中有10例是动物自身带菌,3例是培养基污染.结论 本检测中所采用的培养基和方法准确可靠.检查用培养基质量、培养时间、标本处理等因素都可能影响无菌检测结果....
摘要:无菌动物已应用到医学和生物学研究的各个领域.本文简要介绍了国内无菌动物无菌检查方法的现状,并结合现行国内实验动物微生物检测标准与一些国家药典的无菌检查方法,阐述现行方法的局限性及无菌动物无菌检查中的影响因素.提出目前我国无菌动物的无菌检查技术在取样、培养基的选择与灵敏度、环境与人员控制,以及结果判断等方面有待于进一步完善与改进....
摘要:目的:研究饮食诱发的高脂血症长爪沙鼠模型的关键基因及代谢性炎症通路调控网络. 方法:利用RNA-Seq测序技术及生物信息学技术对正常组与模型组两个RNA池进行测序和分析. 结果:De novo拼接后获得有效长爪沙鼠基因47522个(即≥100 bp的unigene),大小26.9 Mb,与GenBank中现有的基因比对结果表明,约82.53%的序列与基因组上的外显子序列同源;诱发高脂血症动物与正常动物之间共获得21,125个差异基因,其中16087个下调,5038个上调,模型组相对于正常组存在显著的下调关系(P<0.01).其中与长爪沙鼠高脂血症代谢性炎症密切相关的通路有8个(P<0.01),这8个通路所表达的基因中有15个与免疫和炎症相关的基因显著下调(P<0.01). 结论:RNA-Seq测序和生物信息技术可作为研究高脂血症动物模型的整体基因转录的工具,筛选出的关键基因和通路可作为研究的候选基因或操作靶点.
[硕士论文] 柯贤福
兽医学 浙江大学 2012(学位年度)
摘要:实验动物(laboratory animal),指经人工培育,对其携带微生物和寄生虫实行控制,遗传背景明确或者来源清楚,用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的动物。作为生命科学研究的四大要素(AEIR,即animal,equipment,information,reagent)之一,实验动物的重要性日益显现。近些年来,无论是国外还是国内,实验动物学科均越来越受到各级政府的重视。要想抢占生物医药产业的制高点,作为支撑条件的实验动物,必须也必将得到快速发展。为全面掌握我省实验动物的现状,充分了解我们的优势,找出我省的不足,有必要对我省实验动物进行详细的调查,并进行对策研究,以期提高该学科的地位,最终促进学科发展,适应经济转型发展的需求。
   1.浙江省实验动物现状调查
   采用问卷调查、电话回访、专家咨询及网络搜索等方式,对我省实验动物基本情况包括从业人员、设施设备等进行统计。分析人员分布情况及不同级别动物设施的构成情况。结果显示,我省大小鼠的生产与使用存在约15%的缺口;而实验兔的缺口较大,约70%左右;大动物如犬、猴等,基本能满足实验需求。我省实验动物从业人员的持证上岗比例达到90%,且有逐年增加的趋势。我国实验动物实行许可证管理制度,通过对来自省动管办的相关数据进行统计,分析我省实验动物许可证的地域分布情况,以及实验动物生产、动物实验的空间分布,为进一步整合资源,合作共享提供依据。结果显示,我省共有56家单位申请实验动物许可证,但地区分布明显不均,其中杭州市约占48%,而金华、衢州、嘉兴等地分别只有1家,占2%。
   2.浙江省实验动物发展对策研究分析
   我省实验动物亟需解决的重大问题,根据专家的意见,结合各行业对实验动物的需求情况,研究制定我省实验动物十二五发展思路。十二五期间,我省应在全面实施实验动物许可证管理的基础上,着重做好实验动物网络化管理工作,同时注重资源整合和共享,抓住我省特有实验动物资源,提升整体实力,促进行业发展。具体包括以下几方面工作:一是继续加强和完善实验动物法律法规体系建设;二是以实验动物许可证管理工作为核心,继续加强实验动物质量检测、完善实验动物技术标准等工作;三是继续加强实验动物资源建设,特别是我省具有优势实验动物资源的研究开发,加强我省实验动物种质资源库建设,推进实验动物资源的整合和共享体系的建设;四是培养一支结构合理、具有创新精神的实验动物科研、生产和管理队伍。实验动物有携带人畜共患病或重要传染病的可能,生物安全工作非常重要。通过研究,制定我省实验动物生物安全的应急预案,确保人民健康。强调突发重大事件的监测、预警、报告与确认,完善快速反应机制;规范突发事件的报告与确认程序;规定应急处理的各项措施。此外,信息化管理有助于实验动物事业的进一步发展,利用信息技术对实验动物生产及使用的全过程进行跟踪,并实现许可证的网上管理,提高工作效率,促进共享互利。
   我省实验动物近年发展迅速,取得较大进步,促进了相关产业的发展。同时也存在不足,如实验动物产能不足,无法满足生物医药产业快速发展的需求;实验动物从业人员整体素质有待提高;实验动物学科地位不高;实验动物信息化建设滞后等。实验动物发展至关重要,今后需要着力解决上述存在的不足,切实提高我省实验动物水平,全面推进我省生物医药等产业快速发展。
摘要:目的:克隆长爪沙鼠载脂蛋白E基因(ApoE)的内含子,并对前期克隆到的该基因的编码区进行序列分析与结构初步预测。 方法:根据Genbank中的相关序列,在前期获得的编码区序列的基础上对基因组进行套式扩增,获得了ApoE基因编码区全长,然后通过对编码区序列进行碱基分析比对后获得2个内含子。同时用RNA Structure5.1软件对该基因mRNA二级结构进行预测。 结果:长爪沙鼠载脂蛋白ApoE基因包含两个内含子,长度分别为521bp和421bp,经blsat比较发现测序的结果与大鼠ApoE基因(编号为J02582.1)的编码区内含子的同源性达到了80.9%、76.8%,与小鼠ApoE基因(编号为NC 000073.5)的编码区内含子同源性达77.0%、75.1%,与人ApoE基因(NC_000019.9)的同源性达到了48.2%、46.5%,已作为前面所获eds区的补充向genbank提交,登录号为HM366607。mRNA分析表明5’不译区为65bp,3’不译区为119bp,ORF为951bp,茎552bp,环501bp,自由能为-531.0。 结论:根据比较基因组学原理,用套式PCR可以得到长爪沙鼠载脂蛋白E基因编码区的内含子序列,本研究为筛选长爪沙鼠高脂血症模型的遗传多样性标记打下基础。
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