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摘要:在昆虫细胞杆状病毒中表达的人生长激素,经CM-52离子交换柱层析和Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱层析后,去除了93%杂蛋白.再用CN&-activated Sepharose 4B亲和柱层析的方法,获得高纯度的生长激素样品.SDS-PAGE结果表明,纯化样品在SDS-PAGE图谱呈现一条带,分子量为22kD.Western杂交结果表明,纯化样品与生长激素标准品有相似的免疫活性.胰肽图谱分析结果显示纯化样品和标准品具有相同的一级结构.DNS-CL测N末端表明,纯化样品的N末端为苯丙氨酸,所有这些性质均与天然人生长激素相同....
[硕士论文] 林启良
生物化学 南开大学 2000(学位年度)
摘要:该实验运用离子交换色谱,疏水相互作用色谱和免疫亲和色谱对昆虫细胞杆状病毒表达系统(Sf9-AcNPV)表达的重组人生长激素(recombinant human Growth Hormine,rhGH)进行了纯化.含有rhGH的昆虫细胞培养液经离心后,以离子交换色谱(GM-52)和疏水相用色谱(Phenyl SepharoseCL-4B)浓缩,有效地去除了杂蛋白,得到rhGH精提品:再经过免疫亲和色谱纯化,得到了高浓度的rhGH.经酶免疫分析,放射免疫分析和Western杂交法分析,证明纯化的rhGH与天然的人生长激素有相同的免疫活力;经SDS凝胶电泳测定其分子量为:22,000道尔顿;等电点聚焦法测定其等电点为:4.9.经丹磺酰氯法测定其N-末端为:苯丙氨酸(Phe),这些性质均与天然的人生长激素相符合.
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