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[硕士论文] 杨芬
化学 延边大学 2018(学位年度)
摘要:自从人类基因组全序列测定完成以后,关于蛋白质研究兴起的蛋白质组学与基因组学一样成为人类的21世纪前沿课题研究之一。因为蛋白质在生物体内的差异性表达能反映出生物体的生命状态,所以该研究应用的范围十分广泛。但是与基因组学不同,蛋白质组学是全局的、动态的、复杂的,所以其研究方法发展甚为迅速;其中基于质谱的稳定同位素标记蛋白质定量方法最为热门,已为生命科学研究提供了重要的技术支撑。现阶段研究开发了多种化学标记方法,并应用于不同蛋白组定量分析。但由于一级质谱相对定量方法存在低丰度样品定量结果不准确、动态范围低、难以同时实现超过四重标记的问题;本研究针对其中难以同时实现超过四重标记的问题,设计了五重标记试剂,并进行了部分标记试剂的合成及其衍生化反应条件的优化。
  本文第一章参考近年来有关蛋白质定量方法研究的文献,简述了现有的蛋白质定量研究方法。第二章用1,5-二氟-2,4二硝基苯分别与N-甲基哌嗪/N-甲基哌嗪2,2,3,3,5,5,6,6-d8在室温下反应30min,经柱层析后得到d0/d8-1-(2,4-二硝基-5-氟)-4-甲基(d0/d8-PPZ),再将d0-PPZ和d8-PPZ分别与碘甲烷在60℃条件下反应30min合成了d0/d8-1-(2,4-二硝基-5-氟)-4,4-二甲基哌嗪离子(d0/d8-MPPZ),并对其结构进行了表征;本文还探索了d12-MPPZ的合成方法,为后续研究者提供了有意义的实验数据。第三章主要探讨了MPPZ与肽衍生化反应条件。该衍生化反应受反应温度、反应时间、反应pH、反应物的摩尔比等的影响。所以选用牛的β-酪啡肽(yg-5)作为多肽模型,探索了衍生化反应的最佳条件;最终确定反应温度60℃,反应时间120min,反应pH值8.2,反应摩尔比40∶1(d0/d8-MPPZ:yg-5)为最优反应条件。并分别用d0/d8-MPPZ试剂标记yg-5,将衍生化反应产物等量混合后进LC-MS检测分析,他们的质谱峰强度比值为0.98,接近于1,说明该衍生化试剂能用来对多肽进行相对定量分析。该方法标记过程简单,反应条件温和,反应程度较为完全,副产物少,试剂廉价,为以后进行分子量更大的、结构更加复杂的蛋白质研究提供了实验依据。
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