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摘要:试验采集120、160、220、330、480日龄海兰褐蛋鸡的卵巢,通过石蜡切片观察卵泡发育情况,采用荧光定量PCR检测FOXL2基因在卵巢的表达情况.结果显示:120~480日龄,卵巢重量呈现先增加后减少的趋势,220日龄达到最大;卵巢的初级卵泡数逐渐减少,而次级卵泡数先增加后减少,160日龄次级卵泡数最多;蛋鸡卵泡萎缩率增加,闭锁卵泡数逐渐增多;FOXL2基因的mRNA水平在120~480日龄呈下降趋势,暗示其可能与蛋鸡卵巢和卵泡的发育存在相关性....
摘要:[目的]对来航鸡FOXL2基因进行真核表达及纯化,为其生物学功能研究奠定基础.[方法]根据GenBank已发表的来航鸡FOXL2基因序列(GenBank登录号:JF_708868.1)设计引物,以来航鸡全血DNA为模板,PCR扩增FOXL2基因,经EcoR Ⅰ和XbaⅠ双酶切后定向克隆于pPICZαA中,获得pPICZαA-FOXL2真核表达载体.将pPICZαA FOXL2转化毕赤酵母菌GS115,用甲醇进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测.[结果]克隆了918 bp的FOXL2基因;成功构建了pPICZαA FOXL2真核表达载体;实现了FOXL2基因在毕赤酵母菌GS115中的融合表达,获得了分子质量约为37 ku的重组蛋白FOXL2,经Western blotting检测其具有较好的生物学活性.[结论]成功地在毕赤酵母中表达了来航鸡FOXL2基因....
摘要:为了研究最佳的H1N1亚型流感病毒鸡胚增殖参数,本试验进行了孵化前种蛋的选择与保存、鸡胚孵化中各参数设定等因素对H1N1亚型流感病毒产毒量影响的研究.其中种蛋的选择与保存,主要考察了蛋重、蛋形指数、保存期、消毒时间及方法等因素,结果显示,蛋重为55~65 g,蛋形指数为1.30~1.35,种蛋保存期为1~4 d,保存温度为16~18℃,保存湿度为70%~80%,保存期种蛋的甲醛熏蒸消毒时间为30 min时,可以为H1N1亚型流感疫苗生产提供最佳的种蛋.孵化过程中孵化参数对H1N1亚型流感病毒产毒量的影响,本试验主要将孵化温度、湿度、翻蛋、通风等参数作为研究对象,结果显示在生产H1N1亚型流感疫苗时,最佳孵化参数设定为:温度1~7d为38.2℃、8~9 d为38.0℃、10 d为37.8℃,湿度1~10 d为65%~70%,翻蛋频率为1次/2 h,前后倾角各为45°,通风风门设定为1~5 d为4、6~10 d为5.本试验结果为H1N1亚型流感疫苗生产提供优质的鸡胚孵化技术,确保鸡胚尿囊液的质量和收获量....
摘要:FOXL-2基因(Winged helix forkhead transcription factor gene2.FOXL-2)是近年来发现的一种对脊椎动物具有重要意义的转录因子,它属于翼状螺旋/叉头转录因子超家族成员,其在胚胎及成体卵巢颗粒细胞中呈现特异性表达,与性别决定,卵巢早衰等相关.翼状螺旋/叉头转录因子家族是一种转录调节核蛋白,内含一个特定的forkhead DNA结合域,它们在早期胚胎谱系决定,特别是胚外胎膜的形成、内胚层和侧板中胚层的发育及随后其来源的器官形成中起重要作用[1].参考韩婷等成功在2006年克隆人FOXL-2基因,并在大肠杆菌中高效表达的实验,为深入研究FOXL-2基因编码的蛋白质在种鸡卵巢发育中的作用奠定了基础[2,3].本研究从卵巢研磨液中提取mRNA为模板,逆转录得到cDNA文库,然后进行实时荧光定量PCR对其进行扩增并测出FOXL-2基因的表达量,最后与不同日龄种鸡卵巢的发育程度建立线性函数,以此函数来直观表现出FOXL-2基因的表达对种鸡卵巢发育程度的影响.为进一步了解FOXL-2基因对种鸡产蛋性能的影响奠定了基础....
[硕士论文] 杨猛
动物生物化学与分子遗传学 河南科技学院 2017(学位年度)
摘要:FOXL2基因是在脊椎动物中最先发现的与卵巢分化有关的的性别二态性标记,同时也是人类常染色体基因中第一个被认定在促进人的眼睑的早期发育、卵巢发育和维持卵巢功能方面具有重要作用的因子。随着人们对于相关研究的不断加深,发现在人的眼睑、胚胎及成体卵巢颗粒细胞中FOXL2基因均呈现出特异性的表达,与人的卵巢早衰、卵巢肿瘤、不孕不育、性别决定以及小眼睑裂综合征等病症有关。FOXL2基因在抑制卵泡凋亡和促进卵巢储备功能方面发挥着重要作用,其正常表达对鸡产蛋性能高低和卵巢发育程度很重要。但FOXL2基因在不同时期的产蛋鸡体内各组织器官中的表达情况以及与蛋鸡卵巢发育不同时期的相关性仍未见报道。
  本研究首先通过HE染色法观察不同时期海兰褐蛋鸡卵巢的发育情况和组织学结构,并通过进行卵泡数量的统计学分析,研究蛋鸡卵巢卵泡的具体发育状况。根据GenBank上收录的红原鸡的FOXL2基因序列(登录号:JF_708868),通过生物信息学分析其保守序列及酶切位点,利用 Primmer_5.0设计并合成3对引物。通过琼脂糖凝胶电泳试验,筛选出最优引物。采集30日龄,60日龄,90日龄,120日龄、160日龄、220日龄、330日龄、480日龄共8个时期的蛋鸡的下丘脑、眼睑、肌肉、心脏、胸腺、肝脏、脾脏、肾脏组织样品,进行qR T-PCR试验。对比不同时期卵巢中FOXL2基因相对表达量的差异,分析FOXL2基因与鸡卵巢发育及其与产蛋性能的相关性;对比FOXL2基因在不同时期和不同组织中相对表达量的变化,分析FOXL2基因与蛋鸡机体发育的相关性。HE染色和统计学分析结果表明,220日龄卵巢的体积和重量最大,之后卵巢逐渐萎缩,重量减少;随日龄增加,总卵泡数逐渐减少,初级卵泡数呈现先增加后减少趋势,60日龄的初级卵泡数最高,然后逐渐减少;120日龄的次级卵泡数最高,并且明显高于其他日龄产蛋鸡;从30日龄开始,随日龄增加,卵泡闭锁率逐渐增多。qRT-PCR试验结果表明,120日龄鸡卵巢中FOXL2基因的相对表达量高于其他日龄。FOXL2的表达与蛋鸡卵巢发育存在相关性,产蛋鸡不同组织中FOXL2基因相对表达量伴随着产蛋鸡组织器官的发育而变化,说明FOXL2基因与产蛋鸡其他组织的发育也存在一定的关系。本研究有助于进一步认识FOXL2基因在调控蛋鸡卵巢发育和产蛋性能方面的作用,为深入研究该基因的生物学特性和功能奠定了基础。
摘要:FOXL2基因(winged helix forkhead transcription factor gene2,FOXL2)是近年来发现的一种转录因子,属于翼状螺旋/叉头转录因子超家族成员,其在眼睑、胚胎及成体卵巢颗粒细胞中呈现特异性表达,与性别决定、卵巢早衰、不孕不育、肿瘤及小眼睑裂综合征等相关.翼状螺旋/叉头转录因子家族是一种转录调节核蛋白,内含一个特定的forkhead DNA结合域,它们在早期胚胎谱系决定,特别是胚外胎膜的形成、内胚层和侧板中胚层的发育及随后其来源的器官形成中起重要作用[1]....
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