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[期刊论文] 王思佳 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:利用RACE方法首次从杜氏盐藻中获得hsp90基因全长序列,并将其提交至GeneBank(Accession No:JQ735968).进一步研究表明,在热激与盐胁迫条件下杜氏盐藻hsp90基因的转录水平及蛋白表达水平出现明显上调,暗示该基因可能是杜氏盐藻细胞中与逆境响应相关的调控元件....
摘要:拟南芥BAH1含有保守的C3H4型RING结构域,与DnaJ锌指结构类似.利用原核表达纯化的BAH1进行体外泛素化实验证明了BAH1具有E3连接酶活性.然后通过表型回复实验发现BAH1融合J-domain结构域后(JdBAH1)和DnaJ一样能明显弥补danJ突变株MF634的热敏表型,在43℃存活;而转入突变锌指结构的JdBAH1C231S,C234S,C276S,C279S(JdBAH1△Zn1/2)菌株在43℃高温条件下不能存活,说明BAH1在大肠杆菌内具有类似DnaJ锌指结构的功能.因此,BAH1在E.coli中的功能有可能与DnaJ相似,通过锌指结构参与了DnaK/DnaJ伴侣系统发挥功能....
摘要:研究发现赤霉素对醉蝶花(Cleome spinosa jacq.)种子发芽和幼苗生长有明显的促进作用,其中10 mg/L浸种30min的处理对种子发芽和幼苗生长的促进作用最明显,发芽率达到80%.用不同激素组合诱导醉蝶花下胚轴和子叶形成愈伤组织,MS+6-BA 0.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT 0.5mg/L中子叶的出愈率最高,达到100%.下胚轴出愈不及子叶,最高只有93%.MS+6-BA2mg/L+NAA0.05rmg/L适合于芽的分化,诱导率达到100%.以醉蝶花幼芽为材料,用常规染色体制片方法确定醉蝶花体细胞染色体数目2n=20....
摘要:本文通过酵母双杂交实验(Y2H)和双荧光互补实验(BIFC)分别从体外和体内条件下检测了AtDWD与CUL4型E3连接酶的底物识别蛋白结合蛋白DDB1a和DDB1b的相互作用,发现AtDWD与DDB1b有较强的相互作用,而与DDB1a的相互作用较弱,相互作用区域位于AtDWD的C末端部位.说明了AtDWD是潜在的CUL4型E3连接酶的底物识别亚基.此外,本文中还发现AtDWD过表达植株对冷冻胁迫更加敏感.AtDWD可能参与冷胁迫信号通路....
[期刊论文] 袁美华 蒋彦 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:呋塞米是一种高效利尿剂,本实验主要探究其对碳酸酐酶的抑制效应.相比较乙酰唑胺而言,呋塞米在其浓度接近碳酸酐酶浓度时能使该酶基本失活.研究发现,呋塞米对碳酸酐酶的抑制效应表现为非竞争性抑制,其 IC50为0.759μM ,KI 为0.61μM ,乙酰唑胺的 IC50为0.199μM , KI 为0.099μM ,表现为竞争性抑制....
[期刊论文] 陈慧 高梅 熊方建 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:本研究以水稻模式种日本晴为研究材料,利用人工气候室模拟自然条件下的高温环境,从抽穗开花期起直至灌浆结实期,对水稻植株进行热胁迫处理,检测花粉活力、叶片脯氨酸含量、结实率、千粒重、单株有效穗数、单株产量等性状指标,从而评价水稻各株系的耐热性.结果表明,通过模拟自然条件下的高温环境及检测评定的各项指标,能够较真实准确的对水稻耐热性进行评价....
摘要:作者从芸苔(Brassica campestris)中用RT-PCR方法获得了EPSPs基因的cDNA.与其他物种中的EPSPs基因进行了比对和分析发现:芸苔EPSPs基因的cDNA与欧洲油菜的同源性最高,为93%,与水稻同源性最低,仅为64%.将芸苔EPSPs的ORF片段插入到GTK融合表达载体中,为EPSPs的原核表达奠定了基础....
摘要:为了探索VDAC在盐胁迫信号传递途径中可能的传递关系,以AtVDAC2转基因拟南芥过量表达和抑制表达株系为材料,初步探索盐胁迫过程中该基因参与信号传递的方式.实验分析了NaCl处理对种子萌发的影响、Ca2+对NaCl胁迫下种子萌发的影响,以及NaCl对气孔运动的影响和盐胁迫相关基因的表达水平.实验结果指出,AtVDAC2基因表达水平变化影响了拟南芥对NaCl的敏感性:高表达的AtVDAC2使得拟南芥种子对NaCl敏感性提高,种子萌发率降低,气孔关闭较快;而低表达的AtVDAC2使得拟南芥对NaCl敏感性降低,种子萌发率高,气孔不易关闭.在NaCl胁迫下添加Ca2+,提高了敏感株系种子的萌发率,因而推测Ca2+帮助AtVDAC2转基因拟南芥过量表达株系平衡下游的胁迫应答.用实时荧光定量PCR检测盐胁迫应答相关基因SOS1,SOS2的表达水平,发现AtVDAC2的高表达引起了下游应答基因SOS1,SOS2表达水平的相应提高;相反AtVDAC2的抑制表达则导致SOS1,SOS2表达水平下降.由此说明,At VDA C2参与了拟南芥盐胁迫应答过程....
摘要:为了分析拟南芥脱落酸响应蛋白RING-V1基因(ABRv1)的功能,构建了高表达载体pBI121-ABRv1,经农杆菌转化,花序浸染后得到T0代转基因种子,并经卡那霉素板筛选得到转基因苗,再经过两代的筛选获取了纯合的高表达株系ABRv1.通过DNA及RNA水平鉴定了ABRv1基因的T-DNA插入突变体abrv1.对突变体、高表达转基因株系及野生型进行ABA诱导处理,突变体的萌发率不足10%,野生型萌发率为40%,而过表达株系萌发率为67%;突变体株系气孔几乎全部关闭,过表达株系气孔关闭不明显,大小是突变体株系的2~3倍.结果表明ABRv1基因在拟南芥的ABA信号应答响应中可能起负调控作用....
[期刊论文] 赵成 杨昊 刘志斌 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:本研究以拟南芥为试验材料,探索基因at5g66070在受到非生物胁迫的表达情况,并研究其抗逆特性.结果表明,在NaCl处理下,该基因的表达量明显升高,表明该基因受到盐的诱导.通过PCR和RT PCR在DNA和RNA水平上筛选鉴定at5g66070基因T-DNA插入纯合突变体.分析了野生型拟南芥与突变体在不同浓度NaCl处理下,其萌发率,根长以及苗期的生长差异.结果发现,相对于野生型来说,突变体对盐更敏感.具体来说,在含有150mMNaCl的MS培养基中,突变体的萌发率比野生型要低,根长比野生型要短,同时突变体幼苗更容易出现枯萎,萎黄症状....
[期刊论文] 韩俊 刘志斌 马诗淳 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:本研究通过设计简并引物及文献参考,PCR 克隆得到嗜热厌氧菌菌株 xyl-d 的SADH,并利用定点诱变技术将该酶的198位苷氨酸(Gly)突变为精氨酸(Arg)。将野生型和突变基因连接到原核表达载体pET28a,IPTG诱导表达,再经镍柱纯化,然后比较了两个蛋白分别以 NAD/NADH,NADP/NADPH 为辅因子、异丙醇或异丁醛为底物、55℃条件下的酶活。发现突变后蛋白的总体催化活性相对于野生型有所下降,其中突变蛋白对 NAD/NADH 的亲和性分别下降了约8倍和6倍,而且对NADPH 的亲和性下降也非常明显,但对NADP的亲和性变化却不大。...
摘要:本文利用酵母双杂交系统研究了拟南芥中全长atp6与不同长度psaL之间的相互作用,通过观察含有共转化质粒的酵母,在组氨酸(His)和腺嘌呤(Ade)营养缺陷条件下的生长情况,以及对β-半乳糖苷酶(LacZ基因编码)的定性和定量分析,表明ATP6与PSAL之间具有较强的相互作用,并且这种相互作用在全长atp6和psaL的中间区段,PSAL的信号肽和C端的存在阻碍了这种相互作用....
[期刊论文] 刘震 文国琴 张建军 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:通过对AtGluRS转基因植株的生理观察以及对ABA相关基因在转录水平的检测,发现ABA相关基因HB6,NCED3,LTI65的表达量受到GluRS的影响,揭示出GluRS对ABA信号通路的调控作用,并推测AtGluRS通过对ABA合成途径的调节,从而实现对信号通路的调控....
[期刊论文] 唐天元 陈存 陈凤莲 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:本实验室先前通过酵母双杂交在油菜中获得一个未知基因(BnRCH),NCBI保守区域查寻表明BnRCH蛋白含有一个RINGv(RING-variant)结构域,该结构参与多种抗逆途径.为初步探索BnRCH的作用,通过RT-PCR技术,克隆BnRCH及其在其它物种中的同源基因cDNA序列,之后将各基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中进行表达.通过IPTG诱导,western检测表明重组蛋白的相对分子量约为35 kD.进一步在高温环境(43℃)对其生长曲线测定,发现重组菌生长状态优于对照菌,说明BnRCH及其同源基因能提高微生物的耐热性....
[期刊论文] 陈鹏 徐西兵 胡屹玲 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:通过分析大肠杆菌dnaJ缺失菌株在43℃下的生长表型,发现AtDjA5及其J-Domain能够功能性地替换DnaJ及其J-Domain.免疫共沉淀实验结果表明AtDjA5与DnaK存在相互作用.由Western blot检测推测AtDjA5能够稳定大肠杆菌热激转录因子σ32并下调热激蛋白DnaK表达量.这些发现说明AtDjA5在大肠杆菌中具有与DnaJ相似的功能....
[期刊论文] 杨皓 刘志斌 李旭锋 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:为了研究拟南芥Highly Homologous RING domain 2基因(At5g43200)在盐胁迫逆境的功能,通过DNA及RNA水平鉴定了该基因的T-DNA插入突变体athhr2,并通过根瘤农杆菌介导法进行遗传转化,筛选获得了athhr2/ATHHR2互补转基因株系.对突变体、互补转基因株系及野生型进行盐胁迫处理,对其萌发率、脯氨酸及叶绿素水平进行检测,发现盐处理后缺失突变体的萌发率降低,脯氨酸和叶绿素含量低于野生型,互补株系的萌发率、脯氨酸和叶绿素含量均高于野生型.以上结果证明AtHHR2基因在拟南芥的盐胁迫响应中起正调控作用....
摘要:2-酮戊二酸,铁离子和维生素C是氧化戊二酸依赖型加氧酶辅助因子.有的细菌缺少维生素C,因此可能不含维生素C独立体酶,为了确定细菌中是否含有这种酶系,本文首先利用生物学软件ClustalX, PHYLIP, MEME/MAST 和 HMMER在植物和动物体内验证这个酶系的系统发育关系和保守序列,然后利用那些保守序列可以用来检测细菌是否含有这种酶.分析表明细菌中确实含有2-氧化戊二酸依赖型加氧酶酶系....
[期刊论文] 张亚 罗勤 谢林峰 杨毅
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:以AtTR1作为诱饵蛋白利用泛素分裂系统在拟南芥cDNA文库中筛选与拟南芥AtTR1基因相互作用的蛋白质.运用营养缺陷型培养基和X-Gal显色、PCR扩增及酶切分析等实验排除假阳性,并对阳性克隆进行序列测定和比对.通过泛素分裂系统筛选到可靠的At-TR1相互作用蛋白质,测序比对后,选取HMA与AtTR1通过GST pull-down进行进一步的验证,结果证明它们确实存在相互作用,这对进一步研究AtTR1及其相互作用蛋白质在植物耐热中的作用和耐热分子机制奠定了基础....
摘要:对以鸡蛋花叶片作为外植体进行愈伤组织诱导和植株再生研究,发现MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1mg/L对愈伤诱导效果最好,出愈率达96%;愈伤组织分化为芽时,MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 2mg/L 效果最好,分化率达98%.生根培养基为1/2 MS+NAA 0.1 mg/L....
摘要:湖北诸葛菜属于十字花科诸葛菜属,是该属的一个新种[1].对于诸葛菜,四川大学植物研究所已做了较系统的研究[2],认为其外植体在离体培养条件下具有很强的再生能力.我们以湖北诸葛菜的叶柄、叶片为外植体,发现其具有极强的器官分化能力....
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