绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 1
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 5 条结果
摘要:目的:探讨人髓核细胞(NPCs)外泌体对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的作用.方法:取腰椎间盘突出症患者手术切除的髓核组织,体外分离培养人NPCs,采用差速离心法提取NPCs的外泌体,利用透射电镜及Western blot对外泌体进行大小形态及标志蛋白的检测,同时用PKH67荧光染料标记外泌体后与BMSCs共孵育0.5h、2h、4h,在激光共聚焦显微镜下观察BMSCs对NPCs外泌体的摄取情况;取人BMSCs经NPCs外泌体诱导3d、7d、10d、14d后应用RT-PCR检测BMSCs中蛋白聚糖(ACAN)、SOX-9、Ⅱ型胶原(COL2A1)、角蛋白19(KRT19)及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的mRNA表达情况.结果:提取的人NPCs外泌体为直径为30~ 100nm的圆形或椭圆形结构,其表达CD63和Tsg101,不表达Calnexin蛋白.经PKH67标记的NPCs外泌体可以被BMSCs摄取;经NPCs外泌体诱导后7d开始BMSCs中的ACAN、SOX-9、COL2A1、KRT19及HIF-1α基因mRNA表达均显著性高于未经诱导的BMSCs (P<0.05).结论:在体外实验中,人NPCs可以分泌外泌体并被BMSCs所摄取,诱导BMSCs分化为髓核样细胞,可为椎间盘退变的组织工程修复提供更为简单有效的NPCs来源....
摘要:目的:比较不同退变程度人椎问盘髓核组织中3种1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1/2/3)表达水平的差异,探讨椎间盘中S1PR表达水平与椎间盘退变的关系.方法:收集腰椎间盘退行性病变患者手术切除的椎间盘组织,其中轻度退变(Pfirrmann分级Ⅳ级)22例,严重退变(Pfirrmann分级Ⅴ级)14例;同时取6例无椎间盘退变患者(单纯腰椎椎体骨折,Pfirrmann分级Ⅱ级)手术切除的椎间盘组织作为对照组;通过HE染色以及Saf-O染色观察不同退变程度椎间盘的组织学变化,免疫组化检测不同退变程度组织中的S1PR表达水平;Ⅱ型胶原酶消化分离提取原代髓核细胞,通过Real-time PCR、Western-bolt检测不同退变程度椎间盘髓核细胞中S1PR的表达水平,并通过细胞免疫化学方法对S1PR进行定位.结果:HE染色及Saf-O染色结果显示退变椎间盘的纤维环出现破损,髓核细胞形成明显的集落,细胞外基质减少.免疫组化结果显示正常和轻度退变的髓核组织中3种受体(S1 PR1/2/3)都有表达,严重退变的组织中表达极弱;Real-time PCR结果显示对照组髓核细胞中S1PR1/2/3的mRNA表达水平分别是严重退变组的5.34±0.52倍、7.25±0.04倍、1.92±0.06倍,轻度退变组S1PR1/2/3的mRNA表达水平分别是严重退变组的4.35±2.45倍、4.96±3.44倍、2.19±0.82倍;Western-blot发现对照组和轻度退变组髓核细胞中S 1PR 1/2/3均有表达,严重退变组表达水平较低;免疫细胞化学显示S1PR主要集中在髓核细胞的细胞质和细胞膜上.结论:髓核组织中主要表达S 1PR 1/2/3,在严重退变的髓核组织和细胞中其表达水平明显下降,S1P及其受体可能参与椎间盘髓核组织的退变过程....
摘要:目的:比较后路微创小切口减压联合经皮椎弓根螺钉复位内固定术与传统开放减压复位内固定术治疗伴神经功能损伤胸腰椎骨折的疗效.方法:我院自2011年12月~2014年6月收治56例伴神经功能损伤的胸腰椎骨折患者,分别采用后路小切口微创减压联合经皮椎弓根螺钉复位内固定术(26例,微创组)和传统开放后路减压椎弓根螺钉复位内固定术(30例,开放组),回顾性分析两组患者围手术期相关指标、影像学指标、术后神经功能恢复情况及并发症发生率并进行比较.结果:微创组手术切口肌肉剥离长度为7.46±2.67cm,术中出血量为271.54± 125.53ml,术后引流量为74.50±73.58ml,输血比例为9/26,术后住院时间为19.19±10.66d,术后1周伤口疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale VAS)为2.54±0.65分,术后止痛药使用比例为11/26;开放组分别为12.17±4.38cm,536.67±453.52ml,310.97±209.65ml,19/30,31.17±26.92d,3.60±0.77分和21/30,两组间比较有显著性差异(P<0.05);微创组手术时间(222.88±64.41min)与开放组(190.83±83.19min)无显著性差异(P>0.05).微创组手术前、后矢状面Cobb角为10.51°±16.12°、0.70°±12.97°,伤椎椎体前缘高度百分比为(52.27±8.34)%、(86.64±12.80)%,矢状面指数为14.63°±10.29°、7.43°±6.79°,伤椎楔变角为13.45°±7.40°、4.07°±4.81°;开放组分别为15.04°±9.84°、2.96°±9.84°,(48.58±11.48)%、(86.63±9.76)%,20.67°±17.58°、7.38°±5.63°,14.16°±6.77°、4.26°±4.39°,两组术后影像学指标均较术前明显改善(P<0.05),两组影像学指标改善程度(术后-术前)相当(P>0.05).后期随访两组神经功能恢复情况和并发症发生率均无显著性差异(P>0.05).结论:后路微创小切口减压联合经皮椎弓根螺钉内固定术治疗伴神经功能损伤的胸腰椎骨折具有与传统开放手术同样的效果,且具有切口小、出血少、住院时间短、伤口疼痛轻等优点....
摘要:目的:通过Fibronectin介导进行差别粘附法筛选出入黄韧带干细胞并进行鉴定,探讨其作为组织工程种子细胞的可行性.方法:从椎间孔镜或椎间盘镜微创手术中获取10例人黄韧带标本,机械-酶消化法联合获取原代细胞,扩增二代后接种于Fibronectin包被过的培养瓶.流式细胞仪检测细胞表面特异性标志物.免疫组化方法测定干细胞表达相关特异性蛋白.使用干细胞诱导培养基(实验组)向成骨、成脂、成软骨多向诱导分化,使用常规生长培养基培养者作为阴性对照(对照组),分别行茜素红染色、油红O染色、阿利辛兰染色鉴定.PT-PCR检测成骨、成脂肪、成软骨基因表达.取同一患者的髂骨骨髓提取骨髓间充质干细胞,统计学分析黄韧带干细胞与骨髓间充质干细胞的细胞周期、增殖能力和干性基因表达差异.结果:原代细胞形态呈三角形或多角形,经Fibronectin介导粘附培养后形态比较均一,呈长梭形克隆群.流式细胞仪检测筛选后的黄韧带干细胞CD90、CD73阳性率>96.8%,CD105阳性率>95.9%,而stro-1为阴性.实验组茜素红染色呈强阳性,油红O染色可见大小不等脂滴呈红色,阿利辛兰染色大量蛋白聚糖聚集呈蓝色,对照组均为阴性.PT-PCR测定实验组成骨基因(OC、ALP、RUNX-2)、成脂肪基因(LPL、APP、PPA R2)、成软骨基因(COLⅡ、AGG、SOX9)显著上调,其中RUNX-2在对照组有低水平表达.免疫组化显示黄韧带干细胞和骨髓间充质干细胞均表达a-SMA、Ⅰ型胶原、纤连蛋白,但均不表达Ⅱ型胶原.两种干细胞均超过80%的细胞比例处于G0/G1期提示都有很强自我更新能力(P>0.05).CCK-8检测不同时间点两种细胞的增殖能力,在1~10天时OD值逐渐增加,10~14天达稳定状态,二者有相似的增殖能力(P>0.05).两种干细胞均表达干性基因NONAG、OCT-4、SOX2,组间差异无显著性(P>0.05).结论:通过Fibronectin差别粘附筛选法可有效筛选纯化出黄韧带干细胞,其可向成骨、成脂、成软骨多向分化,为组织工程技术治疗退变椎间盘提供了新的种子细胞....
[硕士论文] 杨匡
外科学(骨科) 第三军医大学 2016(学位年度)
摘要:R681.57
  R604
  怎么就又诊断了?
  目的:慢性下腰痛在各类人群中都普遍存在。现有的研究表明,椎间盘的退行性病变是慢性腰痛的主要病因,因此关于椎间盘退变的研究是脊柱外科基础研究的热点。椎间盘的退变与多种因素相关,包括压力,老化,炎症,营养途径等。随着退变的进展,椎间盘的组织学特点发生变化:纤维环组织出现细小裂隙甚至破损,髓核组织脱水,血管和神经组织渗透,破坏了原有的内环境稳态;软骨终板的钙化导致原有营养途径受阻;从功能和生理学的角度分析不难发现,这些组织学变化也促进了退变的进展。
  进一步的研究发现,随着退变的进展,髓核组织细胞外基质成分和细胞表型也发生改变。作为椎间盘的功能基础,基质成分的变化被认为是椎间盘退变的标志。目前的研究发现:退变的椎间盘组织中,髓核基质中亲水性蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的减少,Ⅰ型胶原和蛋白聚糖分解产物增加;与细胞外基质降解相关的炎症因子以及各类分解酶(比如IL-1β/TNF-α/MMP/ADAMT)表达上调。近年来,与椎间盘特殊内环境、细胞生理功能相关的基因或者蛋白被越来越多的发现、研究和报道,它们有的可以作为椎间盘组织退变的标志,有的细胞的正常代谢或者退变的相关病理进展中发挥作用;这些研究成果可以帮助我们更深刻的认识椎间盘的退变,进而找到更好的诊疗方法。
  1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一种重要的脂质介质,是鞘氨醇激酶(SPHK)的催化作用下鞘氨醇磷酸化生成的。它参与细胞迁移、分化、炎症反应以及血管生成等多种生物反应。S1P通过与其受体结合发挥作用,目前已经确定的S1P受体(S1PR)有5种亚型,都属于G蛋白偶联型受体。值得注意的是,在人类软骨细胞中,S1P可以通过活化其受体抑制白介素1β(IL-1β)引发的基质降解作用,由此推断S1PR的活化可能成为骨关节炎的治疗作用靶点。考虑到髓核细胞和软骨细胞相似的生物学特点,S1P及其受体在椎间盘的退变的治疗和控制中表现出一定的应用前景。但是,有关S1PR在椎间盘组织中的表达以及S1P在椎间盘退变中的作用尚未见文献报道。
  在本研究中,我们首先证实S1PR在髓核组织的表达;进而对比了不同退变的程度的髓核细胞中S1PR的表达水平,探讨S1PR与椎间盘退变中可能的相关性;在此基础上我们对其在椎间盘退变中的作用进行了初步探索。
  方法:1.标本的收集。
  本研究已获得新桥院伦理审查委员会批准并与患者签署书面知情同意文件。
  纳入标准
  实验组:椎间盘退行性疾病(包括腰椎间盘突出、腰椎管狭窄或者腰椎滑脱)的患者;对照组:青少年椎体骨折的患者,无椎间盘退变影像学表现得腰椎骨折患者的椎间盘标本。
  排除标准:并发感染、肿瘤、免疫性疾病或者其他全身性疾病的病例。
  手术标本收集之后,分成两部分分别进行组织形态学实验(包括苏木素-伊红染色、藏红-固绿染色免疫组织化学)和细胞学实验(包括髓核细胞的分离培养、Real-timePCR和western-blot实验);根据已发表的文献的评价标准,从组织学角度对每一例椎间盘标本退变的程度进行评价和分级,并分析了组织分级与priffmann分级的一致性。
  2.S1PR在不同退变程度的椎间盘中的表达差异
  通过免疫组织化学、免疫细胞化学的方法明确S1PR在椎间盘组织中的表达和定位。通过Real-time PCR和western blot评价对比不同程度退变程度的髓核细胞中S1PR的表达水平变化。
  3.S1PR在椎间盘退变中的作用
  分离培养的髓核细胞分为3组,即对照组、IL-1β处理组、IL-1β+S1P处理组;通过Real-time PCR和western blot对比3组髓核细胞中基质降解酶:MMP-3和ADAMTS4的表达水平;不同浓度的S1P分别作用于髓核细胞,通过ELISA和阿利新蓝染色对比处理前后髓核细胞中蛋白聚糖(aggrecan)的表达水平的变化。
  结果:1.组织学评分可以有效的对椎间盘退变的程度进行评价,与影像学priffmann分级结果基本吻合。
  2.免疫组织化学证实:髓核组织中S1PR1/2/3都有表达, S1PR2的表达阳性率略高于S1PR1/3;免疫细胞化学实验证实:S1PR在髓核细胞中主要定位在细胞膜上和细胞质中。
  3.Real-time PCR和western blot实验对比不同程度退变的髓核细胞中S1PR的表达水平,发现在严重退变的髓核细胞中S1PR1/2/3的表达水平明显下降。
  4.IL-13可以明显上调髓核细胞中MMP-3和ADAMTS4的表达水平: S1P可以抑制的IL-1β的效用使髓核细胞中这两种基因的表达降低;ELISA和阿利新蓝染色发现S1P处理后髓核细胞中AGG的含量下降。
  结论:1.髓核组织可表达S1PR1/2/3,其中S1PR2的表达阳性率最高,并主要定位在细胞膜和细胞质
  2.严重退变的髓核细胞中S1PR1/2/3表达水平明显下降,表明S1PR的表达可能与髓核的退变相关
  3.在髓核细胞中S1P/S1PR可以抑制IL-1β引起的基质降解效应,S1P处理髓核细胞,下调了AGG的表达水平,这些结果说明S1PR及其相关信号在髓核退变中发挥了作用。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

万方选题

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部