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摘要:[目的]探究RFRP-3对大鼠附睾生殖功能的影响,为全面了解RFRP-3调控雄性动物的生殖生理功能提供理论依据.[方法]通过半定量RT-PCR检测不同发育阶段(20、40、60和80日龄)SD大鼠附睾中RFRP-3及其受体GPR147的表达情况;选取60日龄雄性SD大鼠,分别对其睾丸注射0(CK)、0.1、1.0和10.0μg/d的RFRP-3,连续注射7 d,然后通过组织石蜡切片、酶活性测定、Western blotting等分别检测不同剂量RFRP-3对SD大鼠附睾形态学、Caspase-3活性、凋亡相关蛋白(Caspase-3和Bcl-2)和自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3和Atg5)表达的影响.[结果]RFRP-3和GPR147在不同发育阶段SD大鼠附睾中的表达水平呈波动性变化,均以60日龄的表达水平最高;不同剂量的RFRP-3均能导致SD大鼠附睾上皮细胞发生异常,使精子数量减少.与CK相比,不同剂量的RFRP-3均能极显著增加SD大鼠附睾Caspase-3活性(P<0.01,下同),还能显著(P<0.05,下同)或极显著提高附睾中活化Caspase-3与完整Caspase-3的比值,有效抑制Bcl-2的表达,且呈明显的剂量依赖关系.RFRP-3对SD大鼠附睾内自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-II/LC3-I和Atg5的表达出现相互矛盾的结果.[结论]RFRP-3在雄性大鼠附睾中有表达,但对附睾活性有直接抑制作用,具体作用原理是RFRP-3能诱导附睾中总Caspase-3裂解为活性Caspase-3并下调Bcl-2表达以触发附睾细胞凋亡,而附睾细胞的凋亡促使附睾退化及精子数量减少....
摘要:为当地珍贵速生树种人工林的发展及合理利用提供理论依据.分析广西5种珍贵树种人工林土壤微生物数量及土壤酶活性差异,以相同立地条件下12年生的黑木相思(Acacia melanoxylon)、老排(Mytilaria laosensis)、红椎(Castanopsishystrix)、黧蒴椎(Castanopsis fissa)和火力楠(Michelia macelurei)人工纯林为研究对象,采用稀释平板涂布法和土壤酶活性测定法,测定和分析该5种人工林地土壤微生物数量及酶活性.结果表明:5种林地的土壤微生物总数和细菌数量大小均为:火力楠>黧蒴锥>红椎>黑木相思>米老排.但5种林地的土壤酶活性大小不一,蔗糖酶、脲酶、蛋白酶、酸性磷酸酶活性在5种林地之间的差异极其显著,而过氧化氢酶活性不显著.5种林地中土壤酶活性相对较强的是米老排人工林,较弱的是黑木相思林和火力楠林.土壤酶活性与微生物数量的相关分析表明,土壤中蔗糖酶活性与放线菌数量呈极显著正相关关系,其余相关性没有达到显著水平....
摘要:[目的]利用农杆菌介导法,将外源冷调节基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织,建立快速、高效的甘蔗遗传转化体系,为培育具抗寒性甘蔗品种奠定基础.[方法]以新台糖22号(ROC22)为材料,通过对愈伤组织诱导、分化、生根等培养基进行优化,筛选出外源基因转化甘蔗的适合激素种类与用量、PPT用量、抗生素种类与用量;利用甘蔗转基因二元植物表达载体pCambia1300-Cbcor15a-bar,通过农杆菌介导法将目的基因Cbcor15a导入甘蔗愈伤组织.[结果]当农杆菌菌液OD600为0.4、侵染20 min时有利于愈伤组织分化;甘蔗愈伤组织诱导和分化培养阶段的最佳PPT为0.50mg/L.侵染后在共培养中添加500.00 mg/L抗生素Cef能有效抑制农杆菌,添加300.00 mg/L抗生素Cef能促进愈伤组织分化成苗,添加200.00 mg/L抗生素Cef能促进幼苗生根.MS培养基中添加低量NAA更有利于甘蔗愈伤组织的分化;在促进细胞分裂时KT的效果明显优于6-BA.MS培养基中添加5.00 mg/L NAA和70.00 g/L蔗糖能有效促进分化苗生根.利用建立的遗传转化体系可获得286株转冷调节基因Cbcor1 5a的甘蔗转化植株;选取83株通过PPT抗性筛选后长势良好的转化植株进行阳性检测,其中有4株呈阳性.[结论]利用农杆菌介导的Cbcor15a基因转化甘蔗的遗传转化体系能成功将Cbcor15基因整合到甘蔗基因组....
摘要:[目的]利用载体重组技术分别将高山离子芥冷诱导基因(Cbcor15a)和报告基因eGF插入载体pCambia1300-bar,并引入玉米泛素基因启动子UBi-1代替载体本身启动子CaMV 35s,重组为适合甘蔗转基因的二元植物表达载体pCambia 1300-cbcor 15a-bar.[方法]参照pCambia1300-bar载体多克隆位点和基因Cbcor15a、eGFP和启动子UBi-1的核苷酸序列设计引物,通过载体重组技术将基因和启动子分别插入相应的位点.利用基因枪分别将pCambia1300-bar载体和重组载体导入洋葱表皮细胞,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察.[结果]与导入pCambia 1300-bar载体的洋葱表皮细胞相比较,导入重组载体pCambia1300-cbcor15a-bar的洋葱表皮细胞内有强烈的绿色荧光信号.[结论]重组甘蔗转基因二元植物表达载体启动子Ubi-1能够调控下游冷诱导基因Cbcor15a和报告基因eGFP的正常高效表达,为外源基因Cbcor15a转化甘蔗提供保障....
摘要:[目的]克隆甘蔗MAP激酶家族新基因的全长序列,为了解甘蔗抗逆胁迫机制提供依据.[方法]以新台糖22为材料,提取甘蔗幼叶总RNA并反转录为cDNA;利用已知物种MAP激酶基因核苷酸序列保守区设计引物,采用5′和3′端RACE技术克隆新基因全长,并进行生物信息学分析.[结果]克隆获得的甘蔗新基因与玉米ZmMAPK4同源性很高,达92.6%,将该基因命名为SoMAPK4(登录号JQ062930),基因全长1499 bp,其中开放阅读框(ORF)为1128 bp,5′非翻译区(UTR)为218 bp,3′非翻译区(UTR)为213 bp.生物信息学分析结果表明,SoMAPK4基因编码一个含376个氨基酸的蛋白质,分子量约43.5 kDa,等电点为5.51,含有11个保守的蛋白激酶亚区和MAP激酶的磷酸化位点TEY基序.[结论]克隆获得甘蔗MAP激酶新基因SoMAPK4,该基因可能参与多种胁迫反应的信号传递,是研究甘蔗非生物胁迫和生物胁迫过程中信号传递的一个关键因素....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:采用AFLP技术,从64对引物中筛选出5对带型分布均匀、多态性丰富且分辨能力强的引物,对两个在生产上广泛推广应用的甘蔗品种的AFLP指纹图谱进行分析,计算了两品种间的遗传相似性和遗传距离.结果表明,5对引物在2个甘蔗品种间均存在显著的差异,其中多态性位点占总扩增位点的10.2%,区分率达100%.这对应用AFLP技术鉴定甘蔗品种的真伪提供了依据.本文还对甘蔗AFLP分析体系的关键技术以及银染的安全性和可靠性进行了讨论....
摘要:本研究采用AFLP技术,从64对引物中筛选出5对带型分布均匀、多态性丰富且分辨能力强的引物,对两个在生产上广泛推广应用的甘蔗品种的AFLP指纹图谱进行分析,计算了两品种间的遗传相似性和遗传距离.结果表明,5对引物在2个甘蔗品种间均存在显著的差异,其中多态性位点占总扩增位点的10.2%,区分率达100%.研究结果对生产上应用AFLP技术鉴定甘蔗品种的真伪性提供了依据.本文对甘蔗AFLP分析体系的关键技术以及银染技术的安全性和可靠性进行了讨论....
[硕士论文] 李鸣
兽医学 广西大学 2018(学位年度)
摘要:GnIH是日本科研团队在鹌鹑的脑内发现的一种C端具有RF酰胺结构的新型神经肽。后来,在哺乳动物上也发现具有RF酰胺结构的神经肽,这种RF酰胺肽被命名为RF相关肽(RFRP),其中RFRP-3与鸟类的GnIH生理作用一致。目前,在附睾水平研究RFRP-3对雄性动物生殖功能影响的相关研究还很少。本研究通过检测了不同发育阶段大鼠附睾中RFRP-3和GPR147mRNAs的表达情况;然后通过体内实验,检测不同剂量RFRP-3对大鼠附睾形态学、凋亡和自噬相关蛋白表达的影响,探究RFRP-3对大鼠附睾生殖功能的影响。
  本研究可分为三个部分:(1)检测20、40、60、80日龄大鼠的附睾中RFRP-3和GPR147mRNAs表达的变化(分别对应P20、P40、P60和P80)。结果显示,RFRP-3和GPR147mRNAs的表达水平随着大鼠附睾发育呈现波动性变化,在P60处RFRP-3和GPR147mRNAs的表达水平最高,提示RFRP-3及其受体可能参与大鼠附睾的发育并调控其生殖活动。(2)通过体内实验,观察RFRP-3对大鼠附睾组织形态的影响。将大鼠分为对照组和0.1μg,1μg和10μg/天不同剂量组,每组6只。连续7天对大鼠睾丸内注射RFRP-3后,摘除一侧的附睾制作石蜡切片、HE染色,在显微镜下进行观察。结果显示,RFRP-3能呈剂量依赖性的导致附睾上皮细胞发生异常,并使附睾内精子数量显著降低,提示RFRP-3诱导附睾呈现功能性衰退。(3)通过对大鼠附睾中凋亡、自噬的水平进行检测,研究RFRP-3引起大鼠附睾功能性衰退的机制。一方面,我们检测到RFRP-3可以诱导附睾组织中Caspase-3的活性增加。另一方面,通过Western blot检测发现不同剂量的RFRP-3引起附睾中凋亡、自噬标志蛋白质的表达出现相互矛盾的结果,这提示细胞凋亡和自噬之间有着复杂的相互作用。
  综上所述,RFRP-3对雄性大鼠附睾的生殖功能起着重要的调控作用,可能是因为RFRP-3介导了附睾的细胞凋亡和自噬。
摘要:甘蔗(Saccharum officinarum L.)不仅是我国最主要的糖料经济作物,也是世界上最重要的糖料作物,蔗糖占食糖总量的80%左右,还是生产糖醛、葡聚糖、造纸和一些天然药用化合物等产品的工业原料。甘蔗糖业在国民经济中占有重要地位,不仅是重要的工业原料,还与食品、制药、机械制造业、建筑、交通运输业等紧密相关,也是人们日常生活中不可缺少的组成部分。随着石油的日益枯竭和油价的不断攀升,世界各国都在积极寻找和研究新型可再生能源,而甘蔗就是解决世界能源危机最理想、最重要的非粮生物质能源作物之一。
摘要:低温冷害是农业生产中一种最为严重的自然灾害,每年因冷害给全世界农业生产造成巨大的损失。地处亚热带的广西以往很少遭遇低温冷害影响,种植作物对低温冷害的抵御能力很弱。甘蔗不仅是我国最主要的糖料经济作物,也是世界上最重要的糖料作物,蔗糖占食糖总量的80%左右。近年来,因气候反常和栽培品种单一等因素致使广西甘蔗糖业生产遭受了严重的低温冷害和巨大的经济损失。高山离子芥生长在新疆天山冰川前沿冻融带,是多年生草本植物。是生长在海拔约2600-4200米气候寒冷的亚高山草甸或碎石坡上的冰缘植物。本研究以高山离子芥冷诱导基因Cbcor15a为目的基因,在载体pCambia1300的基础上,以Ubi为启动子,GFP为报告基因,Bar基因为筛选标记,构建了甘蔗转基因二元植物表达载体。
[硕士论文] 李鸣
作物栽培学与耕作学 广西大学 2003(学位年度)
摘要:该文用AFLP技术鉴定和区分了来自不同国家和地区的24个甘蔗种质,并对各种质的AFLP指纹图谱进行遗传多样性和聚类分析,结果表明各种质间存在丰富的遗传多样性,多态性位点比例最高为52.6﹪,最低为11.5﹪,平均为41.2﹪.通过聚类分析将24个种质分为5大类,其中粤糖76/329和云蔗68/154聚为一类,距离最小方差为0.0112;芒戈独为一类;其他各类的距离最小方差均在0.02至0.05之间.该研究还用AFLP技术鉴定了T23和T25两个台糖甘蔗品种,结果表明这两个品种亲缘关系非常近,平均多态性位点比例为10.2﹪,遗传相似系数为0.897,遗传距离为0.103.该研究结果表明AFLP技术是一种重复性高、多态性丰富、安全可靠的DNA指纹技术,可以在甘蔗种质研究等多个领域进行应用.
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