绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 1
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 3 条结果
[硕士论文] 李贺侠
病原生物学 安徽理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨PI3K/AKT信号通路在FABP疫苗特异性免疫治疗中的作用机制。
  方法:1)用分子生物学方法合成Blot序列基因片段,然后将其插入原核表达空质粒pET28a(+)中,以T4DNA连接酶构建含pET28a(+)和Blot的重组质粒pET28a(+)-Blot,采用限制性内切酶对保存于本实验室的空质粒pET28a(+)以及在本次实验中所构建的重组表达质粒pET28a(+)-Blot进行双酶切鉴定处理。2)将重组表达质粒pET28a(+)-Blo t转化入E.coli DH5a感受态细胞,进行菌落PCR、筛选阳性克隆以及测序鉴定,测序分析正确后,使用IPTG诱导目的蛋白FABP的小剂量表达,优化表达条件后再诱导目的蛋白FABP的大剂量表达和纯化,接着用SDS-PAGE和Western bloting方法对表达纯化的目的蛋白FABP进行检测验证分析,最后,采用SK3071非干扰型蛋白定量试剂盒测定目的蛋白FABP的浓度。3)以热带无爪螨粗制提取液制备哮喘小鼠模型,40只雌鼠随机分为4组:阴性对照组、哮喘组、FABP免疫治疗组和PI3K抑制剂组。其中哮喘组、FABP免疫治疗组和PI3K抑制剂组各小鼠分别在实验的第0d、7d、14d行腹腔三次注射热带无爪螨变应原粗制提取液以敏化各小鼠,并于第21d起雾化吸入激发,30min/次/天,连续7天;而阴性对照组则同时使用相等剂量的PBS对各小鼠行腹腔注射和雾化激发处理。FABP免疫治疗组和PI3K抑制剂组于第25d、26d、27d雾化前0.5h,腹腔注射疫苗FABP对各小鼠进行免疫治疗;而PI3K抑制剂组则于使用疫苗FABP对各小鼠行免疫治疗前1.5h雾化给予PI3K抑制剂LY294002;阴性对照组则同时使用相等剂量的PBS对各小鼠行腹腔注射治疗和雾化激发处理;同时阴性对照组、哮喘组、FABP免疫治疗组在治疗前用等量抑制剂溶解剂DMSO雾化处理。4)各组小鼠在末次雾化激发后24h内进行取材处理,接着对各小鼠行相关检测:ELISA法检测实验组各小鼠BALF中及脾培养上清中IL-4、IL-5、IL-13、IL-17、IL-10和IFN-γ细胞因子及血清中特异性抗体IgE、IgG1和IgG2a的含量,并作肺组织病理切片和BALF中细胞分类计数,最后提取肺组织蛋白行West blot检测通路信号蛋白及磷酸化(Akt、p-Akt、IκB-a和p-IκB-a)情况。
  结果:1)双酶切和测序鉴定结果说明,本实验已经成功构建了重组质粒pET28a(+)-Blot。2)SDS-PAGE和Western bloting检测结果说明本实验已经成功诱导表达并纯化了目的蛋白FABP;根据标准曲线计算出纯化的目的蛋白FABP的浓度为1.12mg/ml。3)ELISA法检测结果说明,与哮喘组进行比较,FABP免疫治疗组各小鼠BALF中和脾培养上清中IL-4、IL-5、IL-13和IL-17细胞因子的含量均下降显著,IL-I0和IFN-γ含量均升高显著,而血清中抗体IgE和IgG1的含量均下降显著,IgG2a含量升高显著,各数据间差异则具高度统计学意义(P<0.01);与FABP免疫治疗组进行比较,PI3K抑制剂组各小鼠BALF中和脾培养上清中IL-4、IL-5、IL-13和IL-17细胞因子的含量均升高显著,IL-10和IFN-γ含量均下降显著,而血清中抗体IgE和IgG1的含量均升高显著,IgG2a含量下降显著,各数据间差异则具高度统计学意义(P<0.01);PI3K抑制剂组与哮喘组进行比较,各数据间差异则不具统计学意义(P>0.05)。肺组织病理切片结果说明,与哮喘组进行比较,FABP免疫治疗组各小鼠肺部炎性症状均有很大程度上的改善,炎症细胞浸润现象也有较大程度上的减轻,各气道上皮的结构也较良好,哮喘症状明显缓解;与FABP免疫治疗组进行比较,PI3K抑制剂组各小鼠肺泡隔显著增宽,支气管管壁增厚,管壁间炎症细胞明显增多,腔内有分泌物,类似哮喘组症状。BALF中细胞计数结果说明,与哮喘组进行比较,FABP免疫治疗组各小鼠Total及EOS数均下降显著,各数据间差异则具高度统计学意义(P<0.01);与FABP免疫治疗组进行比较,PI3K抑制剂组各小鼠Total及EOS数均上升显著,各数据间差异则具高度统计学意义(P<0.01);PI3K抑制剂组与哮喘组进行比较,各数据问差异则不具统计学意义(P>0.05)。Western bloting检测肺组织信号蛋白及其磷酸化(Akt、p-Akt、IκB-a和p-IκB-a)情况结果说明,FABP免疫治疗组与哮喘组进行比较,p-Akt/Akt、p-IκB-a/β-actin的值均明显降低,IκB-a/β-actin的值则升高显著,各数据间差异则具高度统计学意义(P<0.01);PI3K抑制剂组与FABP免疫治疗组进行比较,p-Akt/Akt、p-IκB-a/β-actin的值均明显升高,IκB-a/β-actin的值则降低显著,各数据间差异则具高度统计学意义(P<0.01);PI3K抑制剂组与哮喘组进行比较,各数据间差异则不具统计学意义(P>0.05)。
  结论:成功构建了重组质粒pET-28a(+)-Blot,并完成了目的蛋白FABP的大规模原核表达和纯化;利用表达的目的蛋白FABP对热带无爪螨粗制提取液敏化的哮喘小鼠进行免疫治疗,可在很大程度上改善小鼠的哮喘症状;蛋白疫苗FABP对哮喘小鼠进行特异性免疫治疗的分子作用机理很可能是通过调节分子信号通路PI3K/AKT/NF-κB来完成的,为后续凶螨致哮喘的治疗提供新思路。
摘要:过敏性哮喘是一种以肺部嗜酸粒细胞浸润和对各种激发因子产生气道高反应性为特征的慢性气道炎性疾病,而粉尘螨引起的过敏性哮喘最为常见且发病率呈上升趋势.文中具体介绍了粉尘螨引起的过敏性哮喘信号通路的研究现状和发展趋势,借助实验研究疫苗的特异性免疫治疗与信号通路之间的作用关系,揭示通路机制可作为粉尘螨引起的过敏性哮喘的特异性免疫治疗的新方法.
摘要:为开发利用壳聚糖,选择两种不同性质壳聚糖进行体外抑菌试验.将白色壳聚糖(Ⅰ组)和褐色壳聚糖(Ⅱ组)的乙酸溶液、褐色壳聚糖水溶液(Ⅲ组)用无菌蒸馏水分别稀释至10,5,2.5,1.25 g/L和0.625 g/L,用相应稀释度乙酸溶液(Ⅳ组)作对照组.对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、绿脓杆菌、鸡伤寒沙门菌进行体外抑菌试验.结果表明,在体外,壳聚糖对上述5种细菌的生长均有不同程度的抑制作用,不同性质的壳聚糖和同一性质不同浓度的壳聚糖抑菌效果不同.
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部