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找到 34 条结果
摘要:目的 观察转染人骨形成蛋白-7(Bone morphogenetic protein-7,BMP-7)基因的骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells.BMSCs)与胶原膜(BME-10X)复合培养后的异位成骨能力.方法 将hBMP-7基因转染 Beagle 犬 BMSC,与胶原膜复合培养后,植入裸鼠皮下,8周后取材,HE、Mallory染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色,观察其异位成骨能力.结果 各组均有不同程度Ⅰ型胶原的表达,转染组和未转染组显著高于单纯膜组,转染组又显著高于未转染组(P<0.05).结论 转染了hBMP-7基因的BMSCs具有更强的异位成骨能力,有望成为牙周组织工程理想的种子细胞....
摘要:目的 探讨两种常见培养液:DMEM和RPMI1640对Beagle犬牙龈成纤维细胞生物学活性的影响.方法 使用半消化+改良组织块法原代培养Beagle犬牙龈成纤维细胞,了解两种培养液下Beagle犬牙龈成纤维细胞游出成功率的差异;使用MTT、流式细胞仪检测两种培养液下细胞增生的情况;使用免疫细胞化学的方法检测两种培养液下Beagle犬牙龈成纤维细胞体外表达Ⅰ型胶原的差异.结果 DMEM和RPMI1640对Beagle犬牙龈成纤维细胞的游出成功率、增生以及Ⅰ型胶原的表达均无显著性差异.结论 DMEM和RPMI1640两种培养液均适合Beagle犬牙龈成纤维细胞的培养....
[期刊论文] 李艳芬 闫福华 钟泉 赵欣
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CSTPCD 北大核心
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摘要:目的 探讨人骨形成蛋白-7(Hbmp-7)基因修饰的骨髓基质细胞(BMSC)在牙周组织再生中的作用,为基因治疗与组织工程联合应用于牙周组织缺损再生治疗奠定基础.方法 人工构建5只Beagle犬慢性Ⅱ度根分叉病变模型,将转染Hbmp-7基因的BMSCs与未转染BMSCs分别以1×107个/ml接种于胶原膜BME-10X,植入牙周缺损内,对照组仅植入胶原膜,12周后HE染色观察牙周组织再生情况.结果 各实验组和对照组均可见不同程度的牙周组织再生,实验组新生牙槽骨面积百分比和新生牙骨质长度百分比与对照相比有明显增加(P<0.05);转染细胞复合胶原膜组新生牙槽骨面积百分比(81.8%±7.8%)与未转染细胞复合胶原膜组(67.3%±10.3%)相互比较差异有统计学意义(P<0.05);而其新生牙骨质长度百分比(79.1%±8.6%与75.6%±7.3%)比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Hbmp-7基因强化的组织工程技术是修复牙周组织缺损的一种较好的方法,有很好的临床应用前景....
摘要:目的 研究不同初始接种浓度对Beagle犬骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)体外成骨能力的影响.方法 将体外培养扩增的第1代BMSCs制成不同浓度(5×107 eells/mL、5×106 cells/mL、5×105 cells/mL)的细胞悬液,分别接种于60 mm培养皿,观察矿化结节形成的时间;并分别与胶原膜BME-10X复合,比较2 d、5 d、7 d的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性.结果 细胞初始接种密度越高,形成矿化结节的时间就越短;在细胞载体复合物中,同一浓度组的ALP活性随培养时间的延长而增加;在相同天数,5×107 cells/mL组与5×106 cells/mL组、5×105 cells/mL组之间ALP含量有显著差异,而5×106 cells/mL组与5×105 cells/mL组之间则无显著差别.结论 BMSCs体外的成骨能力与细胞的接种密度有关,初始接种密度越高,其体外的成骨能力就越强....
摘要:随着我国高等医学教育的迅速发展,传统的医学教育模式已经不能适应现代医学教育的需要,教学模式改革迫在眉睫.医学本科生导师制是医学本科教育的一种重要途径和方法,有多种多样的形式.本文主要探讨一种新的口腔医学专业本科教育导师制模式的意义和实施方法,为口腔医学教育探索一条新的途径.同时,针对该模式实施过程中可能出现的问题,提出了初步的解决方法和思路....
摘要:目的 检测β-磷酸三钙(β-TCP)生物陶瓷对狗骨膜细胞生长、增殖和分化特点的影响,探讨β-TCP作为牙周组织工程支架材料的可行性.方法 组织块法培养的骨膜细胞经传代培养后,接种于β-TCP上培养.通过MTT、流式细胞术和碱性磷酸酶试剂盒检测骨膜细胞的增殖和成骨分化情况,并通过扫描电镜观察细胞在材料表面生长情况.结果 骨膜细胞能在β-TCP上贴附生长,其增殖和成骨分化能力无明显改变.结论 β-TCP有望作为骨膜细胞的载体应用于牙周组织工程研究....
摘要:背景: Beagle犬性情温和、遗传背景明确,且牙周结构与人类相似,是研究牙周疾病的常见大型动物模型.目的: 体外分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞.设计、时间及地点: 观察埘比实验,于2006-09/2007-02在福建医科大学附属口腔医院中心实验室和解放军南京军区福州总院比较医学科完成.材料: Beagle犬5只,12月龄,体质量10-13 kg,雄性.方法: 基础麻醉下,切取Beagle犬游离龈.使用半消化+改良组织块法分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞;手术及组织学观察确定组织块来源.以经成骨诱导的骨髓基质干细胞作为阳性对照组,试剂盒内标准品作为标准组,蒸馏水作为空白组.主要观察指标: 免疫细胞化学及碱性磷酸酶检测明确细胞来源;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖状况. 结果: 末经胰酶处理的组织块边缘锐利,组织致密;上皮细胞迅速增殖,呈鹅卵石样占满组织块周边.经胰酶处理过的组织块疏松,其周围上皮细胞少.成纤维样细胞游出迅速.波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性.结果证实所取组织块为Beagle犬游离龈;免疫细胞化学证实细胞源于中胚层.此成纤维样细胞基本不表达碱性磷酸酶,细胞增殖状况良好.结论: 使用半消化+改良组织块法能够分离、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞....
摘要:目的 比较犬骨髓基质细胞(BMSC)和牙周膜细胞(PDLC)体内成骨及成韧带样组织的能力,为牙周组织工程种子细胞的选择提供实验依据. 方法 将体外培养Beagle犬BMSC及PDLC与脱细胞真皮基质(ADM)膜复合后植入裸鼠皮下,以单纯ADM为对照组,分别于术后4周和8周进行标本组织学及免疫组织化学染色分析,比较骨保护素(OPG)和胶原Ⅻ的表达. 结果 复合物植入4周和8周组织学观察显示,BMSC形成骨样组织多于PDLC,面形成韧带样组织少于PDLC.免疫组织化学染色显示,BMSC组的OPG表达量高于PDLC组,但胶原Ⅻ的表达量低于PDLC组. 结论 BMSC体内成骨能力高于PDLC组,但成韧带样组织能力低于PDLC组....
摘要:目的 检测携带人血小板源性生长因子-B(hPDGF-B)基因的真核表达质粒在Beagle犬牙龈成纤维细胞内的表达.方法 扩增和鉴定携带hPDGF-B基因的质粒EX-A0380-M03,脂质体介导的方法转染Bealge犬牙龈成纤维细胞,RT-PCR、免疫细胞化学、ELISA以及Western blot检测hPDGF-BB的表达.结果 EX一A0380一M03所携带的目的 基因为hPDGF-B基因,转染牙龈成纤维细胞24h后可观察到细胞内的绿色荧光蛋白,48h转染效率可达18%~38%.RT-PCR、免疫细胞化学、ELISA均能检测到细胞表达hPDGF-B.Western blot证实所表达的蛋白为融合蛋白.结论 携带hPDGF-B基因的真核表达载体EX-A0380-M03能被转入牙龈成纤维细胞,并成功表达一种融合蛋白....
摘要:目的 观察胶原膜BME-10X与Beagle犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)的生物相容性,为将其运用于组织工程技术修复牙周缺损提供理论依据.方法 体外培养Beagle犬BMSCs,并与胶原膜BME-10X复合培养.HE染色检测细胞与材料的黏附,MTT法检测细胞的增殖,并行碱性磷酸酶(ALP)活性检测.结果 BMSCs复合胶原膜后生长良好,MTT及ALP结果均显示,在各时间点,对照组和实验组间增殖及ALP活性均无显著性差异(P>0.05).结论 胶原膜BME-10X有良好的生物相容性,有望成为BMSCs的载体材料应用于牙周组织工程研究....
[期刊论文] 钟泉 李艳芬 闫福华
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CSTPCD 北大核心
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摘要:背景:前期研究发现人血小板源性生长因子B基因转染的牙龈成纤维细胞能够在体外快速增殖,且能够向胞外分泌血小板源性生长因子BB蛋白。目的:了解人血小板源性生长因子B基因修饰牙龈成纤维细胞植入脱细胞真皮基质后,在体内形成牙周组织工程化复合物的能力。方法:将人血小板源性生长因子B基因转染与未转染的Beagle犬牙龈成纤维细胞分别接种于脱细胞真皮基质上,观察细胞在脱细胞真皮基质上的生长情况。将人血小板源性生长因子B基因转染犬牙龈成纤维细胞-脱细胞真皮基质复合物(实验组)、犬牙龈成纤维细胞-脱细胞真皮基质复合物(对照组)及脱细胞真皮基质(空白组)分别植入裸鼠背部皮下,植入后2,4,8周,取背部标本进行组织学观察。结果与结论:人血小板源性生长因子B基因转染与未转染的犬牙龈成纤维细胞均能在脱细胞真皮基质上良好生长。植入后8周,空白组周围的细胞大面积进入脱细胞真皮基质内,部分脱细胞真皮基质出现完全自体化,尽管细胞进入较多,但新生成的胶原纤维较少,细胞只是占据原有的胶原支架生长;对照组开始出现大面积新生胶原纤维,脱细胞真皮基质上原有的胶原纤维逐步被新生的胶原替代,但原有的胶原结构得到保留;实验组出现大面积完全矿化,可见沿原有胶原支架排列的矿化颗粒。表明接种人血小板源性生长因子B基因修饰牙龈成纤维细胞的脱细胞真皮基质在体内获得了成骨性能。...
摘要:目的:观察人骨保护素(human osteoprotegerin,hOPG)在犬牙周韧带细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)中的表达情况,为后期的牙周组织再生实验制备高表达目的基因hOPG的种子细胞。方法:体外构建携带hOPG基因的腺病毒载体Ad5-hOPG-EGFP,并将其转染Beagle犬PDLCs,通过流式细胞术、实时定量RT-PCR、ELISA以及Western Blot检测目的基因的转录和表达。结果:重组腺病毒Ad5-hOPG-EGFP成功转染犬PDLCs,转染72 h后转染效率达到80%以上,转染的细胞发出较强的绿色荧光;基因和蛋白水平检测表明,hOPG在犬PDLCs中得到了有效表达。结论:重组腺病毒介导的hOPG基因可以在PDLCs中有效表达。...
[期刊论文] 林实 李榕卿 李艳芬 蔡晶
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北大核心 CSTPCD CA
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摘要:目的:检测牙龈卟啉菌内毒素(Pg-LPS)刺激大鼠腹腔巨噬细胞所释放的NO、肿瘤坏死因子α和H2O2是否受到束缚应激的影响.方法:实验于2005-09/2006-02在福建医科医科大学口腔医学院和福建中西医结合研究院实验室进行.①分组:取14只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组及应激组,每组7只.②造模:正常组不加刺激,应激组大鼠置于特制的圆柱形筒内,于实验开始最初3 d每日9:00~15:00被置于束缚筒6 h,3 d后于每日9:00至次日9:00被置于束缚筒24 h,正常饲养24h后再应激24 h,如此循环直至实验结束.③观察指标:观察造模12 d后两组大鼠体质量变化,并及时处死,收集腹腔液,计数巨噬细胞总量.贴壁后的巨噬细胞分成2组分别继续用RPMI-1640培养液和RPMI-1640培养液+1 mg/L Pg-LPS继续培养,24 h后分别收集上清,观察无刺激组、单纯Pg-LPS组、单纯应激组和应激+Pg-LPS组上清液中NO,H2O2和肿瘤坏死因子α水平.结果:14只大鼠全部进入结果分析.①实验完成时应激组大鼠体质量低于正常组[(162.14±17.53),(263.57±19.94)g,P<0.05].②应激组大鼠腹腔巨噬细胞总量低于正常组[(9.49±2.75)×106(31.47±8.00)×106,P<0.01].③NO浓度:单纯Pg-LPS组显著高于无刺激组[(265.69±10.86),(239.40±12.07)μmol/L,P<0.05];应激+Pg-LPS组显著高于无刺激组和单纯应激组[(257.57±12.43),(239.40±12.07),(243.32±13.94)μmoL/L,P<0.05].④H2O2浓度:单纯应激组和应激+Pg-LPS组显著高于无刺激组[(7.14±1.04),(7.54±1.15),(5.27±1.02)μmol/L,P<0.05].⑤肿瘤坏死因子α水平:应激+Pg-LPS组显著高于无刺激组[(16.81±4.76),(8.38±0.93)ng/L,P<0.05]. 结论:①束缚应激可改变巨噬细胞对牙龈卟啉菌内毒素刺激的反应,引起大鼠腹腔巨噬细胞功能紊乱.②应激作为一种不良刺激因素,可以和牙龈卟啉菌内毒素一起发生协同作用,引起炎症反应发生....
摘要:目的:检测束缚应激对牙龈卟啉菌内毒素(Pg-LPS)诱导的大鼠腹腔巨噬细胞释放IL-Iβ、IL-2、IL-6、IL-10等细胞因子的影响,初步探讨应激影响牙周疾病的机制.方法:采用束缚应激方式,将大鼠随机分为正常对照组、应激组,于应激结束时处死,常规收集腹腔液.巨噬细胞于贴壁纯化后用RPMI-1640培养液,RPMI-1640培养液+1 μg/mL Pg-LPS继续培养.于24h后分别收集上清,用Luminex100检测仪测定上清液中IL-Iβ、IL-2、IL-6、IL-10等的水平.结果:①12d应激组大鼠腹腔巨噬细胞数量较无应激组及1d应激组显著下降.②1天应激组各细胞因子水平与无应激组比较均无显著差异.12 d应激组的IL-1β水平比无应激组显著增加(P<0.05)、IL-6水平比无应激组显著降低(P<0.05);IL-2水平比1天应激组显著降低(P<0.05).IL-10在各组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:慢性束缚应激可引起大鼠腹腔巨噬细胞总量减少;慢性束缚应激可改变应激宿主对牙龈卟啉单胞菌感染的反应,这可能是慢性应激引起牙周疾病的机制之一....
摘要:目的 探讨去卵巢对大鼠颌骨成骨细胞增殖与成骨分化能力的影响.方法 建立去卵巢大鼠骨质疏松模型,分离培养假手术组和去卵巢组颌骨成骨细胞并进行形态学观察.采用CCK-8法检测假手术组和去卵巢组大鼠颌骨成骨细胞的增殖能力差异.通过碱性磷酸酶染色与活性测定、矿化结节茜素红染色与定量、成骨相关基因及蛋白表达检测,探讨去卵巢对大鼠颌骨成骨细胞增殖及成骨分化能力的影响.结果 假手术组和去卵巢组大鼠均可成功分离培养颌骨成骨细胞,两组细胞均可贴壁生长,细胞形态未见显著差异.与假手术组相比,去卵巢大鼠颌骨成骨细胞的增殖能力,碱性磷酸酶染色与活性均显著增高;但去卵巢大鼠颌骨成骨细胞的Runx2和OC在mRNA与蛋白水平的表达上及体外矿化结节形成能力方面皆显著低于假手术组.结论 去卵巢可影响大鼠颌骨成骨细胞的增殖与成骨分化能力,研究结果将为探讨颌面部骨组织骨质疏松的发病机制与防治提供实验依据....
摘要:口腔医学实验教学中心作为口腔医学院校进行实践教学活动的重要场所,在提高教学质量、培养学生实践能力和创新思维方面起着举足轻重的作用.加强实验队伍建设、人才培养、实验经费投入、实验室开放,有助于整体实验教学水平的提高,也有利于科研工作的顺利开展和学术理论的创新....
摘要:目的 体外分离培养骨质疏松大鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)并探讨其生物学行为.方法 采用双侧卵巢切除术建立大鼠绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMO)动物模型并分离培养骨质疏松大鼠BMMs.通过倒置显微镜和瑞氏-姬姆萨染色对细胞进行形态学观察;通过CCK-8法检测骨质疏松大鼠BMMs的增殖能力;运用免疫荧光染色及荧光定量PCR法分析骨质疏松状态下大鼠BMMs的极化及炎症相关因子的表达情况.结果 成功建立大鼠PMO模型并分离培养骨质疏松大鼠BMMs.骨质疏松大鼠BMMs主要呈多角形及煎蛋样.与假手术组相比,BMMs的增殖能力较高.免疫荧光染色可见骨质疏松大鼠BMMs高表达CCR7,低表达MRC1.荧光定量PCR检测结果提示,骨质疏松大鼠BMMs促炎因子TNF-α及IL-6的表达较高,而抗炎因子IL-10及TGF-β的表达相对较低.结论 去卵巢可影响大鼠BMMs的增殖能力、细胞表面极化标志物以及炎症相关因子的表达水平....
摘要:目的 探讨白细胞介素-10(IL-10)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)引起的高脂血症兔肝脏枯否氏细胞(KC)炎症反应的影响. 方法 健康新西兰兔12只随机分为2组,分别喂予基础饲料和高脂饲料.喂养6周后建立高脂血症模型.分离、收集KC,将正常和高脂组KC随机分为:对照组、Pg-LPS组(1μg/mL Pg LPS刺激)、IL-10+Pg-LPS组(0.1μg/mL IL-10+-1 μg/mL Pg-LPS刺激).刺激24h后,采用Griess法检测NO,Western-blot法检测NF-κB p65及IκB-α,DCFH-DA荧光检测细胞内ROS的表达. 结果 对照组中高脂KC的NF-κB p65蛋白及NO,ROS水平均高于正常KC.Pg-LPS作用后,正常及高脂KC的炎症物质表达量升高,且高脂血症与Pg-LPS呈协同作用.IL-10的干预处理使NO,ROS,NF-B p65表达下降,IκB-α表达升高,对Pg-LPS所引起的炎症反应起抑制作用,对高脂KC的抑制作用更加明显. 结论 高脂血症可使KC处于相对激活状态.在牙周致病菌Pg-LPS作用下,高脂血症和Pg-LPS具有协同作用,IL-10可抑制Pg-LPS所致KC的炎性反应,且对高脂状态下KC的干预作用更佳....
摘要:目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因修饰的牙龈成纤维细胞(GFs)与组织工程支架材料脱细胞真皮基质(ADM)复合后的生长、结合情况,为基因治疗与组织工程联合应用于牙周组织缺损再生治疗提供依据.方法 将转染bFGF的GFs接种于ADM真皮面,通过荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜、透射电镜及组织学检查,观察细胞的生长状况及其与支架材料的复合情况.结果 基因修饰的牙龈成纤维细胞复合ADM膜后生长良好,24 h细胞已贴附、伸展.透射电镜可见细胞在支架材料中生长,并与支架材料结合紧密.结论 转染bFGF基因的的GFs与ADM膜复合物有望应用于牙周组织工程....
摘要:目的 探讨伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)脂多糖诱导兔不同部位的单核巨噬细胞细胞因子表达的差异,以期为研究牙周炎与全身疾病间可能的免疫机制提供理论基础.方法 分离5只新西兰兔外周血单核巨噬细胞(peripheral mononuclear cells,Mo)、肺单核巨噬细胞(alveolar macrophages,AM)、腹腔单核巨噬细胞(peritoneal macrophages,PM)及肝脏单核巨噬细胞(Kupffer cells,KC),对每个部位的细胞分别用1 mg/L大肠杆菌-脂多糖(大肠杆菌-脂多糖组)、Aa-脂多糖刺激(Aa-脂多糖组),以不加任何刺激的细胞为空白对照组,每组均为6个样本.24 h后采用实时PCR及酶联免疫吸附测定法分别检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)6、IL-1β、IL-8 mRNA及蛋白表达.结果 新西兰兔各部位单核巨噬细胞大肠杆菌-脂多糖组及Aa-脂多糖组4种细胞因子mRNA及蛋白表达均显著高于空白对照组(P<0.05),其中AM的Aa-脂多糖组TNF-α、1L-6、IL-1β、IL-8 mRNA[分别为(0.4719±0.0171)、(2.7895±0.0669)、(5.1527±0.1190)、(3.6785±0.1836)]及蛋白[分别为(82.2±5.4)、(40.2±2.0)、(50308.3±445.0)、(35 305.3±1480.9) ng/L]的相对表达均最强;Aa-脂多糖组4种细胞因子mRAN及蛋白表达均显著强于大肠杆菌-脂多糖组(P<0.05);不同部位的单核巨噬细胞对Aa-脂多糖的反应存在部位差异性(P<0.05),总体上从强至弱依次为AM、Mo、KC、PM.结论 Aa-脂多糖对兔不同部位的单核巨噬细胞各细胞因子的表达存在影响,且这种影响具有部位差异性....
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