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摘要:背景 慢性阻塞性肺疾病(COPD)是以不完全可逆的气流受限为特征的慢性支气管炎和肺气肿,也是导致肺动脉高压的主要原因之一,但其发生发展机制尚未完全清楚.目的 探讨脂多糖(LPS)诱导下COPD大鼠模型远端肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中Toll样受体(TLR)4表达情况,以期为探讨TLR4信号通路在COPD炎性反应及免疫应答中的作用提供理论基础.方法 2015年12月-2016年3月,选取SPF级Wistar大鼠24只,雌雄对半,6~8周龄.适应性饲养大鼠1周后,将其随机分为模型组和正常组,各12只.模型组大鼠于实验第1、14天经气道注入1 μg/ml的LPS 200 μl,置于自制有机玻璃舱,烟熏1 h/d,共8周;正常组大鼠于实验第1、14天经气道注入等量0.9%氯化钠溶液,与模型组大鼠在同等条件下饲养8周.8周后,两组分别随机选取2只大鼠,开胸取肺组织,分别进行HE染色观察肺组织病理学改变和免疫组织化学染色观察肺动脉平滑肌层TLR4表达情况.从模型组剩余大鼠中随机选取6只,分离、培养远端PASMCs,选用第3~6代(对数生长期)细胞,光镜下(×100)观察PASMCs形态,采用免疫荧光法(荧光显微镜下,×200)观察其α-肌动蛋白表达情况,并随机分为对照组(不进行干预)、LPS 12 h组(加入1 μg/ml的LPS 10 μl作用12 h)、LPS 24 h组(加入1 μg/ml的LPS 10 μl作用24 h)、LPS 48 h组(加入1 μg/ml的LPS 10 μl作用48 h)、LPS 72 h组(加入1 μg/ml的LPS 10 μl作用72 h),采用Western blotting法检测各组PASMCs中TLR4表达水平.结果 肺组织病理学改变:模型组肺泡壁断裂,肺泡融合,肺大泡形成,肺动脉平滑肌层明显增厚,大量炎性细胞浸润,病理表现符合典型的COPD病理改变.肺动脉平滑肌层TLR4表达情况:模型组倒置相差显微镜下可见TLR4表达阳性,且肺动脉平滑肌层染成黄色较正常组颜色明显加深.PASMCs形态及其α-肌动蛋白表达情况:光镜下PASMCs呈梭形、不规则生长,随着培养时间的延长,层数增多,堆积形成"峰-谷"状;荧光显微镜下可见PASMCs胞质α-肌动蛋白表达阳性,胞质中有向细胞两极呈放射状分布的条丝状物,与细胞长轴平行,形态清晰.LPS 12 h组、LPS 24 h组、LPS 48 h组、LPS 72 h组PASMCs中TLR4表达水平均高于对照组(P<0.05);LPS 24 h组、LPS 48 h组、LPS 72 h组PASMCs中TLR4表达水平均高于LPS 12 h组(P<0.05);LPS 48 h组、LPS 72 h组PASMCs中TLR4表达水平均高于LPS 24 h组(P<0.05).结论 LPS诱导下COPD大鼠模型远端PASMCs中TLR4表达水平升高,猜测LPS可能通过TLR4信号通路诱导PASMCs的合成分泌功能,从而加重炎性反应及肺血管重塑....
摘要:蛋白印迹(western blot)分析是根据抗原、抗体特异性结合的原理检测复杂样品中某蛋白的技术.然而当样品中的蛋白浓度过低,特别是目标蛋白为低丰度蛋白时,采用普通化学发光检测,有时出现蛋白条带发光弱,曝光不够,而采用超敏化学发光检测则出现蛋白条带发光强,曝光过度,两者的蛋白条带显影图像均不理想.本文将超敏化学发光液稀释后再检测,显影效果显著提高,蛋白条带图像清晰,可见超敏化学发光液稀释法降低蛋白印迹的发光强度,提高了蛋白条带的显影效果....
摘要:目的 探讨核转录因子κBp65(NF-κBp65)沉默对鼻咽癌的生物学作用.方法 构建NF-κBp65特异性小干扰核糖核酸(siRNA)质粒表达载体(pGPU6/RFP/Neo-NF-κBp65)和阴性对照质粒表达载体(pG-PU6/RFP/Neo-NC).采用非脂质体脂类转染剂将重组质粒表达载体转入人鼻咽癌CNE2细胞,建立NF-κBp65沉默的稳定转染CNE2细胞株(NF-κBp65沉默组)和阴性对照细胞株(阴性对照组);蛋白质印迹法(Western blot)分析癌细胞中NF-κBp65基因的表达水平,MTT实验及流式细胞术分析癌细胞的增殖能力和细胞周期变化;复制裸鼠移植瘤模型,分析沉默NF-κBp65对癌细胞成瘤性的影响.结果 成功获得稳定转染CNE2细胞株,NF-κBp65沉默组细胞中NF-κBp65蛋白表达水平降低;NF-κBp65沉默后,CNE2细胞周期阻滞于S期,增殖速度减慢;NF-κBp65沉默组裸鼠移植瘤生长慢,重量轻,与阴性对照组和空白对照组比较,差异有统计学意义(=14.386,<0.05).结论 NF-κBp65沉默能降低鼻咽癌CNE2细胞的恶性生物学行为....
摘要:目的 分析EB病毒( EBV) miRNAs在鼻咽癌组织中的表达,探索EBV诱发鼻咽癌的分子机制,寻找鼻咽癌防治和诊断的生物分子标志物. 方法 采用实时荧光定量PCR分析 EBV miRNAs ebv-miR-BART4?和 ebv-miR-BART18-3p在36例鼻咽低分化鳞癌组织和32例慢性鼻咽黏膜炎症组织中的表达水平. 结果 ebv-miR-BART4? 和 ebv-miR-BART18-3p的表达水平( Ct 值)在鼻咽癌组织中分别为(26. 97 ± 2. 67)和(27. 02 ± 2. 32),在鼻咽黏膜炎症组织中的表达水平分别为( 38. 49 ± 3. 05 )和( 39. 39 ± 2. 16 ) ,两种EBV miRNAs在鼻咽癌组织中的表达明显高于鼻咽黏膜炎症组织,差异有统计学意义( P<0. 01 ). 结论 EBV可能通过ebv-miR-BART4?和ebv-miR-BART18-3p高表达诱发鼻咽癌,它们是鼻咽癌诊断和防治的潜在生物分子标志物....
摘要:采用实时荧光定量PCR分析EB病毒微小RNA (ebv-miR) ebv-miR-BART19-5p和ebv-miR-BART21-3p在鼻咽癌和鼻咽炎症组织中的表达,以便探明其表达在EB病毒(EBV)致鼻咽癌中的内在联系和意义.结果表明,鼻咽癌组织中ebv-miR-BART19-5p和ebv-miR-BART21-3p的表达水平明显高于鼻咽黏膜炎症组织.EBV可能通过ebv-miR-BART19-5p和ebv-miR-BART21-3p的表达上调介导鼻咽组织癌变,它们可能是鼻咽癌治疗的分子靶点和鼻咽癌诊断的分子标志物....
摘要:目的:探讨核因子-κB(NF-κB)沉默对鼻咽癌5-8F细胞的增殖抑制作用。方法构建NF-κB p65沉默重组质粒表达载体pGenesil-1.2-NF-κB和阴性对照重组质粒载体pGenesil-1.2-HK,应用转染试剂将重组质粒表达载体转染人鼻咽癌5-8F细胞,采用Western blot法检测NF-κB p65的表达,采用MTT及流式细胞仪分析细胞增殖和细胞周期。结果 NF-κB p65沉默抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖,抑制率为(58.43±1.24)%,与对照组细胞抑制率(0)和阴性对照组细胞抑制率(17.89±4.13)%比较,差异有统计学意义( P<0.05)。 NF-κB沉默组S期细胞为(42.27±0.39)%,与空白对照组(30.83±1.36)%和阴性对照组(34.88±0.85)%比较,差异有统计学意义( P<0.05)。结论 NF-κB p65沉默抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖,其可能是通过S期细胞阻滞起作用。...
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北大核心 CSCD CA
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摘要:穿黄清热片是国家标准收载品种,由穿心莲和一枝黄花2味药物组成,具有清热解毒之功效.用于急性上呼吸道感染、急性扁桃体炎、咽炎等热毒壅盛者[1].本品质量标准提高前只有简单的显色、泡沫和荧光等理化定性检测[2],为有效控制产品内在质量,应用HPLC法对处方君药的有效成分脱水穿心莲内酯进行了含量测定,并采用TLC法对穿心莲和一枝黄花进行薄层鉴别,结果满意....
摘要:后发性白内障(PCO)又称后囊膜混浊,是白内障囊外摘除术后最常见的并发症,残留于囊袋内的晶状体上皮细胞的增殖、迁移、上皮-间质细胞转化、胶原沉积及晶状体纤维再生是引起PCO的主要原因,目前,常采用YAG激光后囊膜切开术治疗PCO,但并发症较多.因此,人们把治疗PCO的希望寄托于药物疗法,近年来这方面的研究较多,也取得明显的进展.笔者就抗代谢、抗炎、免疫抑制和天然药物等4类药物抗后发性白内障的作用进行综述....
摘要:目的:观察加味柴芍六君方(JCLD)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃黏膜组织Syk、p53、Survivin表达的影响,阐明JCLD防治PLGC的作用机理.方法:取健康雄性Wister大鼠120只随机分为6组:正常对照组、模型组、JCLD高、中、低剂量组及胃复春组.除正常组外,其余各组采用综合造模法造模24周,造模成功后,用胃复春,JCLD高、中、低剂量进行干预16周,干预结束后,取大鼠胃黏膜组织行HE观察其病理变化,采用免疫组化S-p法检测胃黏膜组织中的Syk蛋白、p53蛋白和Survivin蛋白的表达水平.结果:免疫组化检测结果显示:和正常组相比,各造模组胃黏膜组织中Syk蛋白表达都有所降低(P<0.05);和模型组相比,胃复春组,JCLD高、中、低剂量组Syk蛋白表达都有所升高(P<0.05);和正常组相比,各造模组胃黏膜组织中p53蛋白的表达都升高(P<0.05);和模型组相比,胃复春组,JCLD高、中、低剂量组胃黏膜组织中p53蛋白表达都降低,(P<0.05);和正常组相比,模型组、胃复春组、JCLD各剂量组胃黏膜组织中Survivin阳性率都升高(P<0.05或P<0.01),和模型组相比,JCLD各剂量组阳性率都降低,其中JCLD高剂量组降低最显著(P<0.01).结论:加味柴芍六君方同胃复春一样都可促进Syk的表达,抑制p53、Survivin的表达,这可能是其治疗胃癌前病变的作用机理,值得进一步深入研究及临床推广运用....
摘要:目的:探讨δ-三烯生育酚对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法:裸鼠右前肢皮下接种鼻咽癌5-8F细胞,从接种细胞的第2天开始,每天腹腔注射δ-三烯生育酚,连续给药40 d.实验设对照组给等量溶剂(0剂量组);低剂量组(50 mg·kg-1·d-1 δ-三烯生育酚);高剂量组(150 mg·kg-1·d-1 δ-三烯生育酚).结果:δ-三烯生育酚抑制鼻咽癌移植瘤生长,高剂量组移植瘤重量(0.35±0.05)g低于低剂量组(1.01±0.23)g与对照组(1.96±0.26)g,差异有统计学意义(P<0.05).结论:δ-三烯生育酚能抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长,是一种潜在的抗鼻咽癌天然产物....
[专利] 实用新型 CN201620753552.4
桂林医学院 2017-03-29
摘要:本实用新型公开了一种盖玻片挑取器,包括手柄和与手柄固定连接的挑取针体,针体的前端为与针体呈110°±5°的针头。该挑取器可采用现有的注射器针头制作,将现有的注射器针头的前端弯曲110°±5°即可,节约成本。本实用新型结构简单、成本低,在取片过程中,用盖玻片挑取器轻轻挑起盖玻片,再用镊子将其夹起、取出。省时省力,操作方便,解决了盖玻片取出难和易碎等问题,从而使细胞爬片、病理组织制片等成功率大大提高,有效提高工作效率,保证工作质量。在盖玻片取片过程中,轻轻挑起盖玻片,再用弯镊将其轻轻夹起取出,省时省力,操作方便,有效提高工作质量和效率。
摘要:目的:探索血清中鼻咽癌特异性分子标志物,为其早期诊断提供依据.方法:采用miRNA表达谱芯片分析鼻咽癌患者和正常人的血清miRNA,应用GenePix pro V6.0软件(Axon)进行数据处理与分析,寻找差异表达的miRNA.结果:鼻咽癌患者与正常人比较,血清中2倍升高的miRNA有81个,其中5倍升高的有22个.2倍降低的miRNA有88个,其中5倍降低的有16个.鼻咽癌患者血清中有4个EB病毒相关miRNA(ebv-miRNA)的表达明显升高.结论:鼻咽癌患者血清中存在与鼻咽癌密切相关的miRNA....
[硕士论文] 李璐
病理学 桂林医学院 2017(学位年度)
摘要:目的:
  五没食子酰基葡萄糖(1,2,3,4,6-Pentagalloylglucose,PGG)是一种天然多酚类化合物,它广泛存在于中草药植物中,五倍子、牡丹皮和白芍等植物含量较高。研究表明,PGG具有抗炎、抗肿瘤及抗糖尿病等作用。后发性白内障是白内障囊外摘除术后最常见的并发症,目前认为术中残留的晶状体上皮细胞的增殖是引起后发性白内障的主要原因。本研究拟探讨PGG对人晶状体上皮细胞增殖的抑制作用及其作用机制。
  方法:
  ①PGG的浓度设为0、25、50、75μmol/L,作用SRA细胞的时间为24、48、72 h,采用MTT法检测PGG对人晶状体上皮细胞增殖的影响,显微镜观察细胞形态变化。
  ②PGG作用SRA细胞48 h后,采用Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞技术分析PGG对人晶状体上皮细胞凋亡率的影响。
  ③PGG作用SRA细胞48 h后,采用PI单染,流式细胞技术分析PGG对人晶状体上皮细胞周期的影响。
  ④PGG作用SRA细胞48 h后,采用Western blotting检测PGG对人晶状体上皮细胞NF-κB p65、phospho-NF-κB p65、phospho-stat3和cyclin D1蛋白表达的影响。
  结果:
  ①PGG孵育后,贴壁的SRA细胞数量明显减少,细胞变圆、变小,细胞增殖受到明显的抑制,且具有时间和剂量依赖性。在同一时间段,药物浓度越大,PGG对SRA细胞增殖的抑制率越大,其中72 h最明显。72 h时,药物浓度为25μmol/L时,抑制率为(30.75±2.63)%,药物浓度为50μmol/L时,抑制率为(39.69±0.67)%,药物浓度为75μmol/L时,抑制率达到(47.84±0.98)%,以对照组(药物浓度为0)增殖抑制率为0做参照,不同药物浓度组抑制率明显增加,差异有统计学意义(F=1842.49,P<0.01)。同一药物浓度时,PGG作用时间越长,SRA细胞的增殖抑制率越大。药物浓度为75μmol/L作用24 h时,SRA细胞的增殖抑制率为(11.14±1.29)%,作用48 h时,抑制率为(30.42±2.42)%,72 h时,抑制率高达(47.84±0.98)%,抑制率明显增加,差异有统计学意义(F=716.26,P<0.01)。
  ②与对照组比较,PGG处理的SRA细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均增加,随PGG浓度的增加细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。
  ③与对照组比较,随着PGG药物浓度的增加,S期细胞所占百分率增加,药物浓度为75μmol/ L时,S期细胞百分率为(44.28±1.33)%,药物浓度为50μmol/ L时,S期细胞百分率为(37.67±1.29)%,与对照组(28.58±1.27)%比较,S期细胞所占百分率明显增加,差异有统计学意义(F=77.11, P<0.01)。
  ④PGG浓度增加,PGG孵育的SRA细胞的NF-κB p65的表达无明显改变,但phospho-NF-κB p65表达上调,phospho-stat3与cyclin D1表达下调。
  结论:
  PGG可抑制晶状体上皮细胞的增殖,促进晶状体上皮细胞的凋亡,阻滞晶状体上皮细胞于S期。PGG的这些作用可能与其上调蛋白phospho-NF-κB p65,降低phospho-Stat3、cyclin D1的表达有关。因此,PGG有望成为防治后发性白内障的有效药物。
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