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摘要:人等所有后生动物体内微生物数量多、种类复杂,给人们的研究带来了很多的困难,建立无菌和悉菌的动物模型则是当前急迫之需,无菌果蝇模型日益受到重视.本实验优化无菌果蝇模型,发现威露士可以协助次氯酸和乙醇消毒,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌杀灭效率为99.999%,提高表面消毒能力,卵存活率从50%左右提高到67.3%.从而高效率地建立果蝇悉菌模型.在此基础上研究酵母对该模型的影响,结果发现酵母能显著地促进无菌果蝇的生长与发育.在营养条件匮乏(0.5%酵母)情况下,常规饲养果蝇蛹和成虫羽化时间分别为6.0 d和11.7 d;无菌果蝇蛹和成虫羽化时间分别为7.8 d和18.9 d,说明共生微生物可以促进果蝇的发育.本研究优化了无菌果蝇操作过程,为实验室建立悉生果蝇模型提供了便利,有利于研究宿主与微生物之间相互作用....
摘要:[目的]分离与鉴定黑腹果蝇体内醋酸杆菌,并研究其对宿主生长发育的促进作用.[方法]利用醋酸杆菌选择性培养基分离果蝇肠道醋酸杆菌;通过革兰氏染色和16S rRNA基因比对鉴定菌种;肠道定植实验验证共生关系;发育历期和生长速率实验检测其促进果蝇生长作用;免疫荧光染色技术检测肠道细胞增殖;RT-PCR法检测促生长的分子标志物和相关的信号通路.[结果]菌株为东方醋酸杆菌(Acetobacter orientalis),可以持续地定植在果蝇肠道及其培养基中,并且明显促进果蝇的生长.东方醋酸杆菌通过胰岛素信号通路增加肠分裂细胞的数量和促进蜕皮激素的分泌.[结论]东方醋酸杆菌是果蝇的一种共生菌,对果蝇肠道结构和机体发育具有重要的作用....
摘要:[目的]检测乳酸菌对果蝇发育历期的影响,进一步探讨其对果蝇促生长的分子机制.[方法]利用选择性培养基MRS从黑腹果蝇Drosophila melanogaster体内分离乳酸菌,利用革兰氏染色、生化方法及16S rRNA基因进行鉴定;通过体内定植和世代传递实验验证该菌是黑腹果蝇的共生菌;采用悉生模型检测乳酸菌对黑腹果蝇发育的促生长作用;利用实时定量PCR技术检测黑腹果蝇体内促前胸腺激素基因PTTH和胰岛素通路相关基因InR的表达水平;利用葡萄糖试剂盒检测血淋巴液葡萄糖浓度.[结果]从黑腹果蝇中分离到的菌株鉴定为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum FY1菌株(GenBank登录号:KY038178),可在黑腹果蝇肠道内定植,每个肠道定植量约为104 CFU,并能在世代间稳定传递.FY1菌株体外发酵可降低pH值至5.2,可诱导无菌果蝇卵至蛹发育时间由20.0 d缩短至6.9d,卵至成虫发育时间由30.0 d缩短至10.7 d,其生长速率是无菌果蝇的约2倍.实时定量PCR结果表明,FY1菌株显著地提前了PTTH表达高峰期,同时降低果蝇中InR表达水平,血淋巴液葡萄糖浓度从5.1 mg/mL降低至2.7 mg/mL.[结论]植物乳杆菌是黑腹果蝇的一种益生菌,推测能通过胰岛素信号通路促进宿主黑腹果蝇的生长和发育....
摘要:目的 探讨海水对人肺泡上皮细胞中活性氧(ROS)和内质网应激(ER stress)水平的影响.方法 以含不同浓度海水(20%、40%、60%、80%)的培养液刺激人肺泡上皮细胞系A549细胞1h后更换培养液,3h后CCK-8法检测海水对细胞的毒性;以25%浓度海水刺激A549细胞1h后,不同时间点(2h、4h、6h、8h)应用CCK-8法检测海水对细胞的毒性,Western Blotting法检测内质网应激特异蛋白GRP78蛋白表达情况,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化情况.结果 以不同浓度海水刺激A549细胞时,细胞活性受抑制程度呈明显的浓度依赖性,海水处理组与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞在受到短暂海水刺激后恢复时,细胞活性依然受到明显抑制,在4h抑制最显著,之后逐渐恢复,2h、8h组与0h组相比较,差异无统计学意义(P>0.05);而4h、6h组与0h组相比较,差异有统计学意义(P<0.05);同时细胞内活性氧类(ROS)含量增多,内质网应激相关蛋白GRP78表达量增加,且都在4h达到峰值.结论 海水干预可抑制人肺泡上皮细胞增殖活性,而内质网应激和活性氧类参与了海水引起的A549细胞损伤过程....
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CSTPCD 北大核心
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摘要:[目的]黑腹果蝇Drosophila melanogaster肠道中栖生着众多微生物,通过分离和研究其内共生菌,以研究肠道菌群的多态性和作用.[方法]利用Hungate滚管技术从黑腹果蝇成虫肠道分离厌氧细菌;通过记录果蝇的发育历期和生长速率,检测该细菌对果蝇发育和生长的影响.[结果]首次从黑腹果蝇肠道内分离到一株产气荚膜梭茵Clostridium perfringens.该茵能够有效地定植到果蝇肠道内,是果蝇肠道共生菌.产气荚膜梭菌显著地缩短无菌果蝇的发育历期,将无菌果蝇成蛹天数由20 d缩短到8.1d,羽化天数由30 d缩短到12.7 d.该菌还可以提高果蝇生长速率.[结论]本研究揭示了产气荚膜梭菌是果蝇的内共生菌,可以通过提高生长速率而有效地促进果蝇的生长和发育....
[硕士论文] 李玉娟
免疫学 山西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:将黑腹果蝇肠道中的醋酸杆菌分离出,并研究醋酸杆菌对果蝇宿主的促生长发育的作用。
  方法:利用醋酸杆菌选择性培养基分离果蝇肠道醋酸杆菌;通过革兰氏染色和16S rRNA基因比对鉴定菌种;观察东方醋酸杆菌12小时内利用4种碳源情况,检测该菌株体外发酵特性;涂板计数不同生长周期果蝇肠道的菌落数,检测该菌的定植情况;将果蝇随机分为混合菌、无菌、单株菌果蝇三个组别,通过计数蛹和成虫出现的平均时间,检测该菌对果蝇发育作用;通过观察果蝇产卵后0天至蛹形成时的体表面积变化,检测果蝇的生长速率;解剖以上三种组别的果蝇成虫解剖肠道后,用PH3染色方法计数肠细胞分裂增殖数。提取以上三种组别的果蝇RNA,做RT- PCR,检测该菌对果蝇体内激素的影响。
  结果:⑴该菌株经鉴定为东方醋酸杆菌,属于醋酸杆菌属,革兰氏阴性杆菌。⑵东方醋酸杆菌12 h生长OD值高达1.25,pH降低至3.8。⑶东方醋酸杆菌在果蝇不同的生长阶段的肠道定植数量达104、105。世代传递结果发现东方醋酸杆菌可在子代果蝇肠道定植数量达103。⑷东方醋酸杆菌组在2%酵母丰富培养基条件下,蛹和成虫羽化时间分别为6.2 d和10.1 d和CR组比较无统计学意义(P>0.05);与GF(7.8 d和12.1 d)相比差别有统计学意义(P<0.05),在营养条件匮乏情况下,东方醋酸杆菌组果蝇蛹和成虫羽化时间分别为9 d和13.3 d,和CR果蝇相比无统计学意义(P>0.05);与GF组(7.8 d和22 d)相比差别有统计学意义(P<0.001),东方醋酸杆菌组显著地缩短果蝇发育历期,甚至可以代替CR组的作用。东方醋酸杆菌组较无菌组比明显增加果蝇的生长速率,并且与CR组结果类似。⑸PH3染色实验发现东方醋酸杆菌组较无菌组促进果蝇肠道细胞分裂增殖,尤其在最长的中肠间差异有统计学意义(P<0.001),并增加肠道细胞分裂增殖数量,数量甚至高于CR组,与CR组比较有统计学意义(P<0.05)。⑹东方醋酸杆菌组较GF组使果蝇促前胸腺激素分泌的时间较早,分泌的量较高,两组分泌量的高峰值比较有统计学意义(P<0.01),与CR组比较其表达时间类似。⑺东方醋酸杆菌组较GF组的胰岛素水平表达时间早、表达量高差异有统计学意义(P<0.001),并且与CR组结果类似(P>0.05)。
  结论:从果蝇肠道分离出一株东方醋酸杆菌,东方醋酸杆菌是果蝇一种益生菌、共生菌。东方醋酸杆菌在组织学水平增加果蝇的生长速率和缩短发育历期并在细胞学水平促进肠细胞分裂增殖,同时在体内激素水平也可激活胰岛素信号通路,维持机体稳定的血糖水平及促进果蝇关键生理期(幼虫期至蛹期)蜕变,从而促进果蝇生长发育。
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