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广西医科大学
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[硕士论文] 李沭
流行病与卫生统计学 广西医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  KAT2B基因是细胞周期信号通路(cell cycle pathway)上的相关基因,对许多生物过程起着乙酰化和转录调节的作用,其编码的蛋白具有乙酰转移酶的活性。有研究表明,KAT2B基因与胃癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌等多种肿瘤的发生发展存在着相关关系。本课题组前期研究结果显示,在校正了年龄、性别、民族、吸烟、饮酒、慢性HBV感染、HCC家族史等因素后,KAT2B基因rs17006625位点多态性与肝癌发病风险相关(P=0.04,OR=1.64,OR95%CI1.01-2.64);本研究旨在探讨KAT2B基因rs17006625位点多态性与HCC临床病理特征之间的相关关系,同时对KAT2B基因rs17006625位点多态性对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC,以下简称为肝癌)细胞系生物学功能的影响进行验证。
  方法:
  (1)选取按照统一标准诊断的HCC新发患者为研究对象,应用Taq MGB实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)方法对研究对象KAT2B基因rs17006625位点进行基因型检测,并采用统一的调查问卷收集研究对象的一般人口学资料、既往病史、个人史、家族史、HBV感染史、生化和免疫检查结果以及肿瘤直径大小、肿瘤数目、肝硬化、子灶、癌栓、假包膜、包膜和脉管侵犯、Edmondson-Steiner病理分级等肿瘤临床病理信息等。采用SPSS17.0软件进行统计学分析,探讨rs17006625位点多态性与肝细胞癌临床病理特征之间的相关关系。
  (2)利用生物信息学查找KAT2B基因的序列,以人类HepG2细胞mRNA所反转的cDNA为模板扩增目的基因片段,构建含KAT2B基因rs17006625位点空载型、突变型、野生型质粒的载体,并转染至人类HepG2细胞中,获得含三种不同质粒的肝癌细胞系。通过双荧光素酶实验、实时荧光定量PCR实验和western blot实验对含空载型、野生型、突变型质粒的肝癌细胞系进行KAT2B基因表达和蛋白表达的检测;通过transwell迁移和侵袭实验、MTT实验检测三种肝癌细胞系的迁移、侵袭和增殖能力。
  结果:
  (1)基因多态性与HCC临床病理特征的关联分析:采用多因素非条件logistic回归分析对研究对象的性别、年龄、民族、HCC家族史、吸烟史、饮酒史以及HBsAg等因素进行校正后,结果显示,与携带KAT2B基因rs17006625位点野生型纯合子基因型AA的患者相比,携带基因型GG的患者发生包膜侵犯的风险升高(P=0.017,校正OR=3.267,OR95%CI:1.241-8.597),肿瘤发生中低分化的风险也升高(P=0.049,校正OR=3.417,OR95%CI:1.003-11.637)。
  (2)分层分析:以是否有HCC家族史、吸烟情况、饮酒情况、HBV感染情况作为分层因素进行分层分析发现,在无HCC家族史的患者中,KAT2B基因rs17006625位点多态性与肝癌病理分级相关(P=0.025,校正OR=4.555,OR95%CI:1.215-17.083),在吸烟的患者、饮酒的患者和HBsAg阴性的患者中,KAT2B基因rs17006625位点多态性与包膜侵犯相关(均为P<0.05)。
  (3)双荧光素酶检测:在含KAT2B基因rs17006625位点空载质粒组、野生型质粒组和突变型质粒组三组肝癌细胞中,相对荧光素酶活性值由高到低依次为空载质粒组(3.90±0.23)、野生型质粒组(3.10±0.63)、突变型质粒组(2.96±0.34),但野生型质粒组与突变型质粒组之间差别尚未发现存在统计学意义(P=0.747)。
  (4)实时荧光定量PCR:以野生型质粒组第1生物重复组的2-ΔΔCt值为1,分析结果显示,突变型质粒组中KA T2BmRNA的水平高于野生型质粒组(P=0.015)。
  (5)Western Blot实验:以β-actin为内参,检测空载质粒细胞、野生型质粒细胞和突变型质粒细胞三组细胞样本中KA T2B蛋白的表达情况,结果发现,与野生型质粒组细胞相比,突变型质粒组细胞的蛋白表达上调。
  (6)transwell细胞迁移实验:通过染色光镜图及视野细胞计数结果分析发现,KAT2B基因rs17006625位点突变型质粒和野生型质粒对肝癌细胞的迁移能力影响无差别(P=0.736,P=0.191)。
  (7)transwell细胞侵袭实验:通过染色光镜图及视野细胞计数结果分析发现,KAT2B基因rs17006625位点突变型质粒组对肝癌细胞侵袭能力的影响高于野生型质粒组(P=0.018,P=0.003)。
  (8)MTT实验:检测空载质粒组、野生型质粒组和突变型质粒组细胞在OD450nm处的OD值,结果显示,分别培养24h、48h、72h后,野生型质粒组和突变型质粒组对肝癌细胞增殖能力的影响均不存在差别(P=0.097)。
  结论:
  (1)KAT2B基因rs17006625位点等位基因G基因型可能影响肝癌肿瘤的包膜侵犯和Edmondson-Steiner病理分级。
  (2)KAT2B基因rs17006625位点等位基因G基因型可能会增加肝癌细胞基因的表达、增强肝癌细胞的侵袭能力。
摘要:目的 探讨细胞周期信号通路相关基因CDC25C、CDKN2A (p16)、MCM4、MCM7、PARDC (DNA-PK)、RAD21、RBL2(p107)、YWHAB(14-3-3)、SMAD3、KAT2B、CHEK1单核苷酸多态性(SNP)与肝细胞癌(HCC)临床病理特征的关系,为HCC的预后预测提供科学依据.方法 于2007年7月-2011年3月整群抽取在广西医科大学第一附属医院肝胆外科就诊和治疗的498例新发HCC患者进行相关流行病学调查和临床病理资料的收集,并采集其空腹静脉血提取血液样本DNA,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法对14个细胞周期信号通路相关基因SNP位点进行基因分型.结果 在校正了年龄、性别、民族、HCC家族史、HBsAg、吸烟和饮酒情况后,多因素非条件logistic回归分析结果显示,携带YWHAB基因rs2425675位点等位基因A基因型AG/AA患者的包膜侵犯风险为基因型GG患者的2.097倍(OR =2.097,95%CI=1.034~4.256);携带RBL2基因rs3929位点等位基因C基因型GC/CC患者的包膜侵犯风险为基因型GG患者的2.234倍(OR=2.234,95%CI=1.100~4.534);携带CDC25C基因rs3734166位点等位基因G基因型GA/GG患者的子灶发生风险为基因型AA患者的0.460倍(OR=0.460,95%CI=0.259 ~0.816),癌栓发生风险为基因型AA患者的0.651倍(OR =0.651,95%CI=0.439 ~0.965);携带CHEK1基因rs515255位点等位基因T基因型TC/TT患者的子灶发生风险为基因型CC患者的0.451倍(OR =0.451,95% CI=0.252 ~0.807),肿瘤数目多发的风险为基因型CC患者的0.655倍(OR=0.655,95%CI=0.442 ~0.971).分层分析结果显示,YWHAB基因rs2425675位点在无HCC家族史、不吸烟、不饮酒的患者中,其SNP多态性与肝癌肿瘤包膜侵犯和假包膜的发生存在统计学关联(均P<0.05);CDC25C基因rs3734166位点在无HCC家族史、不吸烟、不饮酒、HBsAg阴性和阳性的患者中,其SNP多态性与子灶、癌栓、脉管侵犯和肝硬化的发生存在统计学关联(均P <0.05);CHEK1基因rs515255位点在无HCC家族史、不吸烟、饮酒、不饮酒和HBsAg阳性的患者中,其SNP多态性与包膜侵犯、子灶的发生和肿瘤数目多发存在统计学关联(均P<0.05);RBL2基因rs3929位点在吸烟、不吸烟、饮酒、不饮酒和HBsAg阴性患者中,其SNP多态性与包膜侵犯和脉管侵犯的发生存在统计学关联(均P<0.05).结论 YWHAB、RBL2、CDC25C和CHEK1基因SNP多态性可能与HCC的临床病理特征相关....
摘要:目的 探讨TBX15基因在肝细胞癌中的表达及其启动子甲基化对细胞生物学行为的影响.方法 分别采用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)和实时荧光定量PCR(qPCR)检测3种肝癌细胞系(HepG2、MHCC97H、SNU449)中TBX15基因启动子甲基化状态和表达水平,再将空白质粒、空载质粒pc3.1和TBX15过表达质粒转染肝癌SNU499细胞,通过CCK-8实验和流式细胞术检测各组肝癌细胞的增殖和凋亡情况.结果 3种肝癌细胞系中,TBX15基因在肝癌SNU449细胞中的启动子甲基化程度最高,甲基化率为89.5%,而TBX15 mRNA表达水平最低.TBX15过表达质粒组培养48 h后,肝癌SNU449细胞的增殖能力高于空载质粒组,差异有统计学意义(0.549±0.080 vs 0.457±0.506,P=0.015);TBX15过表达质粒组肝癌SNU449细胞的总凋亡比例高于空白质粒组,差异有统计学意义[(5.12±1.42)%vs(2.16±0.41)%,P=0.014].结论 启动子区异常甲基化可能是肝癌细胞TBX15基因失活的主要原因,且与肝癌恶性生物学行为密切相关.TBX15可能是预测肝癌发生发展的指标....
摘要:目的 探讨孕妇妊娠合并轻型α-地中海贫血(α-地贫)对妊娠结局的影响.方法 选择2011年1月至2015年12月在广西壮族自治区平果县妇幼保健院产前系统检查并患有轻型α-地贫的孕妇共445例作为地贫组,按1∶4比例随机选择同期本院就诊的健康孕妇作为非地贫组,收集研究对象临床特征和妊娠结局资料,使用t检验、x2检验、logistic回归模型和ROC曲线对资料进行回顾性分析.结果 两组孕妇年龄、BMI、孕周及文化程度差异无统计学意义,而地贫组血红蛋白明显低于非地贫组(P<0.001),两组孕妇的产次、民族和职业差异有统计学意义;单因素分析,地贫组低出生体重儿、足月小样儿和1 min Apgar评分<7所占比例高于非地贫组,而两组孕妇的早产、死胎、巨大儿等不良妊娠结局差异无统计学意义;非条件logistic回归分析,妊娠合并轻型α-地贫是低出生体重儿(aOR=2.29,95%C1:1.32 ~ 3.95)和足月小样儿(aOR=2.11,95%CI:1.16 ~3.84)的危险因素;受试者工作特征曲线结果表明,轻型α-地贫疾病联合多项指标对新生儿出生体重有一定的预测价值.结论 孕妇妊娠合并轻型α-地贫可能增加新生儿出生体重降低的风险,应加强地贫孕妇的产前检查,减少不良妊娠结局的发生....
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