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摘要:美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nudeopolyhedroviurs)是一种对美国白蛾高效、 对环境无污染、对天敌及非靶标生物安全的生物杀虫剂.建立高效、 快速的定量检测方法对该病毒持续控制美国白蛾具有重要意义.将polh基因构建到pGEM-T-easy载体上,制备标准品质粒,构建标准曲线,对未知样品DNA进行定量PCR检测,根据标准曲线计算样品中美国白蛾核型多角体病毒含量.提取感染病毒不同时间段的美国白蛾幼虫基因组DNA,根据已建立的方法检测并计算每克样本病毒的基因拷贝数.利用TaqMan探针法成功建立了该病毒荧光定量PCR检测方法.以取食3.0×106 OBs/mL浓度病毒的美国白蛾幼虫基因组DNA为模版,进行荧光定量PCR,病毒在幼虫体内的含量在第5天开始出现大幅增长趋势,第6天时达到最高.TaqMan探针法实时荧光定量PCR能简便、 高效、 快速的检测出大量未知样本基因组DNA中病毒基因的拷贝数,为研究该病毒的传播和流行规律提供了可行的监测方法....
摘要:[目的]探究伊氏杀线真菌与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)对松材线虫的联合毒力.[方法]使用Esteya vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液处理松材线虫,通过线虫的形态变化、死亡率及死亡速度3个方面测定E.vermicola与Bt联合对松材线虫的影响.[结果]经过E.vermicola孢子悬浮液处理过的线虫会出现内容物渗漏,体腔收缩、弯曲、断裂的现象;高浓度的E.vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液联合处理松材线虫可以明显地提高线虫的死亡率,最高可以达到100%;联合处理的线虫死亡速度较快,随着处理时间的延长,死亡率会一直呈上升的趋势.[结论]应用这两种生防微生物在合适的浓度下混配能够在较短时间内提高松材线虫的死亡率....
摘要:[目的]根据Ikdea对HycuNPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因.[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白.[结果]重组质粒pGEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功.通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够与pGEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38.2 kDa.优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1.0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高.[结论]成功构建了pGEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础....
摘要:松材线虫是松树萎蔫病的主要病原,为了筛选到具有较高杀线虫活性的苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis菌株,采用直接触杀法对苏云金芽胞杆菌发酵液进行杀线虫活性以及稳定性的检测,并对筛选出的高活性菌株通过扩增16S rDNA片段进行菌株的鉴定.结果表明,4个菌株中具有最高活性的菌株D发酵液处理松材线虫8h的死亡率超过70%,24 h其死亡率达到100%;在温度为-20、25、40、60、80和121℃条件下处理的菌株D发酵液,其对松材线虫的毒力都在85%以上;在pH 5.0~10.0时,菌株D发酵液对松材线虫的毒力都在85%~94%,并无显著的差异;将菌株D发酵液进行蛋白酶K处理后,其对松材线虫的毒力仍在98%以上;在4℃环境下保存50 d,菌株D发酵液的毒力没有明显下降.通过16S rDNA 1.5 kb片段的序列分析,初步得出菌株D可能是苏云金芽胞杆菌KNU-07.可见,菌株D发酵液具有耐热、耐储藏和对蛋白酶K稳定的特性,是一株具有开发潜力和应用前景的高毒力菌株....
摘要:叶片衰老是植物生长发育的最后阶段,黑暗、干旱和极端温度等会加速叶片衰老过程,严重影响植物的生长发育和作物产量.bHLH(basic helix-loop-helix)属于转录调控因子中的一个大家族,因具有保守性较高的bHLH结构域而得名,广泛存在于真核生物界.在中间锦鸡儿(Caragana intermedia)转录组数据库中得到一条候选bHLH基因全长序列,将其命名为CibHLH027.正常和黑暗诱导的情况下,CibHLH027-OE株系较WT相比叶片衰老明显,并且黑暗处理后叶绿素含量下降、离子渗透率增大、细胞膜受损严重,说明CibHLH027参与了叶片衰老调控过程....
摘要:[背景]粘细菌是一类具有社会性行为的高等原核生物,其代谢产物具有丰富、多样、新颖的生物活性,是筛选天然药物的良好资源,具有很大的研究开发应用价值.[目的]分析大兴安岭地区粘细菌资源的多样性;分离纯化可培养的粘细菌,分析其抗菌活性并从中筛选对马铃薯晚疫病菌具有拮抗作用的菌株.[方法]通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对从大兴安岭地区采集的15个土样中粘细菌资源的多样性进行分析,利用兔粪诱导、大肠杆菌划线诱导和滤纸诱导3种方法从土样中分离可培养的粘细菌,结合形态观察、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析确定这些菌株的分类地位,通过平板对峙法对其进行抗菌活性分析.[结果]DGGE的分析结果显示,15个土样中共鉴定到13个属的粘细菌,基本覆盖了大部分已知的粘细菌种属以及部分未分类的粘细菌,表现出了丰富的多样性.共分离得到88株菌,从中得到22株纯菌,经鉴定属于2个属(粘球菌属与珊瑚球菌属)8个种(黄色粘球菌、橙色粘球菌、变绿粘球菌、珊瑚粘球菌、具枝粘球菌、大孢珊瑚球菌、弱小珊瑚球菌和珊瑚状珊瑚球菌).抗菌结果显示:22株纯菌均表现出可以对一种甚至多种指示菌产生抗性,其中19株抑制大肠杆菌的生长,14株抑制马铃薯晚疫病菌的生长,8株抑制金黄色葡萄球菌的生长,13株抑制酿酒酵母菌的生长,7株抑制枯草芽孢杆菌的生长.[结论]内蒙古大兴安岭地区蕴藏着丰富的粘细菌资源,粘球菌属及珊瑚球菌属可能为该地区粘细菌菌群中的优势菌.分离纯化出的粘细菌菌株均表现出抑制一种甚至多种指示菌生长的活性,其中64%的纯菌对马铃薯晚疫病菌产生抗性,具有进一步研究的潜在价值....
摘要:为增强羊口疮病毒(ORFV)的基础理论研究及羊口疮的防控等工作,本研究通过将毒株接种羊睾丸细胞进行增殖培养、病毒粒子的形态学观察、超薄切片观察、动物回归、B2L和VIR基因序列的测定与分析等试验,对待检毒株(内蒙古分离株ORFV/nm-W)进行了病毒学和分子生物学的特性研究.结果表明,本分离株能够引起羊睾丸细胞产生明显病变,病变开始出现和出现80%CPE的时间分别为接种后24和72 h,病毒滴度TCID50为10-6.5.病毒粒子为椭圆形,在细胞质内增殖,接种毒株的羊只出现典型的CE症状.扩增后的产物经序列分析表明,ORFV/nm-W分离株的B2L基因和VIR基因与GenBank已发布毒株的该序列之间核苷酸同源性分别为96.7%~98.8%,96.2~99.3%,且该分离株与中国陕西株和新疆株同源关系最近....
摘要:利用羔羊睾丸细胞、Marc-145、Veto细胞对病毒进行分离和培养,通过动物回归试验、组织病理学切片的观察、透射电镜观察、PCR鉴定等方法进行病毒的鉴定,并参照GenBank中绵羊痘病毒P32基因序列设计并合成1对特异性引物,成功地对分离株的P32基因进行克隆、测序,并与多株参考毒株进行同源性比对分析.结果显示:透射电镜下观察到典型的痘病毒粒子;动物回归试验中试验动物临床症状为典型的羊痘症状;组织病理学切片中观察到羊痘病毒嗜酸性包涵体;通过DNASTAR与参考毒株进行同源性比对,与参考株同源性为97.2%~99.5%.结果表明:该分离株为绵羊痘病毒,并命名为SPPV-NeiMengG2015....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:为实现谷子的精量播种,设计一种适应谷子这种小粒径作物播种的气吸式精量穴播排种盘.该排种盘具有成群分布吸孔的特点,可同时吸附多粒种子.利用该排种盘在计算机视觉排种器试验台上进行谷子排种性能试验.分别以合格指数、重播指数、漏播指数为评价指标,对排种盘孔数、排种盘孔径、排种盘转速和气吸室真空度4个因素进行单因素试验,得到了各因素作业时的较优范围.采用正交试验得到排种性能各因素的较优组合为:排种盘孔数4,排种盘孔径0.8 mm,排种盘转速11.0 r/min,气吸室真空度-1.2 kPa,该组合下,谷子精量排种效果较好,穴粒数合格指数94%,重播指数4%,漏播指数2%,满足谷子精密播种要求....
摘要:针对小粒径种子大小和形状各异、进行排种试验时离散性因素多的特点,进行了正交试验与均匀试验,并进行参数优化。试验结果表明:进行同水平同因素的正交试验和均匀试验时,正交试验对指标的预测范围更大,但均匀试验对指标的预测更符合实际,均匀试验的参数优化结果可以代替正交试验的优化结果。该研究为均匀试验应用于小粒径排种试验等离散性因素比较大的情况提供了借鉴。...
摘要:采用二次通用旋转组合设计对室内精量排种试验进行了优化设计。通过理论分析,选择真空度和排种轴转速作为试验因素,穴距合格率和空穴率作为试验指标,进行二因素三水平的二次通用旋转组合设计试验,并建立了数学模型。经过检验,模型拟合程度很好。对真空度和排种轴转速与穴距合格率和空穴率之间的影响趋势进行分析,得到了最佳参数组合的预测结果:真空度3.5kPa,排种轴转速7.4r/min,穴距合格率93.5%,空穴率3.2%。实测值为:穴距合格率92.4%,空穴率1.8%,误差1.25%。由此说明,模型精确、可靠,为二次通用旋转设计在农机方面的试验研究提供了借鉴。...
摘要:排肥装置作为免耕播种机的重要组成部分,其排肥性能直接影响播种的出苗率、作物的长势及粮食的产量。为得到外槽轮排肥器不同槽轮工作长度的单位圆周排出质量和质量流率,本文采用离散元软件,对外槽轮排肥器转速为35r/min,槽轮工作长度为15、30、55mm 时的排肥过程进行了模拟。模拟结果表明:外槽轮工作长度为15、30、55mm 时,单位圆周排出质量分别为0.0369、0.0694、0.1355kg/r;质量流率分别为0.0215、0.0405、0.0790kg/s。...
[期刊论文] 李娜 周晓榕 庞保平
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的亚洲小车蝗(Oedaleus asiaticus)是中国北方草原区和农牧交错区发生危害最严重的蝗虫之一,一年一代,以卵在土壤中越冬。通过测定亚洲小车蝗卵不同发育阶段及低温驯化后卵的过冷却点及体内小分子糖醇和氨基酸含量,以揭示亚洲小车蝗卵抗寒性的生理生化机理。方法从四子王旗葛根塔拉草原采回亚洲小车蝗成虫,置于产卵笼内用玉米叶饲养,每日收集卵囊。将卵囊放入盛有土壤的塑料杯中后,置于25℃恒温条件下进行培养,以获得不同发育阶段的卵。同时,将当天产下的卵囊置于0℃低温培养箱中进行低温驯化,以获得不同驯化时间的卵。采用热电偶法测定卵的过冷却点,分别采用高效液相色谱法和氨基酸自动分析仪测定小分子糖醇和氨基酸含量。结果在25℃的恒温条件下,从卵产出至产后120 d,亚洲小车蝗卵的过冷却点逐渐降低,氨基酸总量变化不显著,而小分子糖醇含量变化显著。在蝗卵内共检测到17种氨基酸,其中谷氨酸含量最高(7.20—8.35 mg·100 mg-1),其次为天冬氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸和丙氨酸,胱氨酸和蛋氨酸含量最低(0.51—0.88 mg·100 mg-1)。过冷却点与脯氨酸、丙氨酸及甘氨酸含量呈负相关关系,而与天冬氨酸、胱氨酸及亮氨酸含量呈正相关关系。在亚洲小车蝗卵内均检测到6种小分子糖醇,其含量在不同发育阶段均差异显著。其中,甘油含量最高(56.14—160.00μg·g-1),其次为海藻糖(13.60—51.13μg·g-1)和山梨醇(3.14—72.30μg·g-1),再次为肌醇(3.19—22.15μg·g-1)和葡萄糖(3.59—25.40μg·g-1),果糖含量最低(1.28—11.33μg·g-1)。随着卵的发育,卵体内海藻糖、甘油、肌醇和山梨醇的含量上升,葡萄糖含量下降,而果糖含量在产卵后90 d内处于升高趋势,120 d时急剧下降。除果糖外,过冷却点与甘油、海藻糖、肌醇及山梨醇含量达到了显著的负相关关系,而与葡萄糖含量呈显著的正相关关系。0℃低温驯化卵30 d后,其过冷却点与对照相比差异不显著。60 d后,其过冷却点显著降低了1.28℃,甘油含量增加了43.01%,而葡萄糖含量降低了73.54%。驯化90 d后,其过冷却点显著降低了2.15℃,甘油和肌醇含量比对照分别增加了49.39%和36.18%,而葡萄糖含量降低了87.98%。低温驯化对海藻糖、山梨醇和果糖含量影响不显著。结论随着亚洲小车蝗卵的发育,其体内甘油、海藻糖、肌醇和山梨醇等4种小分子糖醇及甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸等3种氨基酸含量显著上升,而过冷却能力逐渐增强。0℃低温驯化引起蝗卵内甘油和肌醇含量显著上升,过冷却能力提高。...
[期刊论文] 李娜 周晓榕 庞保平 王振
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:[目的]低温是影响昆虫生长发育和存活的关键因子之一.为明确轮纹异痂蝗Bryodemella tuberculatum dilutum卵的抗寒性及其机理,研究了其过冷却能力与其体内水分及其他抗寒性相关生化物质含量的关系.[方法]采用热电偶法测定了轮纹异痂蝗卵的过冷却点,同时采用烘干法、残余法、氨基酸自动分析仪和高效液相色谱法分别测定了其卵的含水量、脂肪、氨基酸及小分子糖醇的含量.[结果]土壤含水量对轮纹异痂蝗滞育前卵的含水量、脂肪含量(鲜重)及过冷却点有极显著的影响(P<0.01).随着土壤含水量从4%增加到13%,卵含水量从45.12%上升到55.25%,卵脂肪含量(鲜重)从10.39%下降到9.39%,而过冷却点从-30.11℃上升到-25.69℃.不同发育阶段卵的过冷却点、含水量、脂肪、氨基酸及小分子糖醇含量存在极显著差异(P<0.01).从卵产下当天至120 d,卵过冷却点从-26.78℃下降至-30.18℃,含水量从51.93%下降至46.69%,脂肪含量分别从9.99%(鲜重)和17.37%(干重)上升至13.92%(鲜重)和25.29%(干重).滞育卵的过冷却点显著低于滞育前卵的过冷却点.从卵中共检测到17种氨基酸,其中5种与过冷却点存在显著的相关关系(P<0.05).卵过冷却点随着甘氨酸和脯氨酸含量的升高而降低,而随着胱氨酸、亮氨酸及天冬氨酸含量的增加而升高.随着卵的发育,海藻糖、甘油、肌醇和山梨醇含量逐渐上升,而葡萄糖和果糖含量逐渐下降.在卵发育过程中,海藻糖和甘油的含量显著高于其他4种物质的含量.卵过冷却点与上述6种小分子糖醇均存在显著的相关关系,其中与海藻糖和葡萄糖的相关性最强.过冷却点随海藻糖、甘油、肌醇和山梨醇含量的升高而降低,而随葡萄糖和果糖含量的升高而上升.[结论]轮纹异痂蝗卵在发育过程中,通过降低含水量,积累脂肪、脯氨酸、甘氨酸及海藻糖、甘油、肌醇和山梨醇等抗寒物质,从而提高其过冷却能力....
[期刊论文] 李娜 周晓榕 庞保平
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:采用热电偶法,在室内测定了宽翅曲背蝗卵的过冷却能力及抗寒性.结果表明:土壤含水量对滞育前卵的含水量有显著影响,而对卵过冷却点(SCP)的影响不显著,卵含水量随着土壤含水量的升高而上升.不同发育时期卵的SCP、含水量和脂肪含量存在显著差异.随着卵的发育,其含水量从产卵当天的51.5%下降至120 d的46.8%,脂肪含量从10.5%(鲜质量)/19.0%(干质量)上升到14.5%(鲜质量)/28.9%(干质量),而SCP从-23.5 ℃下降至-30.0℃;卵SCP与其含水量及脂肪含量存在显著相关关系;深度滞育卵的SCP显著低于滞育前和滞育初期卵的SCP.不同低温强度和处理时间对滞育卵的存活率有显著影响.滞育卵暴露12h的致死温度为-27.3℃,在-25℃低温处理的致死时间为22.73 d.滞育卵的SCP与致死温度相近,说明宽翅曲背蝗卵为不耐结冰类型,且SCP是衡量其抗寒性的可靠指标....
摘要:采用大肠杆菌诱导的方法,从内蒙古呼和浩特市采集的土壤中分离到一株细菌(Xt 2).通过子实体和菌落形态学的初步观察、生理生化特征和16S rDNA分子鉴定,该菌株具有与橙色黏球菌相似的形态及生理生化特征,且其16S rDNA序列与橙色黏球菌的16S rDNA序列具有99%的同源性,说明该菌株为橙色黏球菌.抗菌活性表明菌株Xt 2具有明显的抗马铃薯晚疫病菌活性,且活性物质主要存在于菌株的胞外代谢产物中.活性物质不是蛋白质,对紫外的耐受性比较好,但对高温、过酸或过碱的环境比较敏感.本研究为菌株Xt 2抗马铃薯晚疫病活性物质的提取、分离及鉴定奠定了基础,也为内蒙古地区黏细菌的深入研究及抗马铃薯晚疫病新药研发奠定了一定的基础....
摘要:以转基因的抗晚疫病型马铃薯(Solanum tuberosum)株系DR1、DR3a和野生型株系DG为材料,通过半定量RT-PCR研究了接种晚疫病病原菌(Phytophthora infestans)生理小种89148-9后叶片中水杨酸和乙烯合成途径关键酶苯丙氨酸解胺酶(PAL)基因(poPAL)和1-氨基环丙烷-1-羧酸(1-Aminocyclo-propane-1-carboxylic acid,ACC)合成酶(ACS)基因(poA CS)的表达情况.结果表明,接种后3个株系都能诱导poPAL和poA CS基因的表达,但大部分转基因株系叶片内该基因的诱导表达量高于野生型,并且其表达峰值多数早于野生型.说明poPAL和poA CS基因可能参与了马铃薯的抗晚疫病反应,但不同株系中这些基因的诱导表达模式不同,这可能是不同马铃薯株系抗、感晚疫病的原因所在....
摘要:沙芥(Pugionium corrnutum(L.) Gaertn.)为中国特有种,是1种具有很高经济价值和生态价值的沙生蔬菜.本实验以野生沙芥种子为试验材料,测其在20℃~30℃下、不同浓度的NaCl溶液处理及蒸馏水恢复后的萌发率、萌发速率,以及萌发后幼苗下胚轴、胚根的长度和干重、苗干重.结果表明:(1)在NaCl处理条件下,沙芥种子的萌发率和萌发速率随着Nacl浓度的增加而降低,当其处理浓度达300mM及以上时则完全抑制种子萌发.(2)将各处理中未萌发的种子转移至蒸馏水中进行恢复萌发,所有浓度下的种子均有萌发;NaCl浓度为200mM~400mM的种子最终萌发率显著高于对照,NaCl浓度为100mM和200mM的下胚轴长度高于对照.由此可见在NaCl环境中沙芥种子具有萌发潜力,幼苗也有出土的形态优势....
摘要:本文以沙葱休眠种子为试材,研究浓H2SO4、PEG-6000(w/w)和GA,对种子萌发的影响,以期掌握促进萌发的最佳组合条件.结果表明:(1)浓H2SO4漫种5min可促进沙葱种子萌发,萌发率高于对照2.25倍;(2)15%PEG浸种6h,是促进沙葱种子萌发的最佳组合,萌发率为60%,高于对照5倍;(3)浓度为50mg/1-1000ms/1的赤霉素浸种各处理,对沙葱休眠种子萌发影响不大,相比而言浓度为200mg/1的GA,处理,对沙葱种子萌发有一定的促进作用.综上得出15%PEG浸种6h,是本实验条件下促进沙葱休眠种子萌发的最优组合....
摘要:本实验通过对荒漠草原生态系统模拟增温和施氮肥,利用静态箱法研究温度和氮素增加对内蒙古荒漠草原生长季土壤甲烷通量的影响.研究结果表明:a)增温明显提高了土壤的各层温度和湿度,施氮对土壤温度没有明显的影响;b)荒漠草原为大气甲烷的弱汇;c)增温使荒漠草原土壤甲烷的吸收明显提高,施氮和增温施氮的交互作用对土壤甲烷的吸收在短时间内没有显著影响....
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