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[期刊论文] 李华玲 陈文飞
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CSTPCD CSCD CA
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摘要:研究生教育在国家人才培养体系中占有十分重要的位置.笔者在荷兰莱顿大学进行了两年的生物医学硕士专业的学习,通过介绍荷兰菜顿大学的入学申请与录取、分析课程体系设置和教学形式,并结合自身的感受与体会以及国内生物医学研究生培养的现状,提出单独设置生物医学研究生专业的重要性和必要性,并为今后国内高校培养生物医学专业研究生提供可以学习和借鉴的有益经验....
[期刊论文] 李华玲 周晓霞
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CSTPCD CA
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摘要:探讨不同脂质体介导基因转染人类骨骼肌原代细胞的转染效率和基因的表达.将含有β-半乳糖苷酶LacZ结构基因的质粒,用三种不同的阳离子脂质体导入人类骨骼肌原代细胞中,通过X-Gal染色观察不同的转染效率.结果发现,Fugene 6转染效率最高,蓝染细胞达10%,其脂质体与DNA的最佳比例为3∶ 2.Fugene 6可有效地将外源基因导入骨骼肌原代细胞,而且外源基因可以长效高效地表达,有望用来作为基因治疗的载体....
摘要:推进高校高素质人才培养是大学生思想政治教育工作的一项重要课题.但目前国内高校大学生参与志愿服务活动普遍缺乏长效机制.本文从当今大学生志愿服务现状入手,剖析大学生志愿服务中存在的问题,借鉴国内外志愿服务的经验,从志愿服务的制度化、激励制度的建立健全、培训平台的建立和完善、加强宣传和保障几方面进行探讨,以期通过创建长效机制使新时期大学生志愿者的工作能更好地适应新形势发展需要....
摘要:生物化学是医学生必修的重要的主干课程之一,也是连接基础课和临床课的桥梁,但由于其体系复杂,学生往往有畏难心理.根据医学生物化学的特点,从合理分配学时、结合临床谈生化应用和加强实验技能的培训等方面,就培养和激发医学生的学习热情进行了探讨....
[期刊论文] 吕贝 李华玲 崔恒宓
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CSTPCD 北大核心
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摘要:反义RNA是一类能与特异性mRNA互补并从翻译、转录或转录后水平上高度特异地抑制靶基因表达的RNA分子.肝癌是全球最常见且致命的恶性肿瘤.肝癌组织的无限增殖、侵袭转移、放化疗耐受等能力成为其无法治愈并不断恶化的重要原因.反义RNA 在肝癌肿瘤中异常表达,肿瘤的恶性表型维持需要众多反义RNA的参与.近年来,利用反义RNA技术治疗恶性肿瘤已经成为了一个新的研究方向,本文对这一技术治疗肝癌进行了综述....
摘要:目的 探讨两个不同公司的同一种抗体神经-肿瘤腹侧抗原(Nova1)在大鼠脑组织中的表达,比较其异同.方法 采用免疫组织化学法(IHC)和Western-blot (WB)进行检测.结果 IHC显示Nova1在大脑中分布广泛,在神经细胞的轴突或树突中都有表达;WB显示在55 kDa处都有很清晰的条带.结论 这两种抗体的表达清晰,既可以用于IHC,也可以用于WB实验....
摘要:目的 验证基于生物信息学的方法发现含有成对皮质酮激素反应元件(GREs)的皮质酮激素作用新基因.方法 应用程序"NURD-finder2",从小鼠36000个基因中筛选出含有成对GREs的88个基因,并选取了10个基因进行动物体内实验来验证.对小鼠(C57BL/6)的14种不同组织进行33P末端标记的原位杂交,用Image J软件分析.结果 10个所检测基因至少在一种组织中表达,而且发现脾脏对皮质酮激素急性应激有强反应;6个所测基因的mRNA水平在激素处理后有显著提高(P<0.05),其中质膜微囊蛋白家族-1(caveolin-1)在肺部有明显上调(P<0.05),生理上具有较强反应,其GRE序列与大鼠和人类的cav-1基因有较高同源性.结论 验证了"NURD-finder2"发现新的含有成对GREs的皮质酮激素反应基因,这些基因具有组织特异性,可能在生理平衡的过程中具有重要作用....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST SA
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摘要:研究用基因重组细胞快速评价重金属污染物对健康的危害,采用分子生物学方法,将亲电性化学反应元件(EPRE)与TK基本启动子和编码虫荧光素酶(LUC)基因相融合,构建成EPRE调控的LUC报告载体,将其转染于HeLa细胞.并将该细胞作用于不同浓度的NaAsO2、CdCl2和HgCl2,用荧光素酶试剂盒物测量LUC的表达量.结果表明,EPRE调控的LUC报告载体框架正确;LUC的表达量与3种受试物具有明显的剂量效应关系,细胞对3种受试物敏感性为As3+>Cd2+>Hg2+....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA
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摘要:目的:探讨Tat-PTDs对金属硫蛋白(metallothionein,MT)表达的促进作用及其体外高效表达重组菌株的重金属抗逆性.方法:采用聚合酶链式反应从小鼠肝脏组织中克隆了金属硫蛋白MT-1和MT-2基因的编码序列,进而分别亚克隆入原核表达质粒pET28b-Tat和pET28b,测序验证后转化入大肠杆菌BL21 (DE3)细胞,采用1mmol/L诱导剂IPTG诱导表达,并于诱导表达0h,2h,4h,6h时收集菌体,超声破碎后制备总蛋白、上清蛋白和沉淀蛋白并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.针对上述诱导表达4hrs的菌液适量稀释后转接入新的LB培养基,采用分光光度仪测定高效表达金属硫蛋白菌株对5mmol/L铜的抗逆性.结果:Tat-PTDs可明显增加金属硫蛋白的表达产量,且Tat融合蛋白主要为可溶性表达;Westem blot及其柱状图分析结果显示,Tat融合蛋白的表达水平约为非Tat融合蛋白的5~8倍;高效表达Tat-MT-1和Tat-MT-2蛋白的菌株具有明显的抗重金属铜的活性,与非Tat标签融合蛋白和空载对照组相比存在显著性差异(P<0.01).结论:实验数据表明,Tat-PTDs蛋白转导技术可以促进小鼠金属硫蛋白基因在原核生物中的可溶性高表达,Tat融合蛋白的表达水平比非Tat融合蛋白的表达有显著提高,其克隆菌株对重金属铜活性的抗性也有明显提高....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:构建人NOVA1基因的真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1,转染PC12细胞后筛选最佳转染条件,进而结合细胞免疫组织化学研究NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达分布,并探究其抗低氧活性.根据NCBI数据库NOVA1基因序列设计上下游引物,以pCR4-TOPO-NOVA1载体为模板采用聚合酶链式反应扩增获得NOVA1基因的全长cDNA编码序列,限制性内切酶SalⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pCMV-Myc真核表达载体,酶切及直接测序验证后采用脂质体转染法转染入PC12细胞,针对转染比例和转染时间进行优化,进而采用实时定量PCR和Western blotting检测NOVA1蛋白的表达,最后采用细胞免疫组织化学检测NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达定位及其抗低氧活性.通过酶切和直接测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-Myc-NO VA1;质粒和Lip02000最佳转染比例为1:2.5,最佳转染时间为72 h;最佳转染条件下NOVA1基因和蛋白的表达水平显著增加,转染pCMV-Myc-NOVA1质粒后,NOVA1蛋白主要分布于细胞核和细胞质;过表达NOVA1的PC12细胞增殖活性明显增加.本文采用分子克隆的方法成功构建了NOVA1基因的真核表达载体,通过条件优化实现了高效表达并测定过表达NOVA1蛋白具有明显的抗低氧活性,不仅为深入揭示NOVA1蛋白的作用机理提供了重要参考,而且为NOVA1蛋白潜在的药物开发提供了重要技术支撑....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:目的 用亲电性反应元件(EPRE)调控的转虫荧光素酶基因细胞快速评价环境的污染程度.方法 采用分子生物学的方法,将EPRE与TK基本启动子和编码虫荧光素酶(LUC)的基因相融合,构建成EPRE调控的LUC稳定表达载体,将其转染于HeLa细胞,经G418筛选出稳定的细胞株.该细胞经不同浓度的亚砷酸钠(NaAsO2)、氯化镉(CdCl2)、氯化汞(HgCl2)和顺丁烯乙酸二乙酯(DEM)作用后,用荧光素酶试剂盒物测LUC的表达量.结果 DNA测序显示,EPRE调控的LUC稳定表达载体结构框架正确;LUC的表达量与受试物具有一定的剂量-效应关系,其中DEM的剂量-效应关系最明显.结论 EPRE调控的转LUC基因细胞构建成功....
摘要:目的研究秀丽线虫野生株系N2缺氧时的差异蛋白质,为进行线虫在缺氧环境下的应答机制研究奠定基础。方法同步化培养N2株系的线虫,培养至L4期时物理缺氧10 h(0.2% O2)后,提取总蛋白,采用双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)分离和串联质谱分析,搜索线虫数据库,鉴定蛋白种类并进行分析。并采用突变株系(prdx-2, prdx-3)进行了4、6、8、10、12 h的缺氧实验研究。结果质谱成功鉴定了其中的5个与对照有显著差异的蛋白质(ratio>2.0,P<0.05),包括2个上调( PRDX-2、 PRDX-3)和3个( RPL-7、H28O16.1、VHA-12)下调的蛋白。突变株系的缺氧存活率实验进一步验证了蛋白质组学的结果,也显示了PRDX-2和PRDX-3在抗缺氧中起重要作用。结论蛋白质组学的方法为线虫缺氧的研究提供了有参考价值的数据,缺氧10 h后,线虫中变化的蛋白质与能量、翻译和抗氧化有关,为进一步研究缺氧时的应答机制奠定了基础。...
摘要:目的 研究秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)野生株系N2和缺氧敏感株系(ia04)的差异蛋白质,为进行线虫在缺氧环境下的应答机制研究奠定基础.方法 同步化培养2种株系的线虫,培养至L4期时,常规方法提取总蛋白,采用双向电泳分离和串联质谱分析,搜索Swiss-Prot线虫数据库,鉴定蛋白种类并根据基因本体论(gene ontology,GO)进行分析.结果 质谱成功鉴定了其中的25个差异显著蛋白(ratio> 2.0,P<0.05),其中N2株系检测到的表达量比ia04株系高的主要是热休克蛋白(HSP-70,HSP-60)、GTP结合蛋白(TAG-210)、乙酰辅酶A脱氢酶中链(GN=T);ia04株系检测到的表达量比N2高的是延伸因子(EFT-3)和铁硫蛋白-1 (ISP-1),在ia04株系中,HSP的含量明显低于N2株系,说明这可能是ia04株系对缺氧敏感的原因之一.根据GO注释结果发现,鉴定到的这些差异蛋白与线虫的DNA合成及生长发育的相关性较大.结论 蛋白质组学的方法为线虫缺氧的研究提供了有参考价值的数据,不同株系差异蛋白的发现可促进对缺氧应答机制的了解,且可从蛋白质水平揭示重要表型的基因表达机制....
摘要:鉴定和分析肝癌细胞中新的天然反义RNA MEF2D-AS根据已建立的双链RNA文库筛选与肝癌相关的反义RNA.通过RT-qPCR验证其反义RNA的存在,采用cDNA末端快速扩增技术获得其全长序列,并检测HepG2细胞经5-Aza-dC处理前后MEF2D基因正反义链表达量的变化.结果显示,成功鉴定出1条全长为1265 bp的新的天然反义RNA,并预测其属于长链非编码RNA(long non-coding RNA,简称为lncRNA),命名为MEF2D-AS.经5-Aza-dC处理后,MEF2D-AS的表达量升高,而MEF2D mRNA的表达量降低.证实了MEF2D-AS的存在并预测其属于长链非编码RNA,且与MEF2D正反义RNA是反相关关系.此研究结果可为进一步探讨肝癌发生机制提供参考....
摘要:目的 用RNR3调控的全发光酵母细胞高通量筛选化学诱变原.方法 以含有酵母嗜好遗传密码子的绿色荧光蛋白(yEGFP)报告载体为基本框架,用PCR方法从酵母(W303-1A)基因组扩增RNR3启动子,将其插入到yEGFP的上游,从而构建成RNR3调控的yEGFP酵母报告载体.用醋酸锂方法将载体转化于酵母细胞,构建成RNR3调控的yEGFP发光酵母细胞,可在96孔板中对不同浓度的化学诱变原进行筛选,具有快速、方便和高通量特点.结果 对数种不同的DNA损伤药物研究结果表明,DNA烷化剂(甲磺酸甲脂)、DNA断裂剂(顺铂)、DNA结合剂(放线菌素D)和DNA合成酶抑制剂(5-氟尿嘧啶和羟基脲)可诱导RNR3的表达,而苯丁酸氮芥和4-硝基-N-氧化喹啉由于细胞的毒性的作用,未使RNR3发生表达.结论 某些与致癌性有关的DNA损伤化学物能诱导RNR3表达,故该发光酵母细胞可用于对某些致癌物的高通量筛选....
摘要:磁性纳米颗粒在生物医学等领域应用广泛,而其毒性研究尚未深入,对生物的影响及作用机制仍未阐明.本文综述了磁性纳米颗粒近年来对于细胞、鼠、家兔和秀丽隐杆线虫的毒理学研究,为磁性纳米颗粒的应用提供参考....
摘要:目的 观察南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)联合顺铂(Cisplatin,DDP),对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭迁移和凋亡的协同作用.方法 将对数期HepG2细胞,分为对照组(不加药)、COE组(40 mg·L-1)、顺铂组(DDP 2 mg·L-1)及联合组(同时加入40 mg·L-1的COE和2 mg· L-1的DDP).药物作用24 h后,MTT法计算细胞增殖抑制率,划痕实验及Transwell实验分析细胞的侵袭迁移,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法分析上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和vimentin)以及凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达水平.结果 与对照组相比,各组药物均能抑制肝癌细胞的增殖,缩短迁移距离,促进细胞凋亡(P<0.05).Western blot结果表明,与对照组相比,各组药物均能抑制人肝癌HepG2细胞内N-cadherin、vimentin及Bcl-2蛋白的表达水平,同时增加E-cadherin及Bax蛋白的表达量.与单一用药相比,COE联合DDP用药,作用效果更显著(P<0.05).结论 南蛇藤提取物可协同顺铂,促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞侵袭迁移,其分子机制可能与上皮间质转化及Bcl-2/Bax通路有关....
摘要:目的 建立RNR2调控的酵母增强绿色荧光蛋白(yEGFP)发光酵母细胞,高通量筛选化学诱变原.方法 用PCR方法从酵母(W303-1 A)基因组扩增RNR2启动子,经酶切后,用T4连接酶与线性化的含酵母嗜好遗传密码子的yEGFP报告载体相连,连接产物转化子质粒经酶切和测序鉴定,构建RNR2调控的yEGFP酵母报告载体.用醋酸锂方法将其转化于W303-1 A酵母细胞,从而构建成RNR2调控的yEGFP发光酵母细胞(W303-1 A/RNR2-yEGFP).用甲磺酸甲酯0~400 mg· L-1分别作用于该发光酵母细胞0,4,8,12,16和20 h后,于倒置荧光显微镜下观察荧光,用多功能酶标仪检测其荧光发光强度,选择最佳诱导时间;用不同浓度的DNA烷化剂、DNA断裂剂和DNA合成酶抑制剂作用于该重组细胞16h,检测其荧光发光强度,考察W303-1 A/RNR2-yEGFP细胞对各种化学诱变原的敏感性.结果 经测序确定W303-1 A/RNR2-yEGFP构建成功.选择16 h为最佳诱导时间;各种化学诱变原与W303-1 A/RNR2-yEGFP细胞作用16h后,与DNA发生结合的化合物中放线菌素D和溴乙锭诱导的发光度与对照组无明显差别,发光倍数<1.5;与DNA发生烷基化的化合物中,甲磺酸甲脂200 mg· L-1诱导的细胞发光度最强,发光倍数为5.21,瘤可宁200 μg· L-1诱导的发光倍数为1.9,而丝裂霉素C的发光度与对照组无明显差别.在使DNA发生断裂的诱变原中,顺铂250 mg· L-1诱导的细胞最高发光倍数为3.7,其次4-硝基-N-氧化喹啉3.1 mg·L-1、博来霉素12.5 mg·L-1和福来霉素200 mg· L-1,最高诱导倍数分别为2.35,2.26和2.53;在抑制DNA合成酶或拓扑异构酶的诱变原中,5-氟尿嘧啶500 μg· L-1、羟基脲570.45 mg· L-1和喜树碱30 mg,L-1所诱导的细胞最大发光倍数分别为2.36,2.65和2.53;而非基因毒性化合物秋水仙碱、刀豆氨酸和四环素诱导的发光度与对照无明显差别.结论 该重组发光酵母细胞可用于对多数造成DNA断裂或合成阻断的化学诱变原筛选,具有快速、方便和高通量等特点....
摘要:作为模式生物,秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)已经成功地用于许多生命过程的研究,尤其被广泛应用于现代发育生物学、行为与神经生物学、基因组学、正向和反向的遗传学研究中,近年来,秀丽线虫更成为了一个进行蛋白质组学研究的优良体系,诠释了基于基因组学和RNA干涉研究中的基因功能.许多比较蛋白质组学表达谱的建立可以更好地理解线虫在不同发育阶段、不同温度下基因的表达,在与人类神经疾病相关的疾病研究中,线虫对帕金森疾病、阿尔茨海默症、衰老与寿命、胰岛素通路都有所揭示.另外,线虫的亚蛋白质组学和翻译后修饰如糖基化和磷酸化也已经鉴定,其数据库也在不断地完善.本文介绍了秀丽线虫的蛋白质表达谱建立的历史,尤其是神经科学研究中的应用及翻译后修饰表达谱的建立等方面的研究现状,因此,结合其它分子生物学和基因工程技术,线虫蛋白质组学研究已成为提供一个新的全面的系统分析基因功能的重要工具,提示线虫是”蠕虫蛋白质组学”的一个丰富宝藏....
摘要:目的探讨带阔筋膜张肌蒂胫骨骨膜移植术修复骨关节软骨缺损及骨不连.方法对4例髋关节结核行病灶清除而有软骨缺损;1例股骨骨髓炎行病灶清除,开窗,减压,肌瓣填塞;1例股骨骨不连,采用带阔筋膜张肌蒂胫骨骨膜+游离骨膜移植.结果髋关节功能不同程度恢复,无融合或强直,恢复正常工作,日常生活可自理,疼痛完全缓解.带阔筋膜张肌蒂胫骨骨膜移植血运建立快,成软骨作用强,修复骨缺损并具有抗炎及关节外成骨作用.结论带阔筋膜张肌蒂胫骨骨膜移植术对关节软骨缺损、骨不连、骨髓炎均具有成软骨、成骨及增强抗感染的作用,修复重建关节功能效果好,在髋关节软骨缺损重建头臼功能中可作为首选术式....
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