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[期刊论文] 王庆 朱建伟
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CSTPCD 北大核心
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摘要:本文根据国外法规及相关行业指导原则,结合实际工作经验,对化学合成原料药生产过程中设备清洗需要考虑的因素进行综述和探讨.本文介绍了清洁可接受水平、清洗方法、清洁验证等重要概念及方法,并通过具体实例讨论了化学合成原料药生产设备清洗的关键因素,为化学合成原料药生产设备清洗提供参考.
[期刊论文] 张梦筱 朱建伟 路慧丽
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CSTPCD 北大核心
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摘要:生物技术药物是21世纪医药工业发展的中坚力量,其中单克隆抗体类药物是生物技术药物的典型代表,是恶性肿瘤、自身免疫病等领域全球销售额最高的药品种类.在抗体药物发展的几十年里,随着基因工程、蛋白质工程等领域的发展,抗体生产的宿主细胞建立、表达、纯化等各阶段的技术均不断取得突破,文中综述和讨论了抗体药物生产所采用的真核哺乳动物细胞表达系统、原核大肠杆菌表达系统、转基因动物反应器、无细胞蛋白质合成系统以及相关的关键技术进展.
摘要:采用(+)-D-氨基半乳糖盐酸盐(D-Ga1N)结合脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肝衰竭(AHF)来评价重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)对肝脏的保护作用.本研究用SPF级雄性C57BL/6小鼠建立AHF模型.造模前1h,小鼠腹腔注射3、9 mg/kg的rhIL-1Ra或等体积的生理盐水(NS),注射造模药物后4h采集小鼠血液和肝组织样本.分析各组小鼠循环中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平和肝组织切片,并用荧光定量PCR方法分析肝组织中一氧化氮合成酶2 (NOS2)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平变化.本研究还进一步通过死亡率试验考察rhIL-1Ra对AHF模型小鼠的保护作用.结果 表明,9 mg/kg剂量的rhIL-1Ra可以显著抑制AHF模型小鼠循环中的ALT和AST活性以及TBIL水平,减轻肝组织坏死和肝细胞变性程度,降低肝组织中NOS2和IL-6的表达.2个剂量(3和9 mg/kg)的rhIL-1Ra都可以显著地改善AHF模型小鼠的生存率.结果 表明,rhIL-1Ra在AHF药物开发和临床应用中具有潜在价值.
摘要:对嘉荫断陷淘淇河组、永安村组、太平林场组、渔亮子组进行露头剖面、单井相分析、粒度分析,结合地震剖面解释及取样测试分析等方面的详细研究,查明断陷主要有河流相、扇三角洲相、三角洲相与湖泊相等沉积相类型.扇三角洲相主要发育于淘淇河组,三角洲主要发育于永安村组,湖泊相主要发育于太平林场组,河流相主要发育于渔亮子组;整体上构成了早期以两侧物源供给为主、后期以西侧物源供给为主、沉积中心逐渐向断陷中心退缩迁移的半深湖-扇三角洲与半深湖-三角洲沉积体系;断陷太平林场组具有中等—好的烃源岩,处于低熟至成熟阶段,具有一定的油气勘探前景.
摘要:中国仓鼠卵巢(CHO)细胞是工业生产重组蛋白类生物药物的主要宿主细胞之一.重组蛋白工程细胞株的传统构建方法是通过外源基因的随机整合和多步骤的加压筛选获得,这种方法耗时费力.本研究主要介绍了一种新型的悬浮类型CHO细胞(CHO-S)高产细胞株的构建方法,利用Crispr/Cas9介导的定点整合技术,将重组蛋白编码基因快速、准确地整合到CHO-S细胞基因组中的转录活跃区,实现重组蛋白的高产量表达.采用本方法成功构建得到了高表达单克隆抗体细胞株,并验证了细胞产物质量一致性.
摘要:目的 探讨骨桥蛋白(OPN)对胰腺星形细胞(PSC)的影响及其机制.方法 构建OPN慢病毒过表达载体(OPN-O/E)并转染PSC,设置空载体转染细胞作为对照组.分别采用CCK-8实验和Transwell小室检测OPN-O/E转染及OPN-O/E转染联合Akt抑制剂LY294002(10μmol/L、50μmol/L)处理后PSC增殖活性和趋化活性,采用蛋白质印迹法检测-平滑肌肌动蛋白(-SMA)及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达.结果 OPN-O/E转染上调OPN表达后,PSC增殖活性增高、趋化活性增高,细胞中磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)和-SMA表达水平均增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);细胞中PI3K和Akt表达水平与对照组相比差异均无统计学意义(P均>0.05).使用10μmol/L或50μmol/L Akt抑制剂LY294002干预后,细胞中-SMA及p-Akt的表达被抑制,与OPN-O/E组相比差异均有统计学意义(P均<0.01),Akt的表达无明显变化.结论 OPN通过PI3K/Akt信号通路介导PSC活化,活化后PSC的增殖及趋化活性也增强.
摘要:目的 探讨β-catenin表达下调对胃癌细胞5Fu敏感性的影响,并初步探讨其分子学机制.方法 将β-catenin-RNAi慢病毒及空载体慢病毒分别感染胃癌AGS及MGC803细胞,获得β-catenin低表达的稳定细胞株(AGS-RNAi、MGC803-RNAi)及空载慢病毒感染的阴性对照组细胞(AGS-Neg、MGC803-Neg);Western blot及RT-PCR验证β-catenin蛋白沉默效率;MTT法检查各组细胞对5-Fu敏感性的差异,同时Western blot检测各组细胞中5-Fu代谢酶(DPD、TS)及多药耐药相关蛋白(P-gp)的表达.结果 实验组与阴性对照组细胞中显示绿色荧光的细胞率约占80%,空白对照组细胞不显示荧光;与对照组比较:试验组细胞内β-catenin表达量在基因及蛋白双水平上均显著下调(P<0.05);实验组细胞对多个浓度的5-Fu敏感性均高于对照组(P<0.05),且实验组细胞中TS、P-gp的表达低于对照组(P<0.05),而DPD的表达则与对照组无明显差异(P>0.05).结论 沉默胃癌细胞中β-catenin蛋白的表达可提高胃癌细胞对5-Fu的敏感性,且其分子学机制有可能与细胞内TS及P-gp蛋白表达量有关.
摘要:为提高地铁预应力桥梁孔道灌浆密实度检出率从而保障地铁运营安全,研究了针对预应力桥梁隐蔽病害的超声波检测技术.根据实际情况,分别设计了不同箍筋和配筋率的预应力混凝土试验梁作为检测试件,在试件中预设了不同材料类型及尺寸的人工缺陷进行对比.试验结果表明:超声波检测技术对地铁预应力桥梁孔道缺陷的检测效果较好,最小可以检测出尺寸为5 cm的不密实缺陷.在北京某地铁线路的预应力桥梁进行了现场试验,结果与模拟试验结果基本一致.
摘要:目的 探讨胃癌组织中沉默信息调节因子-1(SIRT-1)、上皮型钙粘附素(E-cadherin)的表达情况及临床意义.方法 选取自2014年9月至2017年9月于南通大学附属医院进行胃癌切除术并经病理确证的胃癌组织及其癌旁正常组织样本各83例,采用免疫组化染色检测胃癌组织及其癌旁正常组织中SIRT-1、E-cadherin的蛋白表达情况,并分析其与临床病理资料及术后复发的相关性.结果 SIRT-1在胃癌组织中的蛋白表达阳性率为80.7%(67/83),显著高于癌旁正常组织的31.3%(26/83),差异有统计学意义(P<0.05);E-cadherin在胃癌组织中的蛋白表达阳性率为32.5%(27/83),显著低于癌旁正常组织的86.7%(72/83),差异有统计学意义(P<0.05).SIRT-1、E-cadherin蛋白表达情况,与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置、TNM分期、肿瘤分化程度无相关(P>0.05);与淋巴结转移、肿瘤浸润情况显著相关(P<0.05).Spearman秩相关分析结果表明,胃癌组织中SIRT-1与E-cadherin蛋白水平表达呈显著负相关(r=-0.512,P=0.001).结论 胃癌组织中SIRT-1蛋白表达水平升高,而E-cadherin蛋白表达水平降低,提示SIRT-1、E-cadherin是判断胃癌转移情况及复发率的潜在标志物,可分别作为判断胃癌转移情况及疾病预后的指标
摘要:目的 探讨胰腺神经内分泌肿瘤(PNENs)合并感染患者DJ-1蛋白高表达的临床意义.方法 选取2010年6月-2013年10月医院收治的60例PNENs患者为研究对象,60例PNENs患者根据是否合并感染分为合并感染组(n=35)与PNENs组(n=25).另选择同期来医院体检的健康人30名为对照组.ELISA法检测各组血清DJ-1蛋白水平,免疫组织化学染色法检测合并感染组、PNENs组手术切除组织中DJ-1蛋白染色情况,统计临床病理参数(感染等)与PNENs组织中DJ-1蛋白表达的关系.随访至2016年12月,收集PNENs患者生存资料,分析DJ-1蛋白表达对PNENs患者生存期(OS、DFS)的影响.结果 PNENs组、合并感染组患者血清DJ-1蛋白水平均高于对照组(P<0.001);合并感染组患者血清中DJ-1蛋白水平高于PNENs组(P<0.001);合并感染组DJ-1蛋白阳性率高于PNENs组,但差异无统计学意义;DJ-1蛋白表达与淋巴结转移、远处转移、TNM分期、病理分级有一定相关,存在淋巴结转移、远处转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、病理分级高的患者PNENs组织中DJ-1蛋白表达水平较高;单变量COX回归法分析结果显示,PNENs组织中DJ-1蛋白表达水平与PNENs患者OS(RR=6.845,95%CI=1.560~30.221,P=0.013)、DFS相关(RR=2.565,95%CI=1.141~5.884,P=0.025).结论 PNENs患者血清及组织中均存在DJ-1蛋白高表达情况,合并感染患者DJ-1蛋白水平更高,与肿瘤侵袭、转移、病情进展、预后密切相关.
[期刊论文] 杨慧 朱建伟 路慧丽
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CSTPCD 北大核心
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摘要:背景:CRISPR/Cas9基因编辑系统来源于由成簇规则间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白(Cas)介导的细菌适应性免疫系统.造血干细胞具有易分离、自我更新分化能力强的优势,已成功应用于恶性血液病、严重的自身免疫性疾病等领域.采用 CRISPR/Cas9 系统对造血干细胞进行体内、体外编辑,是提高造血干细胞移植治疗水平的研究趋势,在临床上具有很大潜力.目的:综述 CRISPR/Cas9 系统在造血干细胞移植领域中的疾病治疗、递送方式、编辑功能优化以及临床应用等方面的最新研究进展.方法:以"造血干细胞,CRISPR/Cas9,基因编辑,递送;stem cells,CRISPR/Cas9,gene editing,delivery"为关键词,检索CNKI、PubMed数据库、相关临床试验及公司在研产品中2012至2018年的文献,初步筛选后,对保留的61篇文献进行详细研究、归纳和总结.结果与结论:利用 CRISPR/Cas9 简易高效的基因编辑能力以及造血干细胞自我更新和分化的能力,编辑过的造血干细胞可以在血液和免疫系统中实现整个造血系统的终身修复重建,在疾病治疗方面具有很大的潜力.CRISPR/Cas9的递送方式目前仍存在局限,需要对其进一步研究和优化,此外,该系统在造血干细胞领域的临床研究及其需应对的伦理和安全问题也需要考虑.
摘要:目的 分析当前中国急性阑尾炎的诊疗现状.方法 采用问卷调查形式,回顾性收集全国43家医疗中心(按提供病例量排序:解放军东部战区总医院、新疆医科大学第一附属医院、安徽省六安市人民医院、山东省滕州市中心人民医院、辽宁省大连市中心医院、江苏省徐州医科大学附属医院、山东省东营市人民医院、福建省晋江市中医院、安徽省黄山首康医院、江苏省盱眙县人民医院、南京江北人民医院、解放军联勤保障部队第九四〇医院、山东省菏泽市立医院、湖北宜昌市中心人民医院、江西省九江市第一人民医院、合肥市第二人民医院、山东省枣庄矿业集团中心医院、江苏省昆山市第三人民医院、江苏省徐州市第一人民医院、解放军陆军第八十一集团军医院、山东省临沂市中心医院、安徽省淮南东方医院集团总医院、解放军联勤保障部队第九〇八医院、江苏省溧阳市人民医院、解放军联勤保障部队第九〇一医院、重庆医科大学附属第三医院、吉林大学第四医院、黑龙江省阿城区人民医院、郑州大学第一附属医院、南京市六合区人民医院、江苏省泰兴市人民医院、内蒙古自治区包头市中心医院、江苏省南通大学附属医院、山东省临沂市人民医院、解放军陆军第七十二集团军医院、山东省枣庄市立医院、江西省大余县人民医院、江苏省泰兴市中医院、安徽省宿州市立医院、北京中国中医科学院广安门医院、安徽省郎溪县中医院、河南省南阳市中心医院、内蒙古医科大学附属人民医院)2017年全年急性阑尾炎住院治疗病例资料,通过统一汇总,对急性阑尾炎的诊断及治疗情况进行分析.结果 共纳入43家医疗中心8766例急性阑尾炎患者的病历资料,其中男性4711例(53.7%),中位年龄39岁,65岁以上患者958例(10.9%).有5677例(64.6%)接受1项及以上影像学检查,而有3099例(35.4%)未接受任何影像学检查.本组接受药物治疗1858例(21.2%),主要为联合硝基咪唑类药物的二联药物方案(1107例,59.8%),其次为非硝基咪唑类的单药方案(451例,24.4%),还有无硝基咪唑类二联方案(134例,7.2%)、联合硝基咪唑类的三联方案(116例,6.3%)和单用硝基咪唑类方案(39例,2.1%)以及无硝基咪唑类的三联方案(3例,0.2%).接受手术治疗者6908例(78.8%),其中4316例(62.5%)为腹腔镜阑尾切除术,2589例(37.5%)为开腹手术;16岁以下(392例)或老年(>65岁,258例)患者接受开腹手术的比例更高[分别占15.1%(392/2589)和10.0%(258/2589),与腹腔镜手术同年龄组的8.5%(367/4316)和8.0%(347/4316)相比,χ2=91.415,P<0.001;χ2=15.915,P<0.001].复杂性阑尾炎患者行开腹手术者多于腹腔镜手术[26.7%(692/2589)比15.6%(672/4316),χ2=125.726,P<0.001].腹腔镜与开腹手术的治愈率分别为100.0%和99.8%(2585/2589),差异无统计学意义(P=0.206);术后并发症发生率分别为4.5%(121/2589)与4.7%(196/4316),差异也无统计学意义(χ2=0.065,P=0.799),但腹腔镜手术组手术部位感染发生率更低(0.6%比1.7%,χ2=17.315,P<0.001)、住院时间更短[6(4~7)d比6(5~8)d,U=4384348.0,P<0.001];不过,住院花费更高(中位数12527元比9342元,U=2586809.0,P<0.001).结论 急性阑尾炎诊断仍以临床为主,辅以影像学检查.阑尾切除术仍是目前最有效的治疗方案,腹腔镜阑尾切除术已成为主要的治疗术式,但抗感染药物治疗疗效亦十分理想.
摘要:目的 研究β七叶皂苷(β-aescin)对脂多糖诱导的急性肺损伤(LPS-ALI)的保护作用及机制.方法 雄性C57BL/6小鼠60只随机分为正常对照组、β-aescin处理组、LPS-ALI模型组、β-aescin预处理的LPS-ALI组,每组15只.LPS-ALI模型组小鼠采用水合氯醛腹腔注射麻醉,按10 mg/kg剂量经口咽插管匀速将LPS注入肺中;β-aescin预处理的LPS-ALI组于LPS注射前0.5h按1 mg/kg剂量腹腔注射β-aescin;正常对照组、β-aescin处理组经腹腔注射等量PBS或β-aescin.各组动物在模型制备后0.5、2、4、6、8h,取1 mL腹主动脉血进行血气分析测定氧分压(PaO2)、二氧化碳分压(PaCO2);3d后多聚甲醛灌注,取材行冰冻切片,HE染色观察肺组织病理改变;3d后取1/3肺脏进行测定干/湿质量比(D/W),1/3肺脏采用商品化试剂盒检测髓过氧化物酶(M PO)及丙二醛(MDA)水平;其余肺组织采用实时荧光定量PCR检测促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-6的mRNA水平.结果 β-aescin可显著减轻LPS诱导的肺组织病变;增加PaO2而降低PaCO2;增加肺组织D/W比例;降低脂质过氧化相关指标MPO及MDA的水平,并下调TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA水平.结论 β-aescin通过抑制脂质过氧化反应及炎症反应显著减轻LPS-ALI后肺组织病变,并改善肺脏换气功能.
摘要:目的 观察骨桥蛋白(OPN)在慢性胰腺炎(CP)大鼠胰腺组织中的表达,探讨其与胰腺纤维化的关系.方法 20只雄性Wistar大鼠按数字表法随机分为对照组和CP模型组,对照组尾静脉注射无水乙醇及甘油,CP组采用单次尾静脉注射二氯二丁基锡(DBTC)构建CP模型.术后6周处死大鼠取胰腺组织,常规行病理学检查,采用Sirius-Red染色评估胰腺纤维化程度,免疫组织化学法及蛋白质印迹法检测大鼠胰腺组织OPN、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)的表达,分析OPN表达与纤维化程度的关系.结果 CP组死亡3只大鼠,成活的7只大鼠胰腺组织镜下见胰腺小叶间大量纤维组织增生,腺泡细胞空泡样变性坏死,小叶间大量炎症细胞浸润,胰管扩张.Sirius-Red染色显示CP组胰腺小叶间隙内大量鲜红色条索状及网状胶原纤维沉积,而对照组仅在血管及胰管周围有少许纤维沉积,CP组染色面积为(51±11)%,显著高于对照组的(9±4)%,差异有统计学意义(P<0.01).免疫组织化学染色显示,CP组7只大鼠中3只胰腺组织OPN强阳性表达,4只阳性表达;对照组10只大鼠中3只胰腺组织OPN弱阳性表达,7只阴性表达,CP组OPN的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(Z=-5.170,P<0.01),且其表达与Sirius-Red染色面积呈正相关(r=0.790,P<0.01).蛋白质印迹法结果显示,CP组OPN、α-SMA及Col Ⅰ表达量显著高于对照组(0.70 ±0.22比0.24±0.11,0.71±0.10比0.06±0.01,2.83±1.42比0.39±0.07),差异均有统计学意义(P值均<0.05).结论 尾静脉单次注射DBTC可成功构建CP大鼠模型,CP大鼠胰腺组织OPN表达明显增加,且与胰腺纤维化程度呈正相关.
[期刊论文] 朱俊 黄臻辉 朱建伟
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CSTPCD 北大核心
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摘要:缩宫素作为临床广泛应用的多肽药物,其液相合成工艺的建立是多肽药物领域划时代的成就.近年来,固相合成方法发展迅速,已经成为多肽合成的主要工艺过程.本文比较了多肽药物的液相和固相合成方法,概述了国内缩宫素的生产工艺、质量控制、稳定性等研究情况,分析讨论了多种纯化方法的优缺点,并展望了缩宫素生产工艺的发展方向.
摘要:目的 探讨分析紫杉醇脂质体联合卡铂对晚期难治性乳腺癌的治疗效果及其对病灶人表皮生长因子受体2(Her2)、上皮生长因子(EGF)表达的影响.方法 选择2014年2月至2016年8月在杭州市肿瘤医院接受治疗的104例晚期难治性乳腺癌患者作为研究对象,根据随机数字表法分为对照组和观察组,每组52例,对照组采用注射用紫杉醇联合卡铂治疗,观察组给予紫杉醇脂质体联合卡铂治疗,比较两组患者治疗效果、不良反应发生情况以及治疗前后病灶组织Her2和EGF表达水平.结果 治疗后,对照组有效率为65.4%,观察组有效率为75.0%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组患者病灶Her2和EGF表达量差异均无统计学意义(P>0.05),治疗后两组患者Her2和EGF表达量均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),但组间差异无统计学意义(P>0.05);观察组不良反应发生率显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 紫杉醇脂质体联合卡铂可有效治疗晚期难治性乳腺癌,降低病灶Her2、EGF表达水平,抑制肿瘤进展,且安全性较高,值得在临床广泛应用.
摘要:重组人白细胞介素-15(rhIL-15)具有显著的T细胞及NK细胞增殖和活化功能,在肿瘤免疫治疗、疫苗佐剂等领域的临床应用前景良好,已有多个临床试验在进行中.为提高rhIL-15的质量控制水平,须开发快速、精准的检测方法.本研究针对rhIL-15纯化过程中的氧化还原副产物,开发了基于反相液相色谱(RP-HPLC)及液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术的方法,通过分析色谱峰及相应的相对分子质量,以准确判断产品及其氧化还原状态.利用本方法能够分析rhIL-15生产工艺中的中间产品和终产品的质量,指导生产工艺的改进,提高rhIL-15产品的质量水平.
摘要:胰岛微循环障碍是糖尿病患者血糖波动的关键病理环节.中医学认为, 血糖为饮食所化之精微, 脾气散精功能失常则血糖等精微物质不能输布五脏六腑, 聚而为害, 阻于脉络, 并及于上下, 导致糖尿病及其并发症的发生发展.通过补脾虚、通脾络可促进脾气散精功能, 改善胰岛微循环障碍, 从而减少血糖波动.
摘要:内含肽是前体未成熟蛋白质中的一段具有自我剪接功能的序列,其活性受多种因素影响,如锌离子浓度的控制.为了在大肠埃希菌胞内实现天然断裂型内含肽Npu DnaE“自剪接”作用可控,表达了Npu DnaE内含肽C-末端和人IgG1抗体Fc段融合蛋白,及Npu DnaE内含肽N-末端和铜绿假单胞菌外毒素(PE)截短型融合蛋白,并加入浓度由1 mmol/L增加至2.5 mmol/L的锌离子.结果大肠埃希菌的生长没有受到影响,Fc蛋白和PE蛋白的单独表达没有受影响,而内含肽N-末端和C-末端发生剪接作用后,外显肽Fc和PE融合蛋白的表达量显著降低.上述结果表明,在大肠埃希菌表达富含半胱氨酸目的蛋白时添加锌离子,可以有效地抑制胞内Npu DnaE内含肽的“自剪接”作用,为拓展内含肽在生物药物生产中的应用提供了试验依据.
摘要:三江-中阿穆尔盆地跨中俄边界,该盆地面积较大,具有较好的油气资源潜力.结合测井及地震资料,本文根据岩芯和露头描述、粒度分析,开展了沉积研究.结果表明,盆地主要发育河流相、扇三角洲相、湖泊相与湖底扇相、海相沉积相类型.在此基础上,进一步研究了三江-中阿穆尔盆地早白垩世凡兰吟和欧特里夫-阿普第时期的沉积相,探讨了早白垩世贝里阿斯-阿尔必时期的沉积演化,盆地西南部(中国境内)自下而上发育滴道组、城子河组、穆棱组、东山组,盆地东北部(俄罗斯境内)自下而上发育戈林组、彼奥涅尔斯克组、皮万组、戈尔诺普罗托卡组和斯特列尔科沃组.本研究不仅为三江-中阿穆尔盆地进一步油气勘探部署提供了参考,也为中国境内黑龙江东部残留的三江盆地的原型盆地研究提供了重要依据.
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