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[期刊论文] 朱娟娟 陶美凤
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:以野生型阿维链霉茵NRRL8165为出发菌株,用PCR方法克隆孢子色素基因簇直系同源基因(whiEa)侧翼片段,并构建基因置换载体pHL643.将pilL643跨属接合转移进入阿维链霉菌NRRL8165,通过置换载体和染色体之间的同源双交换,对染色体上的whiEa基因簇进行置换,得到3株阿泊拉霉素抗性、硫链丝菌素敏感的重组菌株,均表现为孢子色素合成缺陷.通过Southern杂交分析,证明whiEa基因簇被置换.通过摇瓶发酵和HPLC检测,发现whiEa基因簇置换菌株所产阿维菌素产量明显提高,表明孢子色素与阿维菌素生物合成之间可能有竞争底物的现象....
[硕士论文] 朱娟娟
生物化学与分子生物学 华中农业大学 2008(学位年度)
摘要:阿维菌素(avermectins)是由阿维链霉菌(Streptomycesavermitilis)NRRL8165产生的一组具有相似结构的十六元大环内酯类抗生素,该抗生素驱虫活性极强,且抗寄生虫机制独特,与其它抗寄生虫药无交叉耐药性,在农业和畜牧业中得到广泛的应用。阿维链霉菌除了产阿维菌素,还可产生多种其他的次级代谢产物,如孢子色素、黑色素和寡霉素等。其中孢子色素属于芳香族聚酮类化合物,从聚酮途径分析来看,阿维菌素和孢子色素聚酮化合物的合成过程都需要乙酰辅酶A的参与。推测孢子色素与阿维菌素生物合成之间可能有竞争底物的现象。本文以野生型阿维链霉菌NRRL8165为出发菌株,用PCR方法克隆孢子色素基因簇直系同源基因(whiEa)侧翼片段,并构建基因置换载体pHL643。将pHL643跨属接合转移进入阿维链霉菌NRRL8165,通过同源重组,对染色体上的whiEa基因簇进行置换,得到3株阿泊拉霉素抗性、硫链丝菌素敏感的重组菌株(ZJ1-1,ZJ1-2和ZJ1-3),均表现为孢子色素合成缺陷。经摇瓶发酵和HPLC检测,发现whiEa基因簇置换菌株所产阿维菌素产量明显提高,表明孢子色素与阿维菌素生物合成之间是有一定的相互影响。 许多不同种类的抗生素及其它次级代谢物的生物合成都受磷酸盐调节。只有在磷酸盐限制性培养条件下,一些有价值的组分才能产生。近年研究证明,在变铅青链霉菌(Streptomyceslividans)中对环境中磷酸盐代谢的调节是由PhoR-PhoP双组分信号传导系统介导的,将其中断后,放线紫红素和十一烷灵菌红素超量表达。本文通过分析阿维链霉菌的基因序列,发现同样也存在着与phoR-phoP高度同源的基因。为了研究其功能,本文构建基因置换载体pHL645,将其跨属接合转移进入阿维链霉菌NRRL8165,筛选得到phoR-phoP基因置换菌株ZJ2。ZJ2在不加磷酸盐的YMS培养基上,菌体生长状态不良,但在加入一定量磷酸盐的YMS培养基上,菌体生长良好且菌落颜色加深。经摇瓶发酵和HPLC分析,发现ZJ2菌株只有在加入一定量的磷酸盐条件下发酵,才能合成阿维菌素,但产量相比野生型很低。
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