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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:[目的]确定F10基因表达对细胞生长的影响,明确F10基因的功能.[方法]构建F10基因的真核表达载体,转染重组pRc-CMV2-F10质粒于肺癌细胞系A549,筛选并获得稳定表达F10基因的细胞克隆A549-F10.通过MTT实验和流式细胞检测F10对细胞生长的影响;通过免疫组化检测细胞中增殖核扰原(PCNA)和细胞周期素D1(cyclin D1)的表达.[结果]转基因的G418抗性克隆能够检测到F10表达.MTT和流式结果显示F10有促进细胞增殖的作用.阳性克隆的细胞株中PCNA和cyclin D1相对较高水平的表达.[结论]F10基因通过上调PCNA和cyclin D1的表达,促进细胞的生长增殖....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的:研究F10基因对转录因子NF-κB、AP1活性的影响.方法:质脂体共转染F10基因和报道质粒NF-κB-Lue、AP1-Luc,通过测定荧光素酶的活性以确定F10基因对NF-κB和AP1转录活性的影响;提取各实验组不同时点细胞核蛋白,用电泳迁移率改变实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测AP1、NF-κB和DNA的结合活性.结果:F10基因瞬间转染A549细胞48 h NF-κB-Luc和AP1-Luc荧光素酶的活性较其对照组分别下降0.3和上升2倍、AP1和NF-κB与DNA的结合活性分别上升23%和下降49%.结论:F10基因上调AP1活性、下调NF-κB的活性....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的 研究与葡萄胎发病相关的新基因F10的功能.方法 培养A549细胞,实验分4组:正向F10基因、反向F10基因、空载体分别转染A549细胞组、空白细胞组.转染24 h提取细胞mRNA.用差异显示(DDPCR)方法筛选4组之间差异表达的基因.结果 获得差异表达的条带,二次PCR扩增后产物连接T载体并测序分析,结果与GenBank数据库中的序列进行同源比较,筛选出几个差异表达的基因,经荧光定量PCR证实annexin I(钙依赖、磷脂结合蛋白)、STATI(信号转导子与转录激活子)、BASP1在正向F10基因转染组高表达.IPLA2、DATF1在正向F10基因转染组低表达.结论 F10基因可能是与细胞增殖和凋亡相关的基因....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的 检测葡萄胎发病新基因F10在人多种细胞系中转录水平的表达,从中选取F10低表达的细胞株,构建F10稳定转染的表达系统,研究F10的功能.方法 荧光定量PCR检测F10在人A549、16HBE、Bel7402、HIC、HepG2、293、PC、MGC细胞株中的表达差异.采用电穿孔介导基因转染技术将已构建的pRc-CMV2-F10、pRc-CMV2转染A549细胞系.经G418筛选获得阳性单克隆细胞.细胞扩大培养后,荧光定量PCR技术鉴定F10基因在阳性克隆细胞中的表达.结果 新基因F10在人的8种细胞系中呈不同程度的表达,其中在Bel7402、PC、MGC中呈高表达,在HepG2、HIC中表达次之,293中表达量较低,16HBE、A549中表达量最低;稳定转染细胞株A549具有F10基因的整合和相应mRNA的高表达.结论 成功构建了稳定表达外源新基因F10的肺癌细胞系,为进一步研究F10基因的生物学功能提供了实验材料....
[专利] 发明专利 CN201810689183.0
摘要:本发明公开一种与癌细胞增殖调节有关的基因及其用途。具体地,本发明公开了包含SEQ ID NO.1的核苷酸序列或由SEQ ID NO:1的核苷酸序列组成的基因。本发明还公开了包含该基因的载体和细胞,以及该基因在制备治疗癌症或妊娠滋养细胞疾病的药物中的用途。
[硕士论文] 曹晓敏
神经病学 南方医科大学 2018(学位年度)
摘要:急性脑血管病已成为世界范围内导致残疾的最主要原因。在我国,其发生率、致残率、死亡率远高于西方发达国家。卒中后约21-38%的患者存在不同程度的失语,对患者社会功能的恢复造成严重影响。临床观察发现,卒中后失语患者常伴有认知功能受损,影像学研究显示语言功能和某些认知功能在解剖学上存在着重叠区域,二者有共同的大脑结构基础,此外,语言的正常表达亦离不开各项认知功能的辅助。重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)作为一种新型非创伤性皮质刺激方法,目前已被用于多种卒中并发症的治疗。目前利用rTMS治疗非流利性失语的研究较为多见,治疗方法也较为安全,但治疗过程中同时监测患者认知功能变化情况的研究较为少见。
  目的:
  本研究旨在通过rTMS联合言语语言治疗(speech and language therapy,SLT)治疗对缺血性脑梗死后亚急性期失语患者进行综合治疗,并评估患者的认知功能情况,分析失语症与认知功能障碍在发生机制、恢复机制及其之间的相关联系,为将来进一步治疗卒中后失语伴认知功能障碍提供新的思路。
  方法:
  本研究纳入17例卒中后亚急性期非流利性失语(Broca失语)的患者,随机分为治疗组(8例)和对照组(9例)。治疗组患者给予低频rTMS刺激右侧额下回后(inferior frontal gyrus,IFG)部,频率1HZ,持续20min,治疗后联合SLT治疗,每日1次,共10次。对照组给予同样参数的伪线圈假刺激治疗,治疗后联合SLT治疗,与治疗组相同。评估每组患者治疗前、治疗2周结束后、治疗后3个月时的汉语失语成套检查(ABC评分)、蒙特利尔评估量表(MoCA)、非语言性认知功能评估量表(NLCA)得分情况并进行分析。
  结果:
  治疗前两组患者ABC、MoCA、NLCA评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗2周后,两组ABC、MoCA、NLCA评分均有提高,但无论组间还是组内均无统计学差异(P>0.05),治疗3月后,两组ABC、MoCA、NLCA评分均较治疗前明显提高(P<0.05),且治疗组比对照组提高显著(P<0.05)。
  结论:
  1、rTMS治疗可改善卒中后亚急性期非流利性失语患者的语言功能;
  2、治疗后两组患者的语言功能和认知功能均有不同程度改善,治疗组的治疗效果明显优于对照组,说明rTMS促进语言功能的恢复的同时也能促进认知功能的改善。
摘要:目的:构建可受四环素诱导调控的高表达外源基因的真核表达体统A549 pTet-On细胞系.用于F10基因的功能研究.方法:将pTet-On质粒用脂质体介导法转染A549细胞, 利用G418的药物选择特性, 对转染的A549细胞进行压力筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化, 单克隆分别扩增后, 瞬时转染pTRE-luc(编码荧光素酶蛋白)质粒, Dox诱导表达后, 检测荧光素酶活性, 逐一筛选四环素调控高表达外源基因的A549 pTet-On细胞株.结果:成功构建了一株受Dox调控的高表达低背景的A549 pTet-On细胞株.结论:筛选的A549细胞为F10基因表达能被pTet-on诱导表达系统调控的细胞系, 为研究F10基因功能提供了理想的细胞模型.适合在此基础上对F10基因进行深入的研究....
[博士论文] 曹晓敏
人体解剖与组织胚胎学 南方医科大学 2008(学位年度)
摘要:葡萄胎是一种与妊娠有关的良性病变,发病率为1/100-1/500,部分葡萄胎可发展为侵蚀性葡萄胎,再进一步发展成绒癌。因此葡萄胎仍是一种严重危害育龄妇女生育健康及身心健康的重要疾病。葡萄胎的发生与恶性转化机制仍不明确, 目前有如下几方面的学说: 1、流行病学调查结果表明文化因素和葡萄胎的发生有统计学关联。提示较高的文化程度可以降低葡萄胎发病的可能性。 2、葡萄胎的遗传学说:葡萄胎的发生多是异常受精所致。 3、研究结果显示妊娠次数与葡萄胎的发病也是有相关关系,较多的妊娠次数可能是葡萄胎发病的一种危险因素。 4、另外多次接受刮、吸宫术也是葡萄胎发生的一项重要危险因素。 5、癌基因及肿瘤抑制基因和凋亡调节基因也参与葡萄胎的发生。 而目前的大量研究提示葡萄胎的基因组中可能存在遗传易感基因,迄今为止国内外还未获得葡萄胎的遗传易感基因。为明确葡萄胎的基因学发病机制,前期我们从基因克隆方面入手,在早孕的绒毛组织和正常的葡萄胎组织进行抑制性消减杂交,分离和鉴定出一种功能未明的在葡萄胎中高表达的基因F10,F10是一个新基因从未在任何组织或疾病中有过研究报道。 第一部分:F10基因转染细胞表达谱分析 F10基因是我们在探讨葡萄胎发病机理时发现的未知功能的新基因。 方法: 1、F10低表达细胞株的筛选:选取Be17402、HIC、HepG2、PC、A549、MGC、16HBE、293八种细胞,利用细胞免疫组化技术和荧光定量PCR技术筛选出F10低表达的细胞株; 2、F10基因转染其低表达的细胞株后观察其基因表达谱的变化:利用差异显示技术粗筛F10基因对细胞基因表达谱的影响,实验分四组:质粒pRc-CMV2/F10+、pRc-CMV2、pRc-CMV2/F10-分别瞬时转染A549细胞组及空白细胞对照组。 结果: 1、荧光定量PCR、细胞免疫组化结果表明:新基因F10在人的8种细胞中呈不同程度的表达。其中F10基因在MGC、PC、Be17402中高表达,在HepG2、HIC中表达次之,在293中表达量较低,在16HBE、A549中表达量最低。 2、质粒pRc-CMV2/F10+、pRc-CMV2、pRc-CMV2/F10-分别瞬时转染A549细胞组及空白细胞对照组四个实验组间差异显示的条带扩增后测序获得 小结: 1、利用细胞免疫组化技术和荧光定量PCR技术检测到F10在Be17402、HIC、HepG2、PC、A549、MGC、16HBE、293八种细胞中呈不同水平的表达。其中F10基因在MGC、PC、Be17402中高表达,在HepG2、HIC中表达次之,在293中表达量较低,在16HBE、A549中表达量最低。 2、利用差异显示技术粗筛F10基因转染对细胞基因表达谱的影响,获得的各组之间有统计学意义差异表达的5个基因:annexinI、IPLA2、DATF1、STAT1、BASP1,根据差异表达基因的功能提示F10基因参与细胞的增殖和凋亡过程。 第二部分:F10基因对转录因子活性影响 我们通过抑制性消减杂交和差异筛选法,克隆到一个新的在葡萄胎中表达上调的基因片断:F10ESTcDNA(Genbank登陆号:AB196290),利用细胞免疫组化和荧光定量PCR技术在Be17402、HIC、Hepc2、PC、A549、MGC、16HBE、293八种细胞中筛选出F10低表达的细胞株后利用差异显示技术粗筛F10基因转染对细胞基因表达谱的影响,根据获得差异表达基因的功能,提示F10基因可能与细胞的增殖和凋亡有关。 方法: 1、F10基因对重要的信号传导通路的影响:质粒pRc-CMV2/F10+(pRc-CMV2、pRc-CMV2/F10-)和报道系统AP1-Luc(NF-κB-Luc、pHSE-luc、pCRE-luc、pSRE-luc、pGRE-luc)共转染A549细胞,通过测定荧火虫荧光素酶活性,利用荧光素酶报道系统分析F10对细胞重要传导通路的作用。 2、EMSA实验检测AP1和NF-κB和DNA的结合活性。 结果: 1、pRc-CMV2/F10+组、pRc-CMV2组与pRc-CMV2/F10-组细胞在F10和API-Luc质粒共转染24h即可检测荧光素酶的活性,并逐渐增高至转染后48h,pRc-CMV2/F10+组较pRc-CMV2组与pRc-CMV2/F10-组之间的荧光素酶活性高且差别有统计学意义,P=0.000。pRc-CMV2组与pRc-CMV2/F10-组荧光素酶活性无统计学意义,转染72h后各组荧光素酶活性开始下降,各组之间无统计学意义。 2、pRc-CMV2/F10+组、pRc-CMV2组与pRc-CMV2/F10-组细胞在F10和NF-κB-Luc质粒共转染24h即可检测荧光素酶的活性,48小时达到最高,pRc-CMV2/F10+组较其它二组荧光素酶活性低且差别有统计学意义,P=0.000。 3、pRc-CMV2/F10+组、pRc-CMV2组与pRc-CMV2/F10一组细胞在F10分别和pHSE一1uc、pCRE-luc、pSRE-luc、pGRE-luc质粒共转染后的荧光素酶活性差异无统计学意义。 小结: 1、利用质粒pRc-CMV2/F10+(pRc-CMV2、pRc-CMV2/F10-)分别和报道系统AP1-Luc共转染A549细胞,通过测定荧火虫荧光素酶活性,利用荧光素酶报道系统分析F10对细胞重要传导通路的作用。 第三部分:F10基因对细胞增殖和细胞周期的影响 综合前二部分的研究,提示F10基因参与促进细胞增殖、抑制细胞凋亡的过程,导致细胞生长发育异常。 方法: 1、F10对细胞增殖的影响:转染pRc-CMV2/F10和pRc-CMV2质粒于肺癌细胞系A549,通过MTT实验检测二组细胞生长增殖情况; 2、F10对细胞周期的影响:转染pRc-CMV2/F10和pRc-CMV2质粒于肺癌细胞系A549,通过流式细胞技术检测二组细胞各个细胞周期的变化情况; 3、利用免疫组化方法检测上述二组细胞中增殖核抗原(PCNA)和细胞周期素D1(cyclinD1)的表达变化。 结果: 1、根据酶标仪连续6天测定的570nm波长吸光值绘制出肺癌细胞A549的生长曲线,在保证培养条件、接种细胞量、观察时间一致的情况下,二组细胞之间总体生长趋势差异有统计学意义(P=0.000)。pRc-CMV2/F10组其促进细胞增殖作用比对照组明显。 2、流式细胞技术检测结果:pRc/CMV2/F10基因转染细胞48小时较对照组细胞中G2/M期细胞比例升高1.2倍、S期升高2.1倍。二组相比差异有显著性意义,P<0.05。 3、免疫组化显示:PCNA在A549/F10组细胞中强阳性表达,在A549/空载体组细胞中呈中度阳性表达。 小结: 1、转染pRc-CMV2-F10和pRc-CMV2质粒于肺癌细胞系A549,通过MTT实验得出二组细胞连续6天的总体生长趋势差异有显著性意义(P=0.000)。pRc-CMV2/F10+组其促进细胞增殖作用较对照组明显。提示F10基因有促进细胞增殖的作用。 2、转染pRc-CMV2-F10和pRc-CMV2质粒于肺癌细胞系A549,采用流式细胞技术检测F10对细胞生长周期的影响,pRc/cMV2/F10基因转染细胞48小时较对照组细胞中G2/M期细胞比例升高1.2倍,S期升高2.1倍。 3、利用免疫组化方法检测细胞中增殖核抗原(PCNA)和细胞周期素D1(eyelinD1)的表达变化。 第四部分:稳定转染F10基因A549细胞株的构建 研究探讨基因的功能利用基因转导技术将外源基因转入某一细胞,通过观察细胞生物学行为的变化来认识基因的功能,这是目前使用最广泛、技术最成熟的基因功能研究方法,而建立稳定表达外源基因的细胞模型是这一研究不可或缺的关键一步。 方法: F10基因真核细胞稳定表达系统构建与鉴定: 1.质粒pRc-CMV2/F10和pRc/CMV2提取、鉴定后转染A549细胞系。用G418筛选并扩大培养,建立阳性单克隆细胞株。 2.荧光定量PCR技术鉴定获得的阳性克隆细胞株。 结果: 1.质粒pRc-CMV2/F10、pRc-CMV2转染A549细胞系后细胞经过大约三个月的筛选,得到2株稳定表达pRc/cMV2-F10基因的A549细胞和1株稳定表达pRc/CMV2基因的A549细胞。 2.荧光定量PCR结果表明:pRc-CMV2/F10+细胞株F10表达水平较pRc-CMV2高,结果有统计学意义。P<0.05。 小结: 1.质粒pRc-CMV2/F10和pRc/CMV2提取和鉴定后转染A549细胞系。经过G418大约三个月的筛选,得到2株稳定表达pRc/CMV2-F10+基因的A549细胞和1株稳定表达pRc/CMV2基因A549细胞。 2.阳性单克隆细胞株经过荧光定量PCR鉴定结果表明:pRc-CMV2/F10细胞株F10表达水平较pRc-CMV2细胞株高。
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