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摘要:目的 探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的保护作用及其免疫调节机制.方法 设置实验组1和2,实验组1小鼠从第1周开始高脂饮食喂养,分为预防组和对照组,第1周时分别腹腔注射SEA及PBS,每周1次,共4次;实验组2小鼠高脂饮食喂养至第14周,分为治疗组和对照组,第14周时分别注射SEA及PBS,每周1次,共4次.第22周处死小鼠,观察SEA对动脉粥样硬化的干预作用以及小鼠体内的细胞因子和调节性T细胞亚群CD4+CD25+FoxP3+T细胞水平的变化.结果 给予SEA后,与相应对照组比较,预防组和治疗组小鼠血清总胆固醇含量均显著降低,外周血TNF-α、IL-10水平均显著下降;预防组小鼠动脉粥样硬化斑块面积被显著抑制,但治疗组无明显变化.第22周时,预防组外周血CD4+CD25+FoxP3+T细胞占CD4+T细胞比例为(4.4±0.9)%,与对照组[(2.6±0.3)%]相比,差异有统计学意义(P< 0.05);但治疗组细胞比例给予SEA前后差异无统计学意义(P<0.05).结论 SEA能降低ApoE-/-小鼠血清总胆固醇水平;预防性给予SEA具有抑制动脉粥样硬化作用,其主要机制是在疾病初始阶段抑制炎症因子产生Treg细胞增殖....
摘要:目的 探讨日本血吸虫抗独特型抗体NP30对急性血吸虫病的免疫治疗作用.方法 根据L9(34)正交表设计动物实验,日本血吸虫尾蚴感染C57BL/6小鼠后注射抗独特型抗体NP30,观察不同治疗方案各组小鼠的存活时间并计算不同时间段的生存率,取小鼠肝脏石蜡切片,HE染色,测量小鼠单个虫卵肉芽肿的直径及面积.结果 各实验组小鼠的生存中位数为45~78 d,其中第4组生存中位数为71 d,比同样感染40条尾蚴的对照组2(53 d)延长了33.96%.Cox回归分析显示小鼠存活时间主要与尾蚴感染水平、抗体注射途径有关(P均<0.05).各实验组小鼠单个虫卵肉芽肿平均直径为179.07~226.86 μm,平均面积为(32.11~51.37)×10μm2;对照组各组小鼠单个虫卵肉芽肿平均直径为205.89~239.86μm,平均面积为(44.61~57.24)×103μm2.极差分析及方差分析均显示抗独特型抗体NP30的注射方式和注射剂量是影响虫卵肉芽肿平均直径和而积的主效应因素.NP30的最佳免疫治疗方案为感染尾蚴28 d后,以每鼠每只20μg的剂最连续3次肌肉注射.结论 抗独特型抗体NP30可改善血吸虫感染小鼠的生存状况,降低血吸虫对宿主造成的免疫病理损害,具有治疗急性血吸虫病的潜能....
摘要:目的 从苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bti)以色列亚种中获得cry4B、cry11A和cyt1A 3种主要杀蚊幼虫蛋白的基因,并进行克隆和原核表达.方法 根据GenBank上3种基因的已知序列设计合成引物,应用PCR技术扩增目的 基因,克隆人Puc19质粒,阳性克隆质粒经酶切和测序鉴定.将测序鉴定的3种蛋白基因克隆入原核表达载体(pET32c)进行原核表达.结果 PCR扩增获得特异性的基因片段,重组质粒经酶切后获得预计大小的基因片段,并测序鉴定.序列结果与已知序列一致.原核表达载体经ITPG诱导,获得预计大小的目的 蛋白.结论 成功克隆了苏云金芽孢杆菌以色列亚种的3个主要杀蚊幼虫蛋白的基因,并进行原核表达....
摘要:目的 探讨体内电穿孔技术增强日本血吸虫核酸疫苗的免疫保护效果.方法 分别大量制备质粒pcDNA3.1-SjC23、pcDNA3.1-SjCTPI、pcDNA3.1-(CDR3)6和重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI与NP30.上述3种质粒DNA以等量混合后即为鸡尾酒式DNA疫苗,3种蛋白以等量混合后即为鸡尾酒式蛋白疫苗.70只BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,每组14只.A组为自然感染组;B组(电脉冲空质粒对照组)每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl pcDNA3.1,每次注射时辅以体内电穿孔;C组(电脉冲空质粒+混合蛋白对照组)空质粒免疫及体内电穿孔同B组,但于第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗+100μl福氏完全佐剂(FCA);D组(电脉冲混合DNA组)每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗,每次免疫时辅以体内电穿孔;E组(电脉冲混合DNA+混合蛋白组)混合DNA免疫及体内电穿孔同D组,但于第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗+100μl FCA.DNA免疫组末次免疫后4周,蛋白加强组末次免疫后2周,所有小鼠同时经腹部皮肤感染(40±1)条尾蚴.攻击感染后42d剖杀小鼠,计数成虫及肝脏虫卵数.首次免疫前2d及感染前2d分别经尾静脉采血,分离血清检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1及IgG2a,并取小鼠脾脏制备单个脾细胞,检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平.结果 C、D组和E组的减虫率分别为18.09%、45.00%和57.09%,D组和E组的减虫率均显著高于C组(P均<0.01),且E组的减虫率高于D组(P<0.05);C、D组和E组的减卵率分别为12.49%、50.88%和59.26%,D组和E组的减卵率均显著高于C组(P均<0.01),且E组的减卵率高于D组(P<0.05).C、D、E 3组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体,抗体亚类IgG2a/IgG1比值分别为0.394、3.518、0.914.D、E 2组小鼠IL-2、IFN-γ含量较对照组均有明显升高,IL-4则无明显差异.结论 体内电穿孔技术可显著提高日本血吸虫核酸疫苗的免疫保护作用....
摘要:目的 探讨日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用以增强免疫保护作用的效果.方法 分别大量制备质粒DNA:pcDNA3.1-SjC23、pcDNA3.1-SjCTPI、pcDNA3.1-(CDR3)6和重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30.pcDNA3.1-SjC23、pcDNA3.1-SjCTPI、pcDNA3.1-(CDR3)6等量混合后即为鸡尾酒式的混合DNA疫苗,重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30等量混合后即为鸡尾酒式的混合蛋白疫苗.70只BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,每组14只.A组为自然感染组;B组(空质粒对照组)每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100 μl pcDNA3.1;C组(空质粒+混合蛋白对照组)每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100 μl pcDNA3.1,第9周每鼠经背部皮下多点注射100 μl混合蛋白疫苗+100 μl福氏完全佐剂(FCA);D组(混合DNA组)每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100 μl混合DNA疫苗;E组(混合DNA+混合蛋白组)每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100 μl混合DNA疫苗,第9周每鼠经背部皮下多点注射100 μl混合蛋白疫苗+100 μl FCA.DNA免疫组末次免疫后4周,蛋白加强组末次免疫后2周,所有小鼠同时经腹部皮肤感染(40±1)条尾蚴.攻击感染后42 d剖杀小鼠,计数成虫及肝脏虫卵数.首次免疫前2 d及感染前2 d分别经尾静脉采血,分离血清检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1及IgG2a,并取小鼠脾脏制备单个脾细胞,检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平.结果 C、D组和E组的减虫率分别为17.70%、32.88%和45.35%,D组和E组的减虫率均显著高于C组(P均<0.01),且E组的减虫率显著高于D组(P<0.01);C、D组和E组的减卵率分别为9.39%、36.20%和48.54%,D组和E组的减卵率均显著高于C组(P均<0.01),且E组的减虫率也显著高于D组(P<0.05).C、D、E 3组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体,抗体亚类IgG2a/IgG1比值分别为0.525、1.829、0.712.D、E两组小鼠IL-2、IFN-γ含量较空质粒对照组均有明显升高,IL-4则无明显差异.结论 混合DNA疫苗和混合蛋白疫苗联合应用具有一定的正协同作用,混合蛋白疫苗可显著增强混合DNA疫苗的免疫保护作用....
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