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摘要:已知鸡基因组中含有禽内源性反转录病毒ALVE1序列,而ALVE1在鸡基因组中的上游和下游区域位置在参考基因组中并未成功鉴定.本研究成功鉴定出ALVE1所在鸡基因组中的上、下游序列,并通过提取CEF细胞和DF-1细胞基因组反过来验证了ALVE1的位置信息.与参考基因组不同的是,我们发现ALVE1序列包含3'LTR序列,在鸡1号染色体上的插入位置为chr1:65,995,534~65,993,540.本研究不仅提供了ALVE1在鸡基因组中的完整信息,也为进一步研究ALVE1的功能奠定了基础....
[专利] 发明专利 CN201810043624.X
扬州大学 2018-07-06
摘要:本发明涉及一种表达Cas9基因的转基因斑马鱼及其构建方法和应用。所述的表达Cas9基因的转基因斑马鱼,是在斑马鱼Mitfα基因中插入了Cas9基因。本发明利用CRISPR/Cas9转基因技术在色素基因Mitfα定点靶向构建了可表达Cas9基因的转基因斑马鱼,并利用色素消退作为筛选纯合敲除品系的标志。通过使用该转基因斑马鱼对Tyr基因和ZFERV基因进行编辑,证实了该转基因斑马鱼在基因敲除中更加有效,并且在F0代即可获得纯合敲除个体。Cas9转基因斑马鱼与传统的CRISPR/Cas9技术在斑马鱼中的运用相比,具有更高的基因编辑效率;为大规模的基因筛选和疾病模型的建立提供了一个简单有效的工具。
[专利] 发明专利 CN201711090160.X
扬州大学 2018-03-23
摘要:本发明涉及抗癌药物研究领域,提供了一种新的非同源重组抑制剂筛选模型和筛选方法。本发明所述的非同源重组抑制剂的筛选模型,是含有SV40转录终止子片段的斑马鱼胚胎。本发明先将SV40转录终止子片段注射进斑马鱼早期胚胎,后选用非同源重组抑制剂Scr7处理注射了SV40转录终止子片段的斑马鱼早期胚胎,致死亡率显著降低。本发明提供了新兴抗癌药物——非同源重组抑制剂筛选的新模型,对癌症治疗具有重要意义。
[硕士论文] 戴振清
特种经济动物饲养 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:内源性反转录病毒(Endogenous retrovirus,ERV)据称源于进化中感染生物体的反转录病毒,是生物体基因组组成的一部分,如人内源性反转录病毒约占基因组序列的5~8%,大部分不表达。传统观点认为内源性反转录病毒属于垃圾DNA(Junk DNA)序列,或具有感染性。内源性反转录病毒对早期胚胎发育和胚胎干细胞具有重要作用。本研究选择内源性反转录病毒—鸡内源性白血病病毒(Avian leukosis virus subgroupE,ALVE)作为研究对象,基于目前已经鉴定出鸡内源性白血病病毒能产生反义长非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA),并发现反义lncRNA lnc-ALVE1-AS1与细胞天然免疫有关联。本论文主要围绕长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1在鸡个体发育早期的表达规律、多态性分析及与鸡抗病表型关联性进行展开,初步阐明长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1与鸡抗病表型的关联。
  1、禽内源性反转录病毒ALVE1在鸡基因组完整序列鉴定
  已知鸡基因组中含有禽内源性反转录病毒ALVE1序列,而ALVE1在鸡基因组中的上游和下游区域位置在参考基因组中并未成功鉴定。本研究成功鉴定出ALVE1所在鸡基因组中的上、下游序列,并通过提取CEF细胞和DF-1细胞基因组反向验证ALVE1的位置信息。与参考基因组不同的是,我们发现ALVE1序列包含3'LTR序列,在鸡1号染色体上的插入位置为chr1:65,995,534~65,993,540。本研究不仅提供了ALVE1在鸡基因组中的完整信息,也为进一步研究ALVE1的功能奠定了基础。
  2、长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1在CEF细胞和鸡个体发育早期表达规律的研究
  鉴于长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1可能与先天性免疫及以及抗病毒有关,本研究通过检测长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1在CEF细胞和鸡个体发育早期表达规律,发现禽白血病病毒抗性品系鸡G1中长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1的表达量要高于禽白血病病毒易感品系鸡G3,并且早期表达量较高,这初步验证了长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1可能与先天性免疫及个体抗病毒能力相关。
  3、长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1多态性分析及与鸡抗病表型关联性研究
  通过比对禽白血病病毒抗性品系鸡G1和禽白血病病毒易感品系鸡G3的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1序列,我们发现禽白血病病毒抗性品系鸡G1的序列相比易感品系鸡G3的序列,含有一个3碱基GCG插入突变,推测可能与禽白血病抗性有关。本研究选取如皋黄鸡、海南文昌鸡和河北麻城蛋鸡等3个地方鸡种,扩增其长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1序列,并与抗性品系鸡G1和易感品系鸡G3进行比对,发现如皋黄鸡和海南文昌鸡的测序序列与抗性品系鸡G1相一致,同样含有一个3碱基GCG插入突变,而河北麻城蛋鸡的序列则与易感品系鸡G3相一致。因此推测,如皋黄鸡和海南文昌鸡可能同样具有对禽白血病具有抗性。进一步通过制备3个地方鸡种CEF细胞进行细胞攻毒实验进行验证,发现结果与预期相一致,所以易感品系鸡G1所含有的3碱基GCG插入突变可能与禽白血病抗性相关。
  综上所述,长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1可能与禽白血病病毒抗性有关,在个体发育早期免疫器官中表达量高,感染病毒后显著下调。抗性品系鸡G1中含有一个3碱基GCG插入突变,可能与禽白血病抗性相关。
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