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[专利] 发明专利 CN201910304998.7
东北农业大学 2019-08-06
摘要:本发明公开了一种用于检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒血清抗体的通用型间接ELISA试剂盒及其应用。本发明建立了一种基于VP0重组蛋白检测1型和3型DHAV血清抗体的通用型间接ELISA检测方法,该方法是以原核表达的1型DHAV VP0重组蛋白为检测抗原,经Western blotting和间接ELSIA方法证实该VP0重组蛋白即可以与1型DHAV血清抗体发生特异性反应,也能与3型DHAV血清抗体发生特异性反应,因此以1型DHAV VP0重组蛋白为检测抗原进行间接ELISA检测可判断被检鸭血清是否含有1型和3型鸭甲型肝炎病毒的抗体及其抗体水平,本发明的提出为有效防治鸭甲型肝炎提供了新的快速检测手段。
[硕士论文] 戚海惠
兽医学;基础兽医学 东北农业大学 2019(学位年度)
摘要:为了研究鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)VP1蛋白的优势抗原区,试验根据DHAV-3 VP1基因序列设计4对特异性表达引物,用PCR获得VP1-a~d基因片段,并在pET-30a(+)/Rosetta(DE3) pLysS系统中进行原核表达;经IPTG诱导重组蛋白获得表达,用Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白;同时以DHAV-3病毒为免疫原制备鼠抗DHAV-3多克隆抗体,通过I-ELISA和Western-blot初步鉴定.结果表明:pET-30a-VP1-a、pET-30a-VP1-b、pET-30a-VP1-c和pET-30a-VP1-d与鼠抗DHAV-3多克隆抗体都发生反应,抗原量相同的情况下VP1-c和VP1-d段显色较VP1-a和VP1-b深,说明这两段反应性相对较强;4种截短蛋白与鸭抗DHAV-3阳性血清进行反应,只有pET-30a-VP1-c显色.说明VP1-c免疫原性较强,DHAV-3 VP1蛋白的90~ 175 aa为其优势抗原区....
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