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[期刊论文] 惠靖雯 倪焰 栾洁 高大庆
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CSTPCD 北大核心
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摘要:目的 比较高毒力肺炎克雷伯菌与经典肺炎克雷伯茵的毒力特性,探讨不同毒力的肺炎克雷伯茵对视网膜色素上皮细胞炎症相关因子表达的影响.方法 收集8株高毒力肺炎克雷伯菌及8株经典肺炎克雷伯菌,分为高毒力肺炎克雷伯菌组和经典肺炎克雷伯茵组,通过黏液丝实验、PCR扩增rmpA基因检测、细菌抗血清杀伤实验及细菌抗吞噬实验比较两组肺炎克雷伯菌的毒力特性;两组细菌分别感染视网膜色素上皮细胞,通过ELISA检测视网膜色素上皮细胞内单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平.结果 高毒力肺炎克雷伯菌组细菌的高黏液表型、rmpA基因表达水平、抗血清杀伤能力及抗巨噬细胞吞噬能力均显著高于经典肺炎克雷伯菌组;两组细菌分别感染视网膜色素上皮细胞后,高毒力肺炎克雷伯菌组MCP-1和IL-6含量分别为(1177.38±227.17)ng·L-1、(118.63±40.39)ng·L-1,经典肺炎克雷伯菌组分别为(669.50±62.01)ng· L-1、(53.75±14.04) ng·L-1;视网膜色素上皮细胞MCP-1和IL-6表达水平高毒力肺炎克雷伯菌组分别是经典肺炎克雷伯菌组的1.76倍和2.20倍,差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 相对于经典肺炎克雷伯菌,高毒力肺炎克雷伯菌具有高黏液表型、抗血清杀伤能力及抗巨噬细胞吞噬能力强的特性,且感染视网膜色素上皮细胞后,可引起更严重的炎症反应....
[硕士论文] 惠靖雯
临床医学;眼科学 东南大学 2017(学位年度)
摘要:目的:
  眼内炎是一种凶险的感染性致盲性眼后段疾病,常常造成严重的视力损害,内源性眼内炎是一种眼外感染后经过血源性播散引起的凶险的感染性致盲性眼病,起病急骤,一旦病原菌侵入眼内,迅速破坏眼内组织,症状严重,虽然总体发病率低,但常造成严重的视力损害。细菌或真菌通过血液循环播散进入眼内,引起脉络膜、视网膜、玻璃体等眼内组织的炎症,其中细菌性眼内炎居多,患病的危险因素主要包括糖尿病、免疫抑制、静脉导管滞留、长期使用抗生素等。在临床上,眼科医师掌握内源性眼内炎的病原分布及其致病特点对于疾病的诊断、治疗及预后改善至关重要。内源性眼内炎致病菌谱近年来不断发生着变化,新兴出现高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKP)引起的眼内炎,虽然最常见的症状亦是眼部肿胀、充血、视力模糊的突然发作,但其致病力明显高于经典肺炎克雷伯菌(classic Klebsiella pneumonia,cKP),更难治愈,视力恢复较差,预后不良,本研究将高毒力肺炎克雷伯菌与经典肺炎克雷伯杆菌的特性进行比较,探讨高毒力肺炎克雷伯菌毒力的相关特性及其对视网膜色素上皮细胞炎症相关因子表达的影响。
  方法:
  收集8株高毒力肺炎克雷伯菌及8株经典肺炎克雷伯菌,分成高毒力肺炎克雷伯菌组和经典肺炎克雷伯菌组,首先分别检测其高黏性特征、基因型特性、抗血清杀伤及抗巨噬细胞吞噬能力;再通过酶联免疫吸附实验检测细菌侵袭视网膜色素上皮细胞后炎症细胞因子的表达水平,具体如下:
  1.细菌毒力检测:
  ①粘液丝实验:将受试菌接种于5%羊血琼脂平板,于37℃孵育过夜,用细菌接种环向上挑起菌落,观察记录挑起的粘液丝长度;
  ②基因rmpA(regulator ofmucoid phenotype gene A)检测:提取细菌基因组DNA,按25uL反应体系和反应流程进行PCR反应扩增rmpA基因,检测两组细菌的基因表达情况;
  ③细菌抗血清实验:培养至对数后期的细菌107CFU/L,与血清按比例1∶1混合培养2h,将混合培养液梯度稀释检测细菌的存活数量,计算细菌的存活率;
  ④细菌抗吞噬细胞吞噬实验:将培养至对数后期的细菌107CFU/L,按感染复数(multiplicity of infection,MOI)100∶1比例与鼠源巨噬细胞Raw264.7混合孵育1h,检测细菌存活数量,计算巨噬细胞内细菌的存活率。
  2.酶联免疫吸附实验:两组细菌分别感染视网膜色素上皮细胞10h,通过酶联免疫吸附实验检测上清液中单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)两种炎症细胞因子产生的水平。
  结果:
  1.细菌毒力检测:
  ①高毒力肺炎克雷伯菌组在粘液丝实验中均表现为阳性,而经典肺炎克雷伯菌组均表现为阴性;
  ②rmpA基因检测结果显示:高毒力肺炎克雷伯菌组均有rmpA基因543BP的表达,而经典肺炎克雷伯菌组没有该基因的表达;
  ③细菌抗血清实验结果显示:高毒力肺炎克雷伯菌组的存活率(18.2%)明显高于经典肺炎克雷伯菌组的存活率(5.3%),且差异有统计学意义(t=1.872,P<0.05);
  ④细菌抗巨噬细胞吞噬实验结果显示:巨噬细胞胞内高毒力肺炎克雷伯菌组的细菌存活率(1.1%)明显低于经典肺炎克雷伯菌组(7.5%),存在统计学差异(t=5.434,P<0.05)。
  2.酶联免疫吸附实验:高毒力肺炎克雷伯菌组感染视网膜色素上皮细胞后,细胞上清液中MCP-1(1177pg/mL)、IL-6(119pg/mL)均高表达,而经典肺炎克雷伯菌组MCP-1(670pg/mL)、IL-6(54pg/mL)则低表达,RPE细胞被高毒力肺炎克雷伯菌侵袭后分泌的MCP-1和IL-6的量分别是被经典肺炎克雷伯菌侵袭后的1.76倍和2.20倍,差异有统计学意义(tMCP-1=5.670,tIL-6=3.968,P均<0.05)。
  结论:
  相对于经典肺炎克雷伯菌,高毒力肺炎克雷伯菌的毒力更强,感染视网膜色素上皮细胞后,可引起更严重的炎症反应。
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