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摘要:以鹅脯肉、鸡脯肉、鸭脯肉和猪背膘为原料,选取植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)和戊糖片球菌(Pediococcuspentosaceus)作为发酵剂(菌种配比为1∶1∶1),开发发酵枣肠.通过单因素和L9(34)正交实验,确定了在添加鹅脯肉40%、猪背膘10%的基础上,最优工艺参数为:发酵剂添加量107 cfu/g,发酵时间20 h,发酵温度20℃,鸡脯肉和鸭脯肉添加比例2∶1(添加量50%).发酵枣肠成熟过程中,水分含量由66.03%降至24.76%,非蛋白氮(Non-protein nitrogen,NPN)含量由0.13%升至0.35%,游离氨基酸含量(Free amino acids,FAA)由842.00 mg/kg升至1878.33 mg/kg.由此开发具有良好品质和风味的禽肉发酵枣肠,同时缩短了产品的成熟时间....
[硕士论文] 徐娇
生物学;遗传学 南京师范大学 2018(学位年度)
摘要:黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)作为模式生物在研究先天免疫机制方面起到了重要作用,而Toll通路是果蝇中最重要的先天免疫通路之一,能够通过一系列信号传导抵抗革兰氏阳性菌的入侵。最近的许多研究表明,microRNA(miRNA)在果蝇免疫信号传递过程中发挥着重要的调控作用。miRNA是一类广泛存在于动植物基因组中长约21-24nt的小非编码RNA,通过结合靶基因mRNA的特定位点,抑制mRNA的翻译或诱导mRNA的降解,介导多种重要生理活动与过程,在转录后水平调控基因的表达。在本实验室前期的工作中,通过高通量测序的筛选,发现miR-964在果蝇受革兰氏阳性菌刺激后发生了显著的下调,据此猜测miR-964可能作为果蝇Toll免疫响应中的重要调控因子。因此,本论文采用实验生物学和生物信息学有机结合的方法,通过体内、体外实验证明果蝇miR-964能够直接靶向抗菌肽基因Drosomycin(Drs)来调控Toll信号通路。本论文所取得的主要实验研究结果如下:
  1.利用革兰氏阳性菌粪肠球菌(Enterococcus faecalis,E.faecalis)分别感染miR-964高表达果蝇、野生型果蝇(w1118)和miR-964基因敲除果蝇,通过生存率分析实验发现miR-964高表达果蝇的生存率显著低于野生型果蝇和miR-964基因敲除果蝇的生存率。
  2.通过实时荧光定量(qRT-PCR)实验检测野生型果蝇(w1118)在感染革兰氏阳性菌藤黄微球菌(Micrococcus luteus,M.luteus)后miR-964基因的表达,并发现感染后24h、48h和72h均有显著上升;而miR-964高表达果蝇在感染M.luteus24h后Drs表达量显著下降,miR-964敲除果蝇在感染M.luteus12h和24h后Drs表达量显著上升。通过构建miR-964表达回复果蝇,并经qRT-PCR和GFP绿色荧光蛋白检测发现抗菌肽基因Drs的表达量得到了回复。实验证明,果蝇miR-964能够响应革兰氏阳性菌的刺激,并影响Toll通路下游抗菌肽Drs的表达。
  3.为了进一步研究果蝇miR-964影响Toll通路的分子机制,利用TargetScan、miRanda和PITA软件对miR-964的靶基因进行了预测并取交集,获取了两个可能受miR-964调控的Toll信号通路中的相关基因—Spz和Drs。
  4.通过双荧光素酶报告基因系统对miR-964靶基因进行体外验证,证明Drs是miR-964的直接靶基因。
  5.在果蝇体内利用qRT-PCR和Western Blotting的方法再次验证了miR-964和Drs基因的靶标关系,进一步证实miR-964是直接靶向抗菌肽基因Drs的。
  本研究揭示miR-964能通过直接靶向基因Drs的3'UTR调控抗菌肽Drs的表达来对Toll信号通路进行负反馈调节,从而影响果蝇先天性免疫的作用机制,为研究miRNA在先天免疫中的功能提供了新的证据和重要的参考。
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