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摘要:设计小鼠 Txt5基因的特异性引物,将小鼠 cDNA 作为模板,用 PCR 扩增出 mTxt5编码区,并加入 HA标签序列.将这一片段插入 pMD -18T 载体,再亚克隆至 pAdtrack cmv 穿梭载体上.线性化后,转化 BJ5183感受态细胞,在 BJ5183中发生同源重组获得 pAd Txt5质粒.pAd Txt5线性化后转染293A 细胞,包装得到含 Txt5基因的病毒.将病毒溶液感染大鼠原代心肌细胞,一段时间后观察绿色荧光,然后通过 RT PCR 和免疫印迹法检测 HA 标签蛋白的表达.结果表明成功构建小鼠 Txt5腺病毒表达载体并实现在大鼠原代心肌细胞中的表达....
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