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摘要:血清Ⅰ型马立克病病毒(MDV-1)编码26个病毒miRNA,前期研究发现这些miRNA可能在鸡马立克病肿瘤发生中发挥重要调控作用.为研究MDV-1编码的miRNA基因miR-M31-3p在病毒感染及致病过程中的作用机制,本研究利用杂交PCR方法构建宿主cDNA文库,对与miR-M31-3p互作的宿主候选靶基因进行初步筛选,结果获得了49个候选靶基因.通过双荧光素酶报告试验证实miR-M31-3p与鸡GNPAT、TCF12、FIGNL1、CNDP2、MGST1和CD99L2的3'-UTR在体外存在相互作用.进一步通过qRT-PCR分析显示:过表达miR-M31-3p的CEF中,上述6个候选基因mRNA转录水平均显著下调;当MDV感染CEF时,除CD99L2之外的5个候选靶基因的转录水平均显著下调,而在miR-M31-3p基因缺失的MDV株感染的CEF中这5个靶基因均正常转录.上述结果证实CNDP2、GNPAT、TCF12、FIGNL1和MGST1为与miR-M31-3p互作的宿主靶基因.本研究为进一步揭示miR-M31-3p调控MDV感染宿主的致病机制奠定了重要基础....
摘要:马立克病病毒(MDV)是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一,是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型.目前已报道MDV可编码数十种miRNA,其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物,由于miR-155与人类多种肿瘤性疾病密切相关,这意味着miR-M4-Sp可能在MDV的致瘤过程中扮演重要角色.本研究旨在构建miR-M4-5p的宿主靶基因文库并进行初步鉴定.提取鸡胚成纤维细胞(CEF)总RNA,反转录合成cDNA,用hybrid-PCR扩增候选靶基因片段连接到pMD19-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞后挑选单克隆进行PCR鉴定及测序,通过BLAST比对分析,共获得88个宿主候选靶基因序列.优先选择miRNA结合靶点位于mRNA 3'-UTR且与miR-M4-5p种子序列(2~7 nt)完全互补配对的29个候选靶基因,构建报告基因载体进行双荧光素酶报告试验,通过三轮双荧光素酶报告试验最终初步鉴定5个宿主靶基因:PRICK-LE1、COLA、BCA T1、ANTXR1和TEC PR1,为进一步揭示miR-M4-5p的分子调控机制奠定了重要基础....
摘要:任何企业在发展的过程中要能够在该行业中一枝独秀,就需要一个能代表企业灵魂的品牌建设,所以越来越多的企业开始注重平面设计对品牌的影响力,可以说平面设计是连接消费者与品牌建设的关键纽带,本文详细介绍了平面设计对于品牌建设的重要性....
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