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湖南师范大学
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摘要:以红鲫为研究材料,采用DAPI荧光染料对脱膜的红鲫胚胎进行染色,在荧光体视显微镜下观察红鲫胚胎早期卵裂到囊胚发育的过程.结果表明,该染色方法操作便捷,能更清晰的观察到胚胎发育的外形.值得一提的是:该方法较光学显微镜观察能清晰的观察到核DNA在细胞中的定位,如囊胚期能观察到早期卵裂细胞正进行频繁的有丝分裂等.该方法的获得为研究鱼类早期胚胎发育及相关细胞分裂特征提供了有意义的途径....
[硕士论文] 张纯
现当代文学 湖南师范大学 2003(学位年度)
摘要:如何评价余华小说及其在90年代发生的转型现象,一直是文学评论界以及普通读者感兴趣的话题.该文基于文本解读,试图从"交流"的角度为余华小说转型的内在逻辑提供一种新的分析.这里所探讨的交流问题,主要指小说中人物的交流,兼及小说与读者的交流.上篇主要分析了余华对"交流障碍"的偏好及其表现形式;下篇则重在揭示"交流的可能性"是如何一步步进入余华小说,成为影响小说面貌的重要元素的.经过分析研究,我们比较清晰地看到,至少在交流这一维度,余华小说的转型,是在坚持作家特点的基础上由单一走向丰富的,而不是一种陡转或断裂.小说所获得的可读性,也是各种文学因素作用的综合结果,并不与作家立场的转变直接相关.希望这种从"交流"角度展开的分析,能够既深入到创作的主题,又论及到艺术表现形式,较之种种传统分析方法,能更贴近文学创作的实际.
[硕士论文] 张纯
发育生物学 湖南师范大学 2005(学位年度)
摘要:  雌核发育二倍体鲤鲫第一代(G1)产生的二倍体卵子经紫外线灭活的散鳞镜鲤精子诱导,无需染色体加倍处理,发育成雌核发育二倍体鲤鲫第二代(G2);G1产生的二倍体卵子与雄性异源四倍体鲫鲤(AT)产生的二倍体精子结合,形成新型两性可育的异源四倍体鲫鲤(G1×AT)。本文对G2和新四倍体(G1×AT)的体细胞染色体数目、生殖细胞染色体行为及性腺结构、外形、生长速度等生物学特征进行了比较研究,另外,还对G2形成G3的受精细胞学过程及G3的胚胎染色体制片进行了观察。结果表明:   1)在6~12个月G2中,没有发现达性成熟的个体,组织学切片结果表明G2性腺处于卵原细胞增殖阶段,与G1的性腺发育对照,G2仍然保持母本G1性腺发育迟缓的特征。对6~8个月G2性腺染色体制片进行观察,结果表明G2的生殖细胞的染色体没有减数分裂过程中出现的二价体的形成,只有有丝分裂的迹象,中期染色体数目以2n=100为主,也有4n=200,甚至有接近8n(380)的分裂相。说明在当时的生殖细胞中存在2n、4n等多种类型的生殖细胞,其中4n的生殖细胞经正常的减数分裂后可产生二倍体卵子。结合性腺结构及完整的染色体分布形态,说明G2的生殖细胞染色体加倍处于性腺发育早期阶段,即减数分裂前的有丝分裂增殖阶段,一个2n的性原细胞通过一次核内复制,形成4n的卵原细胞后再进行正常的减数分裂,可形成二倍体配子;1)-ii新四倍体(G1×AT)体细胞染色体数目为4n=200。   2)G3胚胎染色体制片结果表明,部分胚胎染色体数趋向于100条,为G2产生的二倍体卵子经雌核发育而来;部分胚胎染色体数趋于150条,为G2产生的二倍体卵子与散鳞镜鲤产生的单倍体精子杂合发育而来。但总的来说都说明G2继续产生不减半的二倍体卵子。对G3的受精细胞学研究结果表明:受精激活2分钟后,卵子的第二次减数分裂已经进入中期;受精激活8分钟后,卵子进入第二次减数分裂后期,染色体受纺锤丝牵引平均分配到两极,表现正常的减数分裂过程;受精激活9分钟后,卵子进入第二次减数分裂末期,明显可见第二极体外排的趋势;且在另一个7分钟受精激活卵切片上发现明显的的卵子第二极体外排现象,从而说明G2产生的卵子第二次减数分裂正常,排出第二极体,从侧面佐证了减数分裂前核内复制是G2产生不减半配子的细胞学原因。
摘要:二倍体雌核发育第1代(G1)产生的二倍体卵子经紫外线灭活的散鳞镜鲤精子诱导,无需染色体加倍处理,发育成二倍体雌核发育第2代(G2);G1产生的二倍体卵子与雄性异源四倍体鲫鲤(AT)产生的二倍体精子结合,形成新型两性可育的异源四倍体鲫鲤(G1×AT).对G2和新四倍体(G1×AT)的体细胞染色体数目、生殖细胞染色体行为及性腺结构、外形、生长速度等生物学特征进行了研究.结果表明:G2体细胞染色体数目为2n=100.在6~12月龄G2中,没有发现性成熟的个体,组织学切片结果表明,G2性腺处于卵原细胞增殖阶段,与1龄G1的性腺发育相似,性腺发育迟缓.对6~8个月龄G2性腺染色体制片进行观察,结果表明,G2生殖细胞的染色体没有二价体的形成,只有有丝分裂的迹象,其有丝分裂中期不但有2n=100的染色体分裂相,还有4n=200的染色体分裂相,甚至有接近8 n(380)的分裂相,说明1龄G2的性腺中存在2n、4n等多种类型的生殖细胞,其中4n的生殖细胞经正常的减数分裂后可产生二倍体卵子.核内复制(pre-meiotic endoreduplication)学说可以较好地解释这种不减半配子产生的现象.新四倍体(G1×AT)体细胞染色体数目为4n=200,雌雄新四倍体(G1×AT)具有正常的性腺发育,在繁殖季节从1龄G1×AT的雌、雄个体中可分别挤出成熟的卵子和精液.对6~8个月龄新四倍体(G1×AT)的性腺染色体制片观察表明,精母细胞染色体进行频繁的减数分裂,同源染色体两两配对形成100个二价体,没有观察到单价体、三价体、四价体,表明它们能形成稳定的二倍体配子.这种两性可育、生长较快的新四倍体(G1×AT)丰富了已有四倍体的种类....
[期刊论文] 张纯 刘少军 李涛 刘筠
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:红鲫属于鲤科、鲤亚科、鲫属,染色体数目为2n= 100,核型为22m +34sm +22st +22t;鲤属于鲤科、鲤亚科、鲤属,染色体数目为2n= 100,核型为22m+ 34sin+ 22st+ 22t.已有研究表明,红鲫(♀)×鲤(♂)杂交第一代(F1)和第二代(F2)为二倍体,F2能产生染色体数不减数的配子,在第三代(F3)中形成四倍体鱼.通对F1和F3进行胚胎染色体制片,在染色体水平上探讨红鲫和鲤远缘杂交的多倍体发生途径及F2产生不减数配子的潜能.结果表明,F1混合胚胎都为二倍性胚胎,没有发现单倍性和多倍性胚胎,但F3混合胚胎中则有染色体数为100,150,200甚至300的染色体分裂相,推测F2生殖细胞发生了一次或多次染色体数加倍,产生了二倍性和更高倍性的配子,它们结合形成了不同倍性的F3胚胎.实验证明双亲基因组大小及核型相似的鲫鲤远缘杂交第一代不发生多倍化,但获得的二倍体杂交后代能产生不减数配子,在F3中产生多倍体鱼....
[期刊论文] 张纯 刘少军 伍艳红 刘筠
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:以产生单倍体卵子的二倍体雌性红鲫为对照,对远缘杂交起源的二倍体雌核发育鲫鲤早期卵巢组织中的生殖细胞进行了流式细胞术分析,在此基础上结合组织学切片方法和染色体制片,对相应的卵巢组织细胞学观察和生殖细胞减数分裂特征进行了探讨.结果显示,雌核发育二倍体鲫鲤卵母细胞的DNA含量呈现两个主要的峰值,检测样本中的2号峰值显示的DNA含量是二倍体红鲫卵母细胞的1倍,代表减数分裂前染色体数未加倍的细胞群,其减数分裂Ⅰ前期分裂相呈现同源染色体部分配对,该细胞群在组织学切片上呈现空泡化等败育现象;另外,检测样本中的3号峰值显示的DNA含量是二倍体红鲫卵母细胞的2倍,代表减数分裂前染色体数已加倍的细胞群,其减数分裂Ⅰ前期分裂相呈现染色体数目加倍的完整的染色体配对,该细胞群由于染色体数加倍,可以越过杂种鱼的异源染色体之间的减数分裂配对障碍,正常发育为体积不断增大的初级卵母细胞,为产生后续的染色体数不减半的二倍体卵子奠定基础.该结果丰富了不减数配子的发生机制研究,在鱼类遗传育种方面具有重要意义....
摘要:利用雄性四倍体鲫鲤与雌性二倍体红色双尾金鱼交配,制备了1种新型三倍体鲫鱼,并对Ⅰ龄三倍体鲫鱼染色体数目和组型、性腺指数和性腺结构、外形、生长速度等生物学特征进行了系统研究.结果表明:这种三倍体鲫鱼染色体数目为3n=150,核型公式为33m+51sm+33st+33t;在繁殖季节,三倍体鲫鱼卵巢和精巢指数明显低于作为对照的红鲫卵巢和精巢指数;组织学切片表明三倍体鲫鱼的卵巢和精巢不能产生成熟的卵子和精子,证明它们是不育的.三倍体鲫鱼体色为青灰色,单尾,具有一些介于其父母本--异源四倍体鲫鲤和红色双尾金鱼之间的外形特征,如具有1对肉眼不易观察到的短须,侧线鳞式为31-6/7,背鳍为18,体高/体长之比为0.5,比湘云鲫的体高/体长之比(0.41)有明显的增加.经过约8个月的饲养,该三倍体鲫鱼平均重量为350 g,最大个体达550 g.在Ⅰ龄鱼中,雌性三倍体鲫鱼的个体生长速度快于雄性个体.与三倍体湘云鲫相比,该三倍体鲫鱼保留了生长速度快、不育等优点,同时新添了体高/体长比值更高、肉质更甜美的特点,为1种有推广前途的新型三倍体鲫鱼....
摘要:Dmc1(disrupted meiotic cDNA)基因是一个在减数分裂前期Ⅰ表达的特异基因,其产物是减数分裂前期Ⅰ同源染色体配对所必需的.根据据酵母菌、小鼠以及人的DMC1中保守的氨基酸基序设计简并引物,PCR扩增克隆获得了第四代雌核发育二倍体鲫鲤( G4) Dmc1基因部分cDNA序列.在此基础上,通过RACE获得了G4Dmc1基因全长cDNA序列,长度为1369 bp,其中开放阅读框为1029 bp,编码含342个氨基酸的蛋白质.同时,系统进化分析表明,在进化过程中Dmc1基因在鱼类中保持着高度保守的进化特征.RT-PCR结果表明,Dmc1基因只在G4性腺中表达,在其他组织中不表达.通过实时荧光定量PCR,对Dmc1基因在G4和普通鲤鱼的早期卵巢的表达进行分析,发现G4表达比鲤鱼高.由此可见,雌核发育二倍体鲫鲤Dmc1基因也是减数分裂特异基因,而且其高表达暗示雌核发育二倍体鲫鲤具有正常的减数分裂过程并且其早期性腺存在着多倍体卵原细胞....
摘要:在优化RAPD(随机扩增多态性DNA)检测条件基础上,从134个随机引物中筛选出53个扩增较好且多态性强的引物,对异源四倍体鲫鲤第1代(G1)、第2代(G2)人工诱导的雌核发育二倍体后代群体的DNA多态性及分子标记进行了分析.结果显示,53个随机引物在G1群体和G2群体中检测到的位点数分别为541、511,其中多态性位点数分别为70、52,多态位点比例分别为12.94%、10.18%.两个群体的平均遗传距离分别为0.0732、0.0464.研究表明,经过连续2代人工雌核发育,G2的遗传多样性明显减少,种质进一步纯化.还从53个随机引物的扩增谱带中找到了2个引物(S50、S223)的特异扩增谱带,可以作为第1、2代雌核发育群体间的分子遗传标记.由计算机软件程序构建的分支系统树清晰地反映了两个雌核发育群体及其个体间的相互关系....
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CSTPCD 北大核心 SCI
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摘要:用精巢细胞直接制片法观察了异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫和二倍体红鲫、湘江野鲤精母细胞染色体第一次减数分裂中期配对情况;作为对照,观察了上述四种鱼肾细胞的有丝分裂中期染色体.在精母细胞第一次减数分裂中,异源四倍体鲫鲤同源染色体两两配对,形成100个二价体,没有观察到单价体、三价体和四价体;三倍体湘云鲫精母细胞形成50个二价体和50个单价体;红鲫和湘江野鲤精母细胞分别形成50个二价体.肾细胞检测表明异源四倍体的染色体数目为4n=200;湘云鲫为3n=150;红鲫和湘江野鲤分别为2n=100.减数分裂时染色体分布情况与肾细胞染色体检测结果相吻合.具有四套染色体的异源四倍体鲫鲤在减数分裂中只形成100个二价体,而不形成25个四价体或其它形式,为产生稳定一致的二倍体配子提供了重要的遗传保障,也为人工培育的异源四倍体鲫鲤群体能够世世代代自身繁衍下去提供了重要的遗传学证据.三倍体湘云鲫在减数分裂过程中出现二价体、单价体共存,同源染色体在配对和分离中出现紊乱,导致非整倍体生殖细胞的产生,为湘云鲫的不育性提供了染色体水平上的证据[动物学报 51(1):89-94,2005]....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST SA
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摘要:以异源四倍体鲫鲤为父本,二倍体金鱼为母本通过倍间杂交形成三倍体鲫鱼.对三倍体鲫鱼早期胚胎发育过程进行了观察.三倍体鲫鱼成熟卵子呈黄色,圆形,有粘性,卵径为1.3~1.4 mm.水温为(20±1)℃情况下,卵子受精后1 h,卵裂开始.受精后在~3 h时间段内进行卵裂.受精后3.50 h逐渐进入早、中、晚囊胚期,受精后10 h进入原肠期,受精后15.50 h进入神经胚期,19.0 h后器官开始形成.受精后63~75 h,仔鱼孵化出膜.另外,对三倍体鲫鱼受精卵进行切片观察,结果表明:三倍体囊胚期细胞分裂旺盛,原肠期细胞表现出正常的细胞分裂、细胞变形和迁移行为.结合三倍体鲫鱼胚胎外观发育观察,说明三倍体鱼具有正常的早期胚胎发育过程,为三倍体鱼的大规模生产提供了胚胎发育的生物学依据....
摘要:分别用遗传失活的散鳞镜鲤(Cyprinus carpio L.)、团头鲂(Megalobrama amblycephala)精子诱导日本白鲫(Carassiuscuvieri)进行雌核发育.未经冷休克处理,用UV照射过的镜鲤的精子(其最佳UV照射剂量为4 200 mJ/cm2)与日本白鲫卵子受精获得(32.4±3.3)%雌核发育单倍体和(0.7±0.3)%杂交二倍体,而照射过的团头鲂精子(其最佳UV照射剂量为3 600mJ/cm2)与日本白鲫卵子受精得到了(33.8±1.4)%雌核发育单倍体和(0.5-±0.3)%杂交二倍体.日本白鲫卵子分别经灭活的镜鲤、团头鲂的精子激活(精子经各自最佳UV剂量处理),施以冷休克处理(受精后2min,0-4℃,40min),其孵化率分别为(27.8±2.1)%和(29.4±3.3)%,发育到摄食期,其正常的雌核发育二倍体鱼苗分别为(15.7±3.4)%和(23.6±4.1)%,在镜鲤实验组中,其正常的雌核发育二倍体鱼苗占孵化鱼苗总数的56%,这比团头鲂实验组中正常雌核发育二倍体鱼苗的比率(达到80%)低,结果表明诱导日本白鲫雌核发育,与母本遗传关系远的团头鲂精子较镜鲤的更有效.从染色体数目、外形特征和性腺结构等方面证实雌核发育后代的生物学特性.雌核发育日本白鲫全为雌性,这表明其雌性是同配XX型.雌核发育日本白鲫在生产上将有着潜在的价值,如比普通日本白鲫长得更快,抗病能力强等.所有的雌核发育日本白鲫的染色体数目都是100,而所有的团头鲂与日本白鲫的杂交后代都是三倍体(3n=124),新三倍体鱼在鱼类养殖和理论研究中将存在潜在的价值....
摘要:通过繁殖实践和组织学切片,研究了一龄金鱼的性成熟及生殖力情况.结果表明,繁殖季节的一龄金鱼性腺已发育成熟,雌性个体中卵巢已发育到了第Ⅳ期,主要由Ⅳ时相卵母细胞组成,雄性个体精巢已发育到第Ⅴ期,精细小管中已布满成熟的精子;在自然和人工环境下,一龄金鱼能自行产卵受精并产生存活后代,证明一龄金鱼能够达到性成熟,在此2种条件下并都能够自行繁殖后代.另外,对金鱼产生的单倍体卵子的质量和直径分别与红鲫产生的单倍体卵子及四倍体鲫鲤产生的二倍体卵子的质量和直径进行比较,结果表明,卵子的质量及直径与卵子的倍性存在正向相关关系....
摘要:用特异于HMG-box保守区的兼并引物扩增了异源四倍体鲫鲤及其原始亲本(红鲫和鲤鱼)的Sox基因. 异源四倍体鲫鲤的扩增产物共有4条带,大小分别约为200,600,900和 1900?bp,而其原始亲本的扩增产物只有3条带,且在雌雄个体中未发现性别特异扩增带. 回收雄性四倍体鱼600?bp扩增带,经亚克隆及测序分析得到一个新的编码71个氨基酸残基的基因. 该基因与虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)、蟾蜍(Xenopus laevis)、鲤鱼(Cyprinus carpio)等的Sox9基因相似性达97%,据此命名为Atsox9a. 通过计算机分析和RT-PCR方法确定该基因含有内含子,并获得其内含子的序列和剪切位点,此内含子剪切位点在进化上是保守的. Atsox9a对于研究异源四倍体鲫鲤性别决定和分化机制及脊椎动物性别进化具有重要的理论意义....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:通过精巢染色体制片观察金鱼的生殖细胞染色体数,结合流式细胞仪测定成熟精子DNA含量,探讨了金鱼生殖细胞发生过程中染色体特征及产生的精子的倍性.结果表明,金鱼初级精母细胞大部分行正常减数分裂,形成50个二价体,另外还发现17.0%分裂相的二价体数呈现不同程度的加倍现象,观察到了二价体数为100、150、200、250、300,甚至远远超过300的分裂相,与鲫鲤远缘杂交导致生殖细胞染色体数加倍一致,不一样的是金鱼稳定产生DNA含量减半的精子.结果表明,近缘杂交和远缘杂交都可以导致生殖细胞染色体数加倍,但是否能产生染色体数加倍的功能性配子与杂交亲本亲缘关系的远近有关....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST SA
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摘要:雌核发育二倍体鲫鲤第二代(G2)产生的卵子经紫外线灭活的散鳞镜鲤精子的诱导,无需染色体加倍处理,可以发育成为雌核发育鲫鲤第三代(G3).描述了G3的早期胚胎发育过程.雌核发育鲫鲤的卵为粘性卵,色素含量高,在(19±1)℃水温下,受精后70 min第一次卵裂,原肠晚期统计受精率为37.36%,约89 h后,受精卵开始脱膜,约106.5 h后,胚体完全脱膜,最终统计孵化率为26.11%....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA
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摘要:鲫鱼在分类上属鲤科,鲤亚科,鲫属。其分布广泛,在亚欧大陆上有两个种,分别为鲫种和黑鲫种。鲫种有两个亚种及多个变种:鲫鱼亚种和银鲫亚种以及红鲫、白鲫、金鱼等多个变种。鲫鱼亚种和银鲫亚种在养殖和消费在淡水鱼中占有较大比例。当前养殖水域及天然水域受到污染的程度越来越高,鲫鱼亚种和银鲫亚种栖息和繁殖区在缩小,加上过量捕捞等原因,它们的数目在减少。因此,创制新型优质鲫鱼很有必要。...
摘要:对异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫和二倍体红鲫血液指标(红细胞数、血红蛋白值、红细胞脆性、比容)、细胞大小(红细胞及细胞核、白细胞、血栓细胞的长、短径值)及它们的显微结构进行了比较研究,并观察了四倍体鲫鲤血细胞亚显微结构.结果表明:在不同倍性鱼中,四倍体、三倍体、二倍体红细胞在数目、脆性、比容方面随倍性的降低而依次升高;血红蛋白无显著差异;在细胞大小上,四倍体、三倍体、二倍体的红细胞及细胞核、嗜中性粒细胞、单核细胞表现出4∶3∶2的比例关系;在红细胞的形态方面,异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫、二倍体红鲫存在明显差异.同时发现随着倍性的升高红细胞的短径/长径比值减小.在异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫、二倍体红鲫外周血中,均可观察到红细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞,未发现嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞.但三倍体湘云鲫、二倍体红鲫的嗜中性粒细胞仅有Ⅱ,Ⅲ两种类型,未见含深紫红色颗粒的Ⅰ型嗜中性粒细胞.对不同倍性鱼在血液细胞中出现的共同性和差异性进行了讨论分析....
摘要:The flow cytometer was used to compare the DNA content in the blood cells and sperm in the new type of tetraploid (G1×4n) and in red crucian carp used as the control. The new type of tetraploid (G1×4n) was produced by mating the diploid female gynogenetic progeny (first generation,G1) of the tetraploid hybrid of red crucain carp × common carp, with the male of the tetraploid hybrid. Chromosome spreads from the kidney tissue in the new type of tetraploid were also examined. The results from the flow cytometer indicated that the mean DNA content of the diploid sperm produced by the new type of tetraploid was twice that of the haploid sperm generated by the diploid red crucian carp, and the mean DNA content of the blood cells in the tetraploid was twice that in red crucian carp. Examination of chromosome spreads from the kidney tissue also indicated that the examined samples of the G1×4n were tetraploids with 200 chromosomes, which was in agreement with the results of the DNA content measurements from the sperm and the blood cells. The present study proved that the new type of tetraploids was able to produce normal diploid sperm, which fertilized diploid eggs from the new type of tetraploid to produce viable offspring. The flow cytometer was proved to be one of the accurate, secure and simple methods to distinguish the different ploidy fish in blood cells and sperm by measuring their DNA content [Acta Zoologica Sinica 51(2):360-364,2005]....
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