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摘要:哺乳动物胚胎体外培养体系影响着早期胚胎的发育潜能,在目前模拟体内输卵管及子宫的低氧环境的培养系统中,活性氧(reactive oxygen species,ROS)被认为是影响胚胎发育的一个重要因素.本实验探究了ROS在小鼠(Mus musculus)体外发育2细胞阻滞胚胎中对线粒体相关机能的影响.本研究使用2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2'-Azobis (2-methylpropionamidine) dihydrochloride,AAPH)处理昆明白小鼠体外受精卵,通过荧光探针检测处理前后与线粒体活性相关的线粒体膜电位、线粒体ROS(mtROS)及线粒体分布状态的变化,并利用qRT-PCR检测ROS相关基因、线粒体转录因子A(mitochondrialtranscription factorA,TFAM) mRNA的表达量及mtDNA的拷贝数.研究结果显示,使用1.0 mmol/L浓度的AAPH分别处理的胚胎,具有较高的阻滞率(66.16%)和较低的损伤率(24 h畸形率9.09%,48 h死亡率10.39%),ROS染色实验结果显示,AAPH处理能够使胚胎内胞质ROS水平明显升高,所检测的ROS相关基因mRNA表达量升高.1.0 mmol/L处理后二细胞期胚胎线粒体膜电位及mtROS水平明显高于对照组,mtDNA的拷贝数增加,qRT-PCR结果显示,处理组TFAM基因的表达量明显高于对照组.以上研究表明,AAPH处理引起的氧化应激反应及发育阻滞的胚胎中,线粒体活性升高,线粒体数目增加,线粒体转录因子A表达增强,表明线粒体参与调节细胞内ROS的动态平衡.本研究初步探究了ROS与线粒体相关功能变化的关系,为揭示卵母细胞成熟机制和优化哺乳动物胚胎体外培养体系提供了参考.
摘要:脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞,在组织器官修复方面具有潜在应用前景.体外培养条件下脂肪间充质干细胞增殖活性和分化潜能的维持对其应用研究具有重要意义.该研究通过大鼠腹股沟部脂肪组织分离获得了脂肪间充质干细胞,并对其细胞生长曲线、细胞群体倍增时间、细胞克隆形成等进行了检测,从而筛选出细胞生长最适的血清及浓度;再进一步对筛选条件下培养的大鼠脂肪间充质干细胞进行了免疫荧光检测、流式细胞术分析和诱导分化能力鉴定.结果显示,大鼠脂肪间充质干细胞在20%血清浓度下生长状态最好,增殖较快,细胞群体倍增时间较短,细胞克隆形成率可达(27.33±0.58)%.分离的大鼠脂肪间充质干细胞中CD44、CD90、CD106的阳性率分别为99.12%、99.59%、65.81%,CD34分子呈阴性.诱导后,细胞经油红O、碱性磷酸酶、阿新兰染色,结果表明,细胞具有向脂肪、骨、软骨方向分化的潜能.以上结果表明,成功建立了大鼠脂肪间充质干细胞系.
摘要:该研究探讨了人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)提取物对人肺腺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响及其作用机制.利用超声破碎法制备hUC-MSCs提取物,并处理经链球菌溶血素O(streptolysin O,SLO)通透的A549细胞.采用MTT法、平板克隆形成实验检测hUC-MSCs提取物对A549细胞增殖的影响,Transwell实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR检测促凋亡基因胱冬肽酶-3(caspase-3)、胱冬肽酶-9(caspase-9),抑癌基因RUNX3(runt-related transcription factor 3)和存活蛋白基因(survivin)的rnRNA水平,亚硫酸氢盐测序检测R UNX3启动子区CpG岛甲基化水平.结果发现,经hUC-MSCs提取物处理后,A549细胞的增殖、迁移能力均显著降低,caspase-3、caspase-9和RUNX3 mRNA水平显著升高,survivin mRNA的表达量显著降低,UNX3启动子区CpG岛显著去甲基化.该研究结果表明,hUC-MSCs提取物可能通过逆转RUNX3启动子区甲基化状态恢复其表达,并通过提高caspase-3、caspase-9表达及降低survivin的表达来抑制A549的增殖及迁移能力.
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