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摘要:目的 研究miRNA-182在肝细胞癌细胞系及组织中的表达,验证miRNA-182与叉头框转录因子2(FOXF2)的靶向调控关系,并探究miRNA-182是否通过靶向调控FOXF2促进肝细胞癌的侵袭转移和血管形成.方法 收集郑州大学附属肿瘤医院2017年1月至10月入院行手术切除的原发性肝细胞癌患者41例.实时荧光定量PCR检测miRNA-182在癌组织和癌旁组织中的表达.Transwell小室转移实验和Boyden侵袭实验检测过表达miRNA-182和FOXF2对肝细胞癌侵袭转移能力的影响.体外血管形成实验检测miRNA-182和FOXF2对肝细胞癌血管形成能力的影响.双荧光素酶报告基因验证miRNA-182与FOXF2的靶向调控关系.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测转染miRNA-182和miRNA-182 scramble后FOXF2的mRNA和蛋白质表达.统计学分析采用t检验.结果 肝细胞癌组织中miRNA-182的表达高于癌旁组织(5.41±1.72比1.80±0.76),差异有统计学意义(t=-5.764,P<0.01).Transwell小室转移实验和Boyden侵袭实验结果显示,miRNA-182过表达组穿过小室底膜的细胞数较miRNA-182 scramble组增多(85.65±4.86比31.43±2.41,55.34±5.66比19.13±2.12),而过表达miRNA-182+FOXF2组穿过小室底膜的细胞数低于单纯过表达miRNA-182组(11.21±3.16比31.43±2.41,8.67±2.83比19.13±2.12),差异均有统计学意义(t=15.110、9.220、5.443、4.410,P均<0.05).野生型FOXF2与miRNA-182共转染组荧光素酶的活性低于miRNA-182 scramble组(0.43±0.10比0.97±0.05),差异有统计学意义(t=8.042,P=0.012),而突变型FOXF2与miRNA-182共转染组和miRNA-182 scramble组荧光素酶活性强度比较(0.97±0.47比1.06±0.52)差异无统计学意义(t=0.934,P=0.402).体外血管形成实验显示,miRNA-182过表达组成管数高于miRNA-182 scramble组(14.27±1.77比5.91±1.42),且同时转染FOXF2过表达质粒后,成管能力得到恢复(1.78±0.71比14.27±1.77),差异均有统计学意义(t=6.530、4.570,P均<0.05).蛋白质印迹法结果显示,miRNA-182转染组FOXF2表达水平低于miRNA-182 scramble组(1.01±0.13比4.32±0.46),差异有统计学意义(t=7.420,P=0.012).实时荧光定量PCR结果显示,miRNA-182转染组FOXF2 mRNA表达水平低于miRNA-182 scramble组(0.591±0.284比1.534±0.345),差异有统计学意义(t=3.465,P=0.014).结论 miRNA-182可通过靶向调控FOXF2促进肝细胞癌细胞的侵袭转移....
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