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[期刊论文] 张晓慧 韩榕
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CSTPCD 北大核心
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摘要:使用两种瞬时表达方法研究Profilin-1(PRF1)的亚细胞定位,并比较了2种瞬时表达体系在亚细胞定位研究中的优缺点.利用拟南芥幼叶作为材料,提取叶片的RNA,采用特异性引物RT-PCR的方法克隆PRF1基因,连接到pCAMBIA1300-GFP的改造载体上,成功的构建pCAMBIA1300-GFP-PRF1的表达载体.然后分别利用PEG转化拟南芥原生质体、农杆菌浸染烟草叶片两种技术进行了瞬时表达,并在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的表达.研究结果表明,将PRF1基因导入拟南芥的原生质体和烟草表皮细胞后,融合蛋白绿色荧光均能被观察到,PRF1基因与GFP融合蛋白的产物在烟草表皮细胞中主要定位在细胞质和外周细胞器中,在拟南芥的原生质体中的细胞核和细胞质中都有定位.两种不同的瞬时表达体系中PRF1蛋白的定位出现了不同,这可能与同源或异源表达的植物的特性相关....
摘要:本文通过对苏东坡被贬之后的''''享乐''''生活的描述,突出表现苏东坡的不拘小节以及他独特的性格魅力。...
[硕士论文] 张晓慧
生物学 山西师范大学 2017(学位年度)
摘要:自从臭氧层空洞不断扩大以来,达到地表的UV-B辐照不断加强,不单在两极地区,在别的地区也检测到太阳光辐照中的UV-B辐射强度的加强。这种伴随着太阳光辐射的UV-B照射对生物的发育、形态以及生理方面产生了多方面的影响,因此研究UV-B辐照对生物的影响是有较深远的科学意义和应用前景。
  Profilin(前纤维蛋白)是一种由3个α螺旋和7个β折叠构成的小分子量单体肌动蛋白结合蛋白,Profilin与多聚脯氨酸相互作用,在肌动蛋白的聚合上扮演着重要的作用。Profilin有多种异构体,它们在发育过程中表现出了组织和器官特异的表达模式。在拟南芥中有高度而分散的多基因家族编码了5种不同Profilin的异构体,其中Profilin-1(PRF1)在拟南芥各个发育过程的不同组织中均表现出了很高的表达。
  为了对拟南芥Profilin-1响应UV-B(2.0 KJ·m-2·d-1)辐射的机制进行研究,我们构建了带有GFP标签的融合表达基因,然后将融合基因转化到拟南芥中,最后成功获得了含有GFP:PRF1融合蛋白的转基因植株。在筛选转基因植株同时,用了两种瞬时表达的方法对GFP:PRF1进行了研究,一方面验证了融合蛋白的载体是否构建成功,另一方面间接的获得了PRF1在两种瞬时表达体系中的亚细胞定位,结果表明,导入拟南芥原生质体和烟草表皮细胞的GFP:PRF1基因经瞬时表达其携带有GFP标签的融合蛋白的荧光能被检测到,说明了融合蛋白载体构建成功,近一步也观测到PRF1在烟草表皮细胞中主要定位在细胞质和外周细胞器中,在拟南芥的原生质体中主要定位在细胞核和细胞质中,然而两种不同瞬时表达体系中PRF1蛋白的定位出现了不同,这可能与同源或异源表达的植物特性相关。待获得纯合的拟南芥转基因植株后,对其与野生型的表型进行对比,发现其根长、株高等都没有显著性差异,随后对GFP:PRF1融合蛋白在拟南芥不同组织中的表达情况进行观察,观察到PRF1在拟南芥植株各组织中均有表达,进一步说明了重组载体在拟南芥植株中可以表达,通过上一结果了解到PRF1在拟南1芥根尖中有分布,为了探究UV-B处理时PRF1与染色体之间的相关性,使用DAPI标记拟南芥的根尖,发现当用UV-B处理转基因拟南芥植株后,其根尖分生区细胞中的染色体发现了异常分裂的现象,同时也发现PRF1随着染色体的异常而分布。而这种现象是否与筛转基因植株过表达PRF1影响染色体的行为有关呢?同时对野生型与转基因植株的染色体用DAPI标记进行观测,发现两者的染色体没有异常现象,说明染色体这种异常分裂现象不是由PRF1过表达导致的,随后也发现PRF1与染色体的定位很相似,当细胞处于分裂间期时,PRF1主要在核中积累,当细胞开始进入分裂后期后,PRF1均匀的分布在细胞质中。
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