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摘要:研究旨在构建具有高效抗菌、活性持久的奶牛乳腺特异性表达质粒,探索研制新型抗菌制剂,为利用基因工程技术防治奶牛乳房炎提供重要材料.根据GenBank中奶牛溶菌酶基因(lysozyme,Lyz) mRNA序列(GenBank号:NM_180999.1)设计引物,从奶牛乳腺上皮细胞中RT-PCR扩增Lyz基因编码序列,将其克隆到携带增强型绿色荧光蛋白通用型表达载体pEGFP-N1中测序.重组质粒pEGFP-N1-Lyz经Ase I+ Hind Ⅲ双酶切除CMV启动子,将奶牛乳腺特异性表达β-乳球蛋白基因(BLG)启动子同源重组替换到Ase Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点,构建奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz,采用脂质体法转染奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)、人肾脏上皮细胞(HEK293T),荧光显微镜检测转染细胞中绿色荧光蛋白的表达情况.结果 表明,重组表达质粒pBLG-EGFP-N1-Lyz测序结果与目的片段长度相符,转染至BMEC细胞和HEK293T细胞,在奶牛乳腺上皮细胞观察到绿色荧光,HEK293T细胞未观察到绿色荧光,奶牛Lyz基因乳腺特异性表达质粒构建成功....
摘要:[背景]随着人们生活水平和健康意识的提高,作为部分乳制品的原料,生乳的质量安全问题显得尤为重要.[目的]检测长江下游地区某集约化牧场中国荷斯坦奶牛生乳中菌落总数、总大肠菌群数的真实水平,同时对影响其变化的生理因素和环境因素进行探讨.[方法]以中国荷斯坦奶牛生乳为研究对象,用乳房炎快速诊断剂检测乳房炎感染情况,菌落总数、总大肠菌群数和环境细菌数的检测方法参照国家标准.对采集的生乳样本进行细菌常规分离鉴定,同时收集乳成分变化数据.[结果]多因素方差分析结果表明,不同泌乳阶段和不同产奶量对荷斯坦奶牛生乳中菌落总数的影响显著(P<0.05)和极显著(P<0.01);体况、泌乳阶段、胎次、产奶量及乳区对大肠菌群数均无显著影响(P>0.05).夏季生乳的菌落总数、大肠菌群数均极显著地高于其他季节(P<0.01);场区内各牛舍的不同卫生环境及细菌数对菌落总数、大肠菌群数的影响均在显著以上(P<0.05).不同乳房炎的感染程度对菌落总数影响极显著(P<0.01).细菌鉴定结果是葡萄球菌属和杆菌属感染居多,链球菌属感染几乎没有.菌落总数的变化对乳蛋白率影响不显著(p>0.05),对乳脂率的影响极显著(P<0.01).[结论]随机采样泌乳牛群的不同生理和病理状况、外界不同饲养条件及卫生环境对生乳中菌落总数和大肠菌群数有不同程度的影响,生乳的乳脂率与细菌总数变化负相关....
摘要:本研究对成膜性奶牛乳头药浴剂的牧场应用效果进行了观察分析,将试验牛乳区分为对照组和试验组,分别使用成膜性药浴液和常规碘伏药浴液,通过测定药浴剂使用前后的体细胞数变化和隐性乳腺炎的发病率等指标来评价新型药浴剂使用效果.试验结果表明,隐性乳腺炎的乳区发病率由药浴前的41.6%下降到17.3%,与对照组比差异显著.成膜性药浴剂乳头保护效果高效持久,并能有效降低乳汁体细胞数目,预防奶牛乳腺炎症的发生,保证原料乳的质量安全....
摘要:本研究通过对成膜性奶牛乳头药浴液进行实验室消毒试验、现场消毒试验及同类产品的对比试验,对其消毒杀菌效果及对乳品质的影响进行评价.经现场试验,该成膜性药浴液对奶牛乳头表面细菌杀菌率达99.9%,杀灭指数大于104,且对奶牛乳头无不良反应.通过对乳品质进行测定,在第15天,试验组的乳脂率、乳蛋白率与对照组相比有所提高,乳糖含量有所下降,组间差异不显著(P>0.05);在第30天,试验组的乳蛋白率与对照组相比有所提高,乳糖含量、乳脂率有所下降,组间差异不显著(P>0.05).结果表明,成膜性奶牛乳头药浴液对奶牛乳头表面有很好的消毒效力,可有效杀灭奶牛乳房炎的致病菌,同时不影响牛奶的品质,可用于奶牛挤奶后乳头的药浴....
[专利] 发明专利 CN201911025737.8
扬州大学 2020-01-03
摘要:本发明提供一种奶牛气管抗菌肽基因(TAP)乳腺特异性表达质粒及其构建方法和应用。具体地,PCR扩增TAP基因的编码序列,将其插入到携带增强的绿色荧光蛋白基因的通用表达载体pEGFP‑N1的多克隆位点中。通用表达载体pEGFP‑N1经Ase I+Hind III双酶切,去除CMV启动子,克隆奶牛乳腺特异性表达β‑乳球蛋白基因(BLG)启动子序列并取代Ase I和HindIII酶切位点,构建奶牛气管抗菌肽基因(TAP)乳腺特异性表达质粒。采用上述重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞,得到的细胞系可用于分泌具有生物活性的奶牛气管抗菌肽,用于奶牛乳腺组织免疫机制研究;该重组质粒还可应用于基因治疗奶牛乳房炎制剂的研发。
[专利] 发明专利 CN201911025733.X
扬州大学 2019-12-24
摘要:本发明提供一种奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒及其构建方法和应用。具体地,PCR扩增Lyz基因的编码序列,将其插入到携带增强的绿色荧光蛋白基因的通用表达载体pEGFP‑N1的多克隆位点中。通用表达载体pEGFP‑N1经Ase I+Hind III双酶切,去除CMV启动子,克隆奶牛乳腺特异性表达β‑乳球蛋白基因(BLG)启动子序列并取代Ase I和HindIII酶切位点,构建奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特异性表达质粒。采用上述重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞,得到的细胞系可用于分泌具有生物活性的奶牛溶菌酶,用于奶牛乳腺组织免疫机制研究;该重组质粒还可应用于基因治疗奶牛乳房炎制剂的研发。
摘要:为了确定Ankom滤袋法在粗纤维测定中试样的脱脂标准,试验采用Ankom滤袋法在中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维测定中规定的脱脂标准作为粗纤维测定的脱脂标准,并进行验证.结果表明:粗脂肪含量大于5%的试样,脱脂与非脱脂处理的结果差异极显著(P<0.01);而粗脂肪含量不大于5%的试样,脱脂与非脱脂处理的结果差异不显著(P>0.05)....
[专利] 发明专利 CN201510096063.6
扬州大学 2015-05-20
摘要:本发明涉及一种用于控制奶牛隐性乳腺炎的成膜性乳头药浴剂,其配方比例按质量百分比计如下:成膜材料5-10%、增塑剂5-8%、增强剂0.6-1.0%、表面活性剂1.0-1.4%、抑菌剂5-10%,余量为溶剂,本发明还涉及所述的用于控制奶牛隐性乳腺炎的成膜性乳头药浴剂的制备方法。本发明的用于控制奶牛隐性乳腺炎的成膜性乳头药浴剂,具有物理性屏障作用和药物杀菌作用,用于奶牛日常挤奶后的药浴,杀菌后能持续保护乳头,切断乳房炎的感染途径,达到预防乳腺炎的目的,是绿色环保、简单安全、预防效果良好的药浴剂。
摘要:药物浸泡奶牛乳头是一种防治乳房炎简单易行的有效措施.本研究对成膜性奶牛乳头药浴剂的牧场应用效果进行了观察分析,将试验牛乳区分为对照组和试验组,分别使用成膜性药浴液和常规碘伏药浴液,通过测定药浴剂使用前后的体细胞数变化和隐性乳房炎的发病率等指标来评价新型药浴剂使用效果.试验结果表明,隐性乳房炎的乳区发病率由药浴前的41.6%下降到17.3%,与对照组比差异显著,成膜性药浴剂乳头保护效果高效持久,并能有效降低乳汁体细胞数目,预防奶牛乳房炎症的发生,保证原料乳的质量安全.
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