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[专利] 发明专利 CN201910574985.1
浙江大学 2019-10-18
摘要:本发明公开了一种延迟家蚕化蛹的方法。本发明利用在桑叶中添加家蚕核型多角体病毒BmNPV编码表达的蜕皮甾醇尿苷二磷酸葡萄糖转移酶(ecdysteroid UDP‑glucosyltransferase,EGT),使家蚕体内蜕皮激素失去活性,从而延迟家蚕化蛹。其原理是EGT酶可催化将UDP‑葡萄糖中的糖基转移至蜕皮激素的反应而使后者失活,从而阻断家蚕的蜕皮和化蛹。本发明解决了鲜茧必须立即烘干杀死蚕茧内蚕蛹的问题,节省了生产成本,并且能够提供蚕丝的品质,这为实现鲜茧缫丝和提高生产效率创造了条件。
[专利] 发明专利 CN201910345204.1
浙江大学 2019-08-16
摘要:本发明公开了一种家蚕表达重组蓖麻毒素蛋白A链的方法。以蓖麻籽抽提获得的总RNA为模板PCR处理获得蓖麻毒素蛋白A链基因的PCR产物;利用家蚕核型多角体病毒BmNPV作为载体,构建了含有蓖麻毒素蛋白A链基因的重组病毒,利用家蚕作为重组杆状病毒的宿主表达具有生物活性的重组蓖麻毒素蛋白A链。本发明以家蚕作为宿主生产重组蓖麻毒素蛋白A链,具有较强的生物活性,有利于蛋白质的快速提取,为该蛋白A链在医学和治疗领域上的应用提供了新的途径。
[专利] 发明专利 CN201910272670.1
浙江大学 2019-07-19
摘要:本发明公开了一种生产重组蓖麻毒素蛋白B链的方法。以蓖麻籽抽提获得的总RNA为模板PCR处理获得蓖麻毒素蛋白B链基因的PCR产物;利用家蚕核型多角体病毒BmNPV作为载体,构建了含有蓖麻毒素蛋白B链基因的重组病毒,利用家蚕作为重组杆状病毒的宿主表达具有生物活性的重组蓖麻毒素蛋白B链。本发明以家蚕作为宿主生产重组蓖麻毒素蛋白B链,具有较强的生物活性,有利于蛋白质的快速提取,为该蛋白B链在医学和治疗领域上的应用提供了新的途径。
[博士论文] 张健家
特种经济动物饲养 浙江大学 2018(学位年度)
摘要:杆状病毒是一类具有囊膜包裹的双链环状DNA病毒,其基因组大小为80-180kb,在自然界中以节肢动物作为专一性宿主进行感染和传播。杆状病毒区别于其他病毒的一个显著特征是病毒生活史中产生两种不同的病毒粒子形态:一种为包埋型病毒粒子(Occlusion-derived virus,ODV),在病毒经口感染过程中,ODV在宿主中肠强碱性环境下从包涵体内释放,感染中肠上皮细胞实现原发感染;另一种为出芽型病毒粒子(budded virus,BV),主要介导细胞与细胞之间的感染。两种类型病毒粒子都由多种结构蛋白组成,其中BV囊膜的结构较ODV简单,病毒结构蛋白通过相互之间的作用共同形成完整的病毒粒子,并且这些相互作用还具有除结构支撑以外的其他功能。本研究以家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)为研究对象,利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术对其BV病毒结构蛋白间的相互作用进行了分析和验证。为进一步探讨病毒囊膜与核衣壳等结构在病毒入侵细胞过程中的作用,构建了能够同时标记BV病毒囊膜和衣壳的重组双荧光病毒。利用序列截短突变的方式对BV最重要的囊膜融合蛋白GP64与相关蛋白间的互作进行了深入分析,阐明了其参与互作的关键结构域。主要结论如下:
  1、探明了BV病毒粒子结构蛋白间的相互作用网络
  通过对27个主要BV结构蛋白进行酵母双杂交一对一筛选,发现了57对蛋白相互作用,其中6对为自相互作用。进一步用免疫共沉淀技术验证了其中的10对相互作用。根据迄今为止关于杆状病毒蛋白互作的研究,发现VP39、FP和38K是杆状病毒蛋白互作网络中参与蛋白互作最多的三个关键蛋白,由此推测它们可能是病毒结构的主要骨架;还发现每种囊膜蛋白都与至少一个衣壳蛋白发生互作。根据这些蛋白互作信息,最终确立了5组BV结构蛋白间的互作网络。这些结果对于深入理解杆状病毒的结构具有重要参考意义。
  2、成功构建了同时标记病毒囊膜和衣壳的双荧光重组病毒
  为进一步探究BV结构蛋白中病毒囊膜和衣壳蛋白间的互作以期揭示病毒囊膜及衣壳这两个结构在病毒感染细胞过程中的作用,构建了能够同时标记病毒囊膜及衣壳的双荧光病毒。利用“λ-red同源重组系统”将BmNPV病毒本身的vp39和gp64基因双敲除,并在此基础上利用该重组系统将融合有3个红色荧光mCherry膜,这与GP64和VP39的共定位相似,暗示GP64可能参与将PKIP转运入细胞核。
[期刊论文] 张健家 沈运旺 吴小锋
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CSTPCD 北大核心
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摘要:昆虫杆状病毒在感染宿主的过程中产生2种结构和功能不同,但遗传物质完全一致的病毒粒子表型,即出芽型病毒粒子(BV)和包涵体衍生型病毒粒子(ODV).在昆虫中肠碱性环境下释放出的ODV通过其表面囊膜上高度保守的经口感染因子(PIF)介导感染中肠上皮细胞,引发原发性感染.已有研究发现,由经口感染因子PIF1、PIF2、PIF3和P74组成的多分子复合物在ODV入侵昆虫中肠上皮细胞的过程中发挥重要作用.最近有研究报道其他囊膜蛋白如PIF4、PIF5和PIF6,可与已知的PIF互作促进ODV感染.进一步的研究发现,PIF4和P95(AC83)也是PIF复合物的组分,PIF4能与PIF1、PIF2、PIF3形成稳定的复合物,而P95和P74与这个复合物的结合并不紧密.通过蛋白质组分析发现,其他3种蛋白质——AC5、AC68 (PIF6)和AC 108(SF58的同系物)也与PIF复合物有关.揭示ODV入侵昆虫中肠上皮细胞时复合物的形成与构象变化,PIF的潜在受体及其复合物识别宿主细胞受体的过程,将是阐明杆状病毒PIFs及其复合物介导ODV病毒感染机制的重要研究内容....
[专利] 发明专利 CN201510060324.9
浙江大学 2015-05-20
摘要:本发明公开了一种可视化红色荧光杆状病毒的构建方法,即:在杆状病毒的核衣壳蛋白的羧基末端融合1~3个分子的红色荧光蛋白,由此重组得到可视化红色荧光杆状病毒。本发明通过红色荧光蛋白标记病毒的核衣壳蛋白,使病毒带有红色荧光从而可视化,由此可根据红色荧光的出现判断病毒的位置,追踪杆状病毒粒子的行踪。本发明重组病毒的构建为探究杆状病毒在培养细胞和幼虫组织中的详细侵染过程创造了条件。
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