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摘要:[目的]研发城市绿化树木害虫绿色防控新产品及使用技术.[方法]将烷基酚聚氧乙烯醚吸附于可溶性淀粉,与烯啶虫胺原药、水溶性载体及黏结剂均匀搅拌,挤压造粒干燥,配制出20%烯啶虫胺注干可溶粒剂.在悬铃木等6种城市绿化树上,注干使用20%烯啶虫胺注干可溶粒剂,观察其溶解性、传导性,以及对悬铃木方翅网蝽的防治效果.[结果]在树干基部打孔施药,3~5d内,注干可溶粒剂在树木注孔内完全溶解,烯啶虫胺在银杏、香樟、含笑、悬铃木、无患子和黄山栾树中均可进行传导分布;林间试验表明,20%烯啶虫胺注干可溶粒剂对悬铃木方翅网蝽的防治效果可达98.04%,且药效可保持整个方翅网蝽发生期.可溶粒剂注干施用,对树木损伤小.[结论]注干可溶粒剂适合用于树木害虫防控,对环境无影响,避免了对人的意外伤害,在城市绿化树害虫防控中有很大的推广应用价值....
[硕士论文] 应倩雯
森林保护学 浙江农林大学 2018(学位年度)
摘要:松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是松林毁灭性病害松材线虫病(Pine Wilt Disease)的病原。目前对松材线虫病的防治主要是利用杀线虫剂进行树干打孔注药。实践表明阿维菌素类化合物对松材线虫具有良好的预防和治疗效果。阿维菌素类杀虫剂的作用靶标是昆虫谷氨酸氯离子通道(Glutamate-gated chloride channel,GluCl)。目前有关松材线虫谷氨酸氯离子通道与阿维菌素类杀虫剂相互作用的报道较少。本研究克隆了松材线虫谷氨酸氯离子通道基因并对其功能进行了初步分析,取得了以下研究结果:
  1松材线虫谷氨酸氯离子通道基因克隆及其表达模式分析
  1)从松材线虫转录组中获得了3条谷氨酸氯离子通道基因序列,并设计特异引物克隆获得了3条基因序列,将其分别命名为BxCluCl1、BxCluCl2和BxCluCl3。经序列比对之后可知3条谷氨酸氯离子通道基因序列与其他线虫的相似性在40%-70%之间。
  2)根据松材线虫谷氨酸氯离子通道氨基酸序列推测了氨基酸分子量、等电点等理化性质及其亲水性。BxCluCl1氨基酸相对分子量约为43.481KD,理论等电点pI为9.45,亲水性平均系数为-0.057;BxCluCl2氨基酸相对分子量约为53.307KD,理论等电点pI为8.61,亲水性平均系数为-0.204;BxCluCl3氨基酸相对分子量约为34.879KD,理论等电点pI为5.91,亲水性平均系数为0.048。
  3)根据松材线虫谷氨酸氯离子通道氨基酸序列推测了编码蛋白结构域、二级结构以及三级结构。3条谷氨酸氯离子通道孔道均由五个多肽亚基寡聚而成。且每个亚基都存在4个疏水跨膜区(transmembrane domain,TM)、较长的胞外区(Extracellular domain,ECD)以及M1-M4和介于M3和M4环之间的大的胞内环组成的胞内区(intracellular domain)三部分。
  2松材线虫谷氨酸氯离子通道基因在异源表达系统中的表达
  使用CHO、HEK293、COS-7以及Sf9细胞异源表达表达了3个谷氨酸氯离子通道基因。在特异性神经递质L-谷氨酸的刺激下,利用膜片钳技术测试3个谷氨酸氯离子通道基因的表达产物对L-谷氨酸的反应,结果显示均不产生反应,推测哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统不能表达谷氨酸氯离子通道或者表达了非功能性谷氨酸氯离子通道,或者可能是需要同时表达两个及以上基因才能引起谷氨酸的门控作用。
  初步使用爪蟾卵母细胞异源表达表达了3个谷氨酸氯离子通道基因。在特异性神经递质L-谷氨酸的刺激下,利用电压钳技术测试3个谷氨酸氯离子通道基因的表达产物对L-谷氨酸的反应,初步试验结果显示BxCluCl3对L-谷氨酸有电流反应,BxCluCl1、BxCluCl2对L-谷氨酸无电流反应。
  目前,已初步使用爪蟾卵母细胞作为异源表达载体,利用电压钳技术来验证3个松材线虫谷氨酸氯离子通道基因的功能,表明部分克隆基因有功能反应。本课题组将在接下来的工作中对其3个基因进行更进一步的试验去验证其功能,并利用该技术研究不同结构的阿维菌素类化合物与松材线虫谷氨酸氯离子通道亲和力,进一步明确阿维菌素类化合物活性与结构的相关性。
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