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摘要:抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)是一类由宿主先天免疫系统产生的对抗外来病原微生物的小分子阳离子多肽类物质.1922年,Fleming第一次发现了溶菌酶(Lysozyme)的抗菌活性;随后,从动物、植物、昆虫和细菌中均发现了大量其他种类的AMPs,到目前为止,已经发现的AMPs超过1200种.随着抗生素药物的滥用,细菌耐药性、过敏反应和抗生素在畜禽类产品中的残留等问题对人类健康和畜牧业的发展产生了严重影响,迫使人类开始寻找新型的抗生素替代药物.AMPs不仅能够直接杀伤病原微生物,而且能够诱导宿主细胞的炎症反应、趋性反应等,在保护生物体免受病原微生物侵害方面发挥了重要作用[1]....
摘要:为确定江苏省徐州市某养鸭场病死鸭的病原菌,从发病鸭的肝中分离到1株细菌并命名为JSE4,根据形态特征、培养特性、生化试验、16S rRNA分子鉴定结果可确定该菌为大肠杆菌(E.coli).对该分离菌进行致病型快速鉴定、动物致病试验、毒力基因检测、药敏试验、系统发育分析,结果显示,该分离株为禽致病性大肠杆菌(APEC),可引起试验组SPF雏鸭死亡,死亡率为16.7%.分离株含有14种毒力基因中的12种,29种常用抗菌药物中,该分离株仅对链霉素、呋喃妥因、亚胺培南、呋喃唑酮、头孢他啶、氨曲南这6种药物具有敏感性.该分离株与源自比利时水源、瑞士禽肉源和中国鸭源分离株的亲缘关系最近,与比利时水源、瑞士禽肉源分离株的同源性高达99.7%.研究表明,从江苏徐州周边养鸭场病死鸭中分离到1株多重耐药的禽致病性大肠杆菌....
[硕士论文] 尹海畅
生物工程 东北农业大学 2013(学位年度)
摘要:随着抗生素药物的滥用,细菌耐药性、过敏反应和抗生素在畜禽类产品中的残留等问题对人类健康和畜牧业的发展产生了严重影响,迫使人类开始寻找新型的抗生素替代药物。抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)是一类由宿主先天免疫系统产生的对抗外来病原微生物的小分子阳离子多肽类物质。AMPs不仅能够直接杀伤病原微生物,而且能够诱导宿主细胞的炎症反应、趋性反应等,在保护生物体免受病原微生物侵害方面发挥了重要作用。单核细胞增生性李斯菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种人畜共患食源性致病菌,能引起人和动物较为严重的感染症状。本研究在前人制备的转基因小鼠的基础上,运用不同检测方法对转基因小鼠进行了鉴定评价,建立ICR小鼠感染单增李斯特菌的感染模型,完成了Ceeropin-XJ抗菌肽转基因小鼠抗单增李斯特菌感染评价的研究。
   分子生物学检测确定整合外源cecropin-XJ基因的转基因小鼠;经PCR检测证实在鼠尾、肺、肝、心脏和脾脏均有外源基因的整合;RT-PCR证实抗菌肽基因在小鼠各组织细胞中转录;血清样品中Western blot同样证实了外源基因在转基因小鼠体内表达;共获得21只F0代小鼠,其中有5只小鼠在DNA、RNA以及蛋白水平的检测为阳性;选取1只F0代DNA、RNA以及蛋白水平均检测分析清楚的Cecropin-XJ转基因鼠与TW野生型小鼠杂交繁育后代转基因鼠,用于后续的感染试验。
   为建立LM的ICR小鼠模型,本研究采用1/2a血清型的N21 LM菌株,分别以106、107、108、109、1010 CFU/mouse的剂量口腔灌注感染6周龄ICR小鼠,每组10只;其中10只接种PBS作为对照组,测定LM对ICR小鼠的LD50;另取40只小鼠,平均分为两组,公母各半,以测定的半数致死量的剂量接种LM,分别对各组小鼠临床症状、组织病理变化、体重变化以及组织中细菌载量进行评价。结果发现,N21菌株对ICR小鼠的LD50为109.25 CFU;感染周期为10d左右,感染小鼠出现被毛粗糙、精神萎靡、阴茎垂出、体重下降等临床症状;组织病理学分析:肝脏先后出现实质内见灶状细菌团块、形成血栓、细胞坏死等;脾脏主要表现为白髓内淋巴细胞减少;肺脏主要表现为纤维索性肺炎:通过菌落计数和Real-time PCR的检测方法发现肝脏中细菌载量最高,脾脏次之。本试验结果表明,ICR小鼠能够作为单核细胞增生性李斯特菌的感染模型。
   30只Cecropin-XJ转基因小鼠和30只WT野生型小鼠分别接种109 CFU剂量的LM。感染后10天,Cecropin-XJ转基因小鼠的成活率为81.25%,而WT野生型小鼠的成活率为50%;转基因小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量显著低于野生型小鼠,并且肝脏和脾脏的组织病理学病变均弱于野生型小鼠的组织病理学病变;分别给15只转基因小鼠和15只野生型小鼠口腔接种6.25×107CFU的单增李斯特菌,感染后发现转基因小鼠的体重恢复到初始体重,而WT小鼠只有初始体重的96.3%;血清抑菌试验表明,转基因小鼠血清的抑菌效果明显强于野生型小鼠的血清的抑菌效果;
   本研究探讨了转基因动物的检测方法、建立了ICR小鼠感染单增李斯特菌的感染模型,完成了Cecropin-XJ抗菌肽转基因小鼠抗单增李斯特菌感染评价的工作,为研究抗菌肽的抗菌机制及转基因动物抗病育种的发展奠定了基础。
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