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摘要:以2015年1~12月捕自四川荥经县的171只成体赤腹松鼠为研究对象,首次测定了其血清电解质等5项指标值,并分析了性别、季节差异及妊娠因素对指标的影响.结果显示:1)雌、雄赤腹松鼠血清离子浓度参数无显著性别差异.2)无机磷(Pi)浓度春、冬季高于夏、秋季;钾离子(K+)浓度春季最高;钠离子(Na+)浓度冬季最高,其次夏、秋季,春季最低;氯离子(Cl-)浓度春季低于秋、冬季;钙离子(Ca2+)浓度春季低于冬季.3)妊娠鼠无机磷(Pi)、钙离子(Ca2+)浓度低于,钾离子(K+)浓度高于未妊娠鼠.结果表明,雌、雄赤腹松鼠血清离子浓度参数具有同一性,且皆具有季节变化,这可能与雌、雄鼠的繁殖状态及生活环境的多样性变化有关....
[硕士论文] 尹思睿
临床兽医学 四川农业大学 2018(学位年度)
摘要:抵抗素是一种炎性细胞因子,能够参与机体的免疫调节,与Ⅱ型糖尿病和肥胖等多种疾病的发生有关。NLRs(NOD-like receptors),包括NOD1(Nucleotide-binding oligomerization domain1)、NOD2、NLRP3等是天然免疫系统中的重要受体,可接受多种物质的调控,与多种免疫相关信号通路的激活有关。实验室前期研究表明,抵抗素不影响RAW264.7细胞NOD1的表达,但能促进其NOD2的表达,活化NOD2-NF-κB信号通路并释放IL-6、IL-18、TNF-α等炎性细胞因子,但NOD2并不是抵抗素作用的必需受体。NLRP3受NF-κB的调控并参与炎症过程,是NLRP3炎性体的中心,但目前尚无抵抗素与NLRP3关联的报道,抵抗素能否通过NF-κB信号通路活化NLRP3,启动NLRP3炎性体的组装,尚有待研究证明。因此,利用RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞)研究抵抗素对其NLRP3基因和蛋白表达,以及活化NF-κB信号通路促进炎性细胞因子释放的影响,明确抵抗素与NLRP3的作用机制。
  方法与结果:(1)用终浓度为50ng/mL、100ng/mL、150ng/mL和200ng/mL的抵抗素孵育RAW264.7至预定时间(0h、3h、6h、12h、24h)。运用Real Time-PCR和Western Blot技术分别检测细胞NLRP3、NF-κB的基因和蛋白表达水平,ELISA检测上清液中TNF-α、IL-6、IL-18和IL-1α等细胞因子的浓度。结果表明,抵抗素上调RAW264.7中NLRP3及NF-κB基因和蛋白的表达;培养上清液中TNF吨、IL-6、IL-18和IL-1β的含量随抵抗素终浓度(50-200ng/mL)的增高及培养时间(0-24h)的延长而增加。
  (2)设计三条不同的siRNA沉默NLRP3基因,荧光显微镜下检测转染效率,Real Time-PCR检测沉默效果。结果发现在转染效率较高的条件下,三条siRNA沉默效果均不好。随后更换为用终浓度为10nmol/L的MCC950(NLRP3的特异性抑制剂)预处理RAW264.7细胞0.5h,添加200ng/mL的抵抗素继续孵育24h,检测NLRP3及NF-κB的基因、蛋白表达变化和上清液中IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α的浓度。结果:添加MCC950,RAW264.7细胞中NLRP3基因和蛋白表达水平较抵抗素组极显著下调(P<0.001),上清液中TNF-α、IL-6、IL-18和IL-1β的浓度极显著降低(P<0.001)。表明NLRP3是抵抗素促进RAW264.7细胞释放促炎细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-18和IL-1β)的关键调控因子,但不影响抵抗素激活NF-κB的表达。
  (3)用终浓度为25μmol/L的小白菊内酯(NF-κB的特异性抑制剂)预处理RAW264.7细胞1h,添加200ng/mL的抵抗素继续孵育24h,检测NLRP3及NF-κB的蛋白表达变化和上清液中IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α的浓度。结果:添加小白菊内酯,RAW264.7细胞中NLRP3和NF-κB蛋白浓度显著降低(P<0.001),上清液中TNF-α、IL-6、IL-18和IL-1β的浓度显著降低(P<0.001)。表明NF-κB是抵抗素促进RAW264.7细胞NLRP3蛋白表达和促炎细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-18和IL-1β)的释放的必需因子。
  结论:(1)抵抗素促进RAW264.7细胞的NLRP3基因表达上调、蛋白表达增高,激活NF-κB并促进细胞因子如TNF-旺、IL-6、IL-18和IL-1β等的释放。(2)NLRP3参与抵抗素诱导RAW264.7细胞促炎细胞因子如TNF-α、IL-6、IL-18和IL-1β等的释放过程,但其并非抵抗素激活NF-κB的必需因子。(3)NF-κB是抵抗素诱导NLRP3表达升高和RAW264.7释放促炎细胞因子的关键调控因子之一。
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