绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
找到 1 位学者
南京师范大学
获取范围
  • 1 / 1
找到 1 条结果
[硕士论文] 宫晓燕
生物学;微生物学 南京师范大学 2009(学位年度)
摘要:核糖体蛋白RPL32(ribosome protein L32),是一种广泛存在于动物、植物和酵母等不同生物类群中的蛋白,进化上相对保守。绝大多数真核生物的核糖体蛋白RPL32 仅由一个基因编码,而粟酒裂殖酵母的核糖体蛋白RPL32 由两个基因编码,其表达蛋白分别是RPL32-1和RPL32-2。本实验室已经对rpl32-2基因进行了克隆表达,并对其功能进行了研究,证明其是一种潜在的转录调节因子;由于RPL32-1和RPL32-2 氨基酸序列相似度极高(96.85%),推测RPL32-1 可能也具有类似RPL32-2的转录调控功能。因此,本文首先对RPL32-1 编码基因进行了克隆和表达,并对RPL32-1的胞内分布进行了研究。
   本文首先提取了野生型Schizosaccharomyces pombe的基因组,通过PCR 扩增得到编码核糖体蛋白RPL32-1的基因rpl32-1,将其连接到pMD18-T Vector,用限制性内切酶EcoR I和Xho I 将rpl32-1 从pMD18-T/rpl32-1 切下,连到pET-28a(+)表达载体,构建质粒pET-28a(+)/rpl32-1,转化Escherichia coliRosetta(DE3)pLys 细胞。pET-28a(+)/rpl32-1 /Rosetta 重组菌采用1mM IPTG 诱导,37 ℃表达2h,0 ℃条件下超声破碎细胞后离心得到上清,上清用Ni-NTAHis·Bind Resins(Novagen)进行一步纯化。SDS-PAGE 显示,RPL32-1 蛋白成功表达,并且可溶性较好。
   本文还对核糖体蛋白RPL32-1的胞内分布进行了研究。通过overlap PCR 成功扩增了核糖体蛋白编码基因rpl32-1和增强型绿色荧光蛋白编码基因egfp的融合基因egfp-rpl32-1。Egfp和rpl32-1 两个基因之间通过一段互补的Linker相连以保证蛋白的正确折叠。得到的融合基因连接到pMD18-T Vector,用限制性内切酶NdeI和BamHI 将egfp-rpl32-1 从pMD18-T/egfp-rpl32-1 切下,连到pESP-3 表达载体,构建pESP-3/egfp-rpl32-1,转化到粟酒裂殖酵母SP-Q01 细胞。在EMM 液体培养基中培养转化子至对数期,置于荧光显微镜下观察。发现绿色荧光主要集中在核内,而胞质中的荧光则较弱;这表明对数期核糖体蛋白RPL32-1 主要分布在核内,而胞质中较少。DAPI 染核也表明荧光聚集区确实为核区。
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

万方选题

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部