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[硕士论文] 宋会改
病理学与病理生理学 贵阳医学院 2014(学位年度)
摘要:目的: 通过研究慢性氟中毒大鼠肝组织及及人肝细胞HL-7702 TRPC5、TRPC6蛋白及其mRNA表达,初步探讨TRPC5、TRPC6蛋白在氟中毒肝损伤机制中的作用,为地方性氟中毒肝损伤的诊断、预防和治疗提供理论依据。
  方法: 36只SD大鼠随机分为3组,每组12只,组内雌雄各半。对照组饮用自来水(含氟F﹣<0.5 mg/L),低氟组、高氟组分别饮用加氟5mg/L、50 mg/L的自来水。实验9个月后采用氟离子选择电极法检测大鼠尿氟、骨氟含量,股动脉放血处死大鼠并取肝组织-80℃保存;培养人HL-7702肝细胞株,分为对照组、低氟组、高氟组三组,接种到6孔板长满后,对照组加入普通培养基,低氟、高氟组分别加入含F﹣0.5,5.0 mmol/L的培养基进行培养,于12h、24h、48h分别收集细胞。采用实时荧光定量PCR方法测定大鼠肝组织和人细胞中TRPC5、TRPC6 mRNA表达水平;Western Bolt方法测定肝组织、细胞TRPC5、TRPC6蛋白表达,分析TRPC5、TRPC6在对照组与相应氟中毒大鼠肝组织及人肝细胞中的表达及过量氟对肝脏病变的影响。
  结果: (1)实验组大鼠出现不同程度的氟斑牙,且髙氟组重于低氟组;染氟组大鼠尿氟含量高氟组明显高于低氟组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但低氟组与对照组无明显差异(P>0.05)。骨氟含量低氟组、高氟组与对照组有明显差异(P<0.05),但低氟组与高氟组差异无统计学意义(P>0.05)(2)实时荧光定量PCR结果显示氟中毒组大鼠肝组织TRPC5、TRPC6 mRNA表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),且随染氟浓度增加,表达水平增高。(3)人肝细胞对照组、低氟组、高氟组在同一时间点三组两两比较,在12h、24h、48h时TRPC5、TRPC6 mRNA表达都具有明显差异(P<0.05);但浓度不变时,TRPC6 mRNA表达在不同时间点没有明显统计学差异(P>0.05); TRPC5 mRNA对照组在12h、24h、48h时表达无明显差异(P>0.05),低氟组12h与24h mRNA表达差异不显著(P>0.05),但在48h时出现显著差异(P<0.05),高氟组12h、24h、48h时mRNA表达都具有明显差异(P<0.05)(4)Western Bolt测定大鼠肝组织TRPC5、TRPC6蛋白表达水平,结果显示对照组与低氟组、高氟组比较TRPC5、TRPC6表达水平有显著差异,差异有统计学意义(P<0.05),且随染氟浓度增加,表达水平更高。(5)对照组、低氟组、高氟组从12h时间点人肝细胞TRPC5、TRPC6蛋白表达水平明显增高,差异具有统计学意义的差异(P<0.05),但浓度不变时,TRPC6蛋白表达在不同时间点没有明显统计学差异(P>0.05),TRPC5蛋白对照组在12h、24h、48h时表达无明显差异(P>0.05),低氟组12h与24h蛋白表达差异不显著(P>0.05),但在48h时出现显著差异(P<0.05),高氟组12h、24h、48h时蛋白表达都具有明显差异(P<0.05)。
  结论: TRPC5、TRPC6 mRNA及其蛋白在大鼠肝组织和人肝细胞中均有表达,过量的氟促进染氟大鼠肝组织、人肝细胞TRPC5、TRPC6表达水平的增高,且随氟浓度的增加而增加。提示氟中毒大鼠肝脏及人肝细胞损伤病变的发生机制中TRPC5、TRPC6的表达异常可能是重要环节之一。
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