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[硕士论文] 宁建
眼科学 华北理工大学 2017(学位年度)
摘要:目的:通过兔前房注射复方卡波姆溶液建立慢性高眼压模型,模拟青光眼的慢性发病过程,观察尼莫地平(Nimodipine,NMD)灌胃后视神经节细胞(Retinal ganglion cells,RGCs)形态、凋亡情况及Bcl-2、Bax因子表达,探讨NMD对慢性高眼压兔RGCs凋亡和Bcl-2、Bax表达的影响,为临床治疗青光眼疾病提供理论依据。
  方法:选取健康雄性的日本大耳白兔42只,体重(2.93±0.31)kg,经检眼镜查看眼前节及视网膜无异常,采用压陷式眼压计测量兔基础眼内压,实验眼均为右眼。将其随机分为正常组(Normal group,6只)、模型组(Model group,18只)、尼莫地平组(NMD group,18只)三组,模型组及尼莫地平组在造模成功后根据给药持续时间不同分为2w、3w、4w三个时间点(每个时间点6只)。正常组不做任何处理,模型组及尼莫地平组白兔采用前房穿刺注射复方卡波姆溶液造模。模型建立成功后开始给予尼莫地平组白兔NMD13.2mg/Kg·d(溶于无菌注射用水中)灌胃,模型组给予同等剂量无菌注射用水灌胃。在模型建立成功后的2w、3w、4w时向兔耳缘静脉注射空气处死实验动物并立即摘取右眼,4/0丝线于颞侧角巩膜缘处行缝线标记并固定包埋切片。将附有视网膜组织的切片进行 HE染色,观察RGCs形态学变化;TUNEL检测RGCs凋亡情况;免疫组化法检测RGCs凋亡因子Bcl-2、Bax的表达情况。将切片进行拍摄、计数阳性细胞数,最终所得数据均采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。
  结果:
  1.正常组、模型组及尼莫地平组眼压比较造模前测量各组基础眼压差异无统计学意义(P>0.05);造模成功后模型组及尼莫地平组各时间点眼压与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),在兔眼前房注射复方卡波姆溶液后的模型组及尼莫地平组眼压均较正常组明显升高;模型组与尼莫地平组同一时间点眼压差异无统计学意义(P<0.05)。
  2.HE染色观察RGCs形态正常组RGCs呈单层排列,胞体大小不等,有一呈圆形或椭圆形的胞核,无细胞形态异常,胞核形态良好。模型组2wRGCs形态出现异常,可见胞核固缩现象;3wRGCs形态异常变化较2w严重,部分胞核形态异常,可见核固缩、新月形核;4wRGCs形态异常明显,残存细胞胞核异常明显,甚至消失。尼莫地平组2wRGCs形态可,少量可见胞核固缩;3wRGCs部分细胞形态异常,部分胞核形态异常。4wRGCs形态异常较3w严重,较模型4w细胞形态异常程度轻,残存细胞胞核大多存在,可见核固缩、马蹄形核。
  3.TUNEL检测RGCs凋亡正常组无RGCs凋亡;模型组及尼莫地平组两组组间在2w、3w、4w时RGCs凋亡阳性率差异具有统计学意义(P<0.05),两组组内在2w、3w、4w时RGCs凋亡阳性率差异具有统计学意义(P<0.05),提示两组 RGCs凋亡阳性率随观察时间延长而升高,但是尼莫地平组RGCs凋亡阳性率升高程度小于模型组,表明尼莫地平能够抑制RGCs凋亡。
  4.免疫组化检测RGCs Bcl-2、Bax表达正常组RGCs无Bcl-2、Bax表达;模型组和尼莫地平组两组组间在2w、3w、4w时RGCsBcl-2、Bax表达阳性率差异具有统计学意义(P<0.05);两组组内在2w、3w、4w时RGCsBcl-2、Bax表达阳性率差异具有统计学意义(P<0.05)。提示两组RGCsBcl-2、Bax表达阳性率随观察时间延长而升高,但是尼莫地平组RGCsBcl-2表达阳性率升高程度大于模型组,RGCsBax表达阳性率升高程度低于模型组,表明尼莫地平能够上调抑凋亡因子Bcl-2表达、下调促凋亡因子Bax表达。
  结论:给予兔前房注射复方卡波姆溶液能够良好的模拟青光眼的慢性高眼压过程,尼莫地平可以维持慢性高眼压兔RGCs正常形态,能够抑制慢性高眼压兔RGCs的凋亡,上调抑凋亡基因Bcl-2的表达下调促凋亡基因Bax的表达。
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