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摘要:为研究产肠毒素大肠杆菌(ETEC)溶血素hlyA基因的相关生物学特性,本研究通过Red同源重组的方法构建了ETEC标准株K88ac+ C83902和K88ad-C83903的hly基因缺失株.体外生长试验和酵解试验表明:缺失株C83902△hlyA和C83903△hlyA生长速度及生长周期各个阶段的特性与相应野生株相比无差异,其分解发酵糖类和氨基酸的能力也未发生改变.小鼠感染试验显示经野生株和回补株感染的小鼠致死率高,而缺失株不致死,表明hlyA基因可以增强ETEC对ICR小鼠的致病力.从感染小鼠的十二指肠、空肠、回肠分离感染的靶细菌,平板计数和PCR检测表明,ETEC在小鼠回肠的黏附能力强于在十二指肠和空肠,并且基因缺失株黏附能力比野生株显著降低.本研究首次对ETEC溶血素hlyA基因进行研究,为进一步阐释α-溶血素与机体相互作用的分子机制和ETEC的致病机制,以及预防ETEC感染提供了相关的实验依据....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:利用λ噬菌体Red同源重组系统构建致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌国内分离株G8107、G803、G8120和非致病性大肠杆菌J5的cya、crp基因缺失株,检测所得突变株的部分生物学特性,为大肠杆菌减毒活疫苗的研制提供新思路.首先,以pKD3质粒为模板扩增带有与目的基因(cya和crp)两侧序列同源的氯霉素抗性基因PCR片段;其次将PCR扩增产物电转化入含有pKD46质粒的野生型毒株感受态细胞中,获得目的基因被氯霉素抗性基因同源替换的缺失株;利用携带FLP位点特异性重组酶的温度敏感性质粒pCP20去除上述缺失株中的抗性基因标志,进一步结合PCR扩增和DNA测序,证明基因缺失株的正确构建,本试验成功构建上述各株大肠杆菌的△cya基因缺失株和△cyacrp双基因缺失株.生长试验、酵解试验以及毒力检验试验表明,相对于亲本株,上述缺失株生长速度减慢,分解利用糖的能力较差,对1日龄雏鸡的毒力显著降低,本试验结果初步证实所构建的缺失株可作为减毒疫苗候选株使用....
摘要:水肿病是能由产志贺样毒素型大肠杆菌产生的Stx2e毒素引起的一种细菌传染病,对断奶仔猪有较高的致死率,常造成较大的经济.当前,Stx2e毒素影响病原菌与靶细胞之间的相互作用机制不明确,Stx2e基因缺失株作为后选疫苗的潜力有待确认.本研究中我们利用Red重组系统构建了大肠杆菌1522 (serotype O139:K12:H1)和1525 (serotype O157:H19)的Stx2e基因缺失株,并通过PCR检验,DNA测序手段以及Vero细胞毒性试验在细胞水平加以验证.研究发现,在同样的培养条件下,1522△Stx2e株的生长特性与原型株相比没有差异,其分解发酵糖类和氨基酸的能力也未发生改变,但是相较野生株,Stx2e基因缺失株粘附猪肠上皮细胞IPEC-J2的能力大幅度降低,可达30%.将表达K99菌毛操纵子基因克隆入1522△Stx2e中,该重组菌能够同时表达K99菌毛和自身的F18菌毛基因,且该重组株的粘附IPEC-J2细胞能力相较原型株增强近l倍....
摘要:民事调解是乡村治理极为细微的一环,其所面向的对象是村民个体.由于村民个体利益的复杂性,民事调解在应对村庄问题时所发挥的作用就尤为重要.贺雪峰《新乡土中国》一书叙述了转型时期中国乡村的问题,其中谈及民事调解的问题,引发了人们对乡村治理问题的思考.在"半熟人"的乡村社会中,村庄的政治、经济、文化、人际关系都发生了变化,完善民事调节机制是为了适应乡村社会表现出来的新的时代特征.完善乡村民事调解机制是新的乡土中国的现实需要,是突破乡村治理困境的需要,是发掘村庄中的有效资源,促进乡村民事调解机制完善的需要....
摘要:中国的民主实践虽然历史悠久,但是过程曲折,协商是民主最基础最普通的要素.在当代中国实行协商民主具有重要的意义,因为协商民主适应了人的转变带来的人的需求,适应了国家治理现代化进程中“多元治理”的需求,也适应了创造国家认同的需求....
摘要:自从实行村民自治制度以来,农村基层群众在实践中创新了很多民主实现形式.江苏省戴庄村的"村社合一"机制在村庄治理中显示出极大的优越性,值得我们深入探析.剖析这一机制的形成逻辑,总结其在村庄治理中的经验,反思其存在的问题,思考这一机制的未来发展,使我们能够全面地了解基层民主实践在乡村社会的发展情况....
摘要:群众路线是中国革命与建设的法宝,是革命战争中党的领导集体的智慧结晶.当今,农村干群关系面临着新的问题,为此,一是要尊重农民群众的主体地位,取信于民.二是要加强村干部的理想信念教育.三是要加强党基层组织和干部队伍建设.四是要加强对群众观念与行为的正确引导....
摘要:在伟大的抗日战争实践中,中国共产党进一步认识到人民群众的重要性和蕴藏的巨大力量,大力开展了群众动员和教育工作,激发了群众的民族情怀和爱国热情,中华民族精神在全民族的抗战中得到了重构. 中国共产党在民族精神重构中起到了至关重要的作用....
[硕士论文] 姜露
马克思主义中国化研究 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:中国共产党十八届三中全会把“完善和发展中国特色社会主义制度,推进国家治理体系和治理能力现代化”作为全面深化改革的总目标,这也是习近平新时代中国特色社会主义思想的重要内容之一,是重大的理念创新,也必将有力地推动中国的民主治理进程。党的十九大报告明确提出了“实施乡村振兴战略”,提出了“产业兴旺、生态宜居、乡风文明、治理有效、生活富裕”的总要求。乡村的善治是国家治理体系和治理能力现代化的基础。落实到具体乡村层面,治理现代化的目标能否实现,实际就体现在具体的村庄治理的实际效果之中。治理理论为解决村庄治理问题提供了理论和经验指导,乡村振兴战略是新时代实现乡村治理有效性与常态化的制度保障。
  村庄行动机制是在治理理论背景下,立足于村庄整体层面思考解决村庄问题的路径,最大化发挥多元治理资源的综合效应。村庄行动机制是指在村庄这一特定的空间场域中,与村庄密切关联的主体行动者为实现良性村治、村庄权力合法化以及保障利益综合体参与村治的理性化而实施的治理方法和措施的总和。村庄行动机制的成功构建和有效运作取决于村庄内部各主体村治参与度的提高,以及村庄内部各主体之间关联度的增加,同时也与村庄外部的政治、经济、文化等环境密切相关。
  本文将行动机制的概念引入村庄治理的研究之中,旨在将“村庄”这一空间领域视为整体性的行动主体,从而论述其行动机制的产生依据、发生场域、行动主体、行动表现,总结富民村村庄行动机制的治理效应与治理瓶颈并提出相对应的优化策略,最终总结为一般性的村庄治理经验。通过调研,本课题发现村庄行动机制内部的“网络状态”,是各种行动机制的交叉重合产生的效应,这种村庄行动机制带来了富民村“富民”“安民”“惠民”的现实价值,这种现实价值适应了普遍的村治目标。
  本文通过文献研究法、田野调查法等方法,通过对治理理论、村庄治理、行动机制等概念、内涵、作用和意义进行剖析,了解村庄行动机制的理论背景和现实需要。以富民村的实证调研为基础,探讨如何在村庄治理的过程中构建村庄行动机制,并使其最大化的发挥村治功能。探讨当前村庄行动机制所要应对的村庄内部和外部环境变化所带来的发展问题,并结合国家农村问题相关政策思考优化路径。通过研究,得出构建村庄行动机制在村庄治理过程中能够发挥村庄治理资源整体功能的结论,这是实现村庄治理现代化的有效路径。
摘要:肝脏易受多种病原体、毒物及免疫病理累及.已知多种因素可导致肝损伤,如病毒、酒精和药物等.建立实验性肝损伤动物模型,可以为探知肝脏疾病的病因、病理生理以及疗效判断提供有用的工具.现将近几年来国内外对实验性肝损伤动物模型的研究情况作一综述....
摘要:肉鸡腹水综合征是危害快速生长幼龄肉鸡的以浆液性液体过多地聚积在腹腔为特征的非传染性疾病.近年来,很多学者对该病进行了研究.本文就近年来对肉鸡腹水综合征的研究作一概述....
摘要:牛病毒性腹泻.粘膜病是由牛病毒性腹泻病毒引起的一种呈多种临床症状的疾病,给世界养牛业造成了巨大的经济损失.本文从BVD的病原学、发病机理、诊断、治疗和预防等方面进行了详细阐述....
[硕士论文] 姜露
微生物学 扬州大学 2013(学位年度)
摘要:产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC)系一类致人和幼畜(初生羔羊、犊牛、羔羊及断奶仔猪)腹泻最常见的病原性大肠杆菌,其毒力因子主要包括黏附素菌毛、肠毒素、产志贺氏菌毒素、溶血素等。α-溶血素在ETEC的致病机理中很少受到关注,是一种RTX(repeats in toxin)毒素蛋白,对于大部分哺乳动物细胞(如红细胞、粒细胞、单核细胞和内皮细胞)都具有溶细胞活性和细胞毒性,能够整合进宿主细胞膜,影响细胞膜的稳定性,使其内容物渗漏或者裂解,是大肠杆菌肠外感染的一个重要的毒力因子。基于K88ac+/ K88ad+ETEC都具有溶血素基因,且两者病原致病机理不尽相同。我们成功构建hlyA毒素基因缺失株,为进一步深入研究hlyA毒素与机体相互作用的分子机制,溶血素的致病机理及对猪大肠杆菌病的防控策略奠定一定基础。
  1、利用Red同源重组技术构建hlyA基因缺失株
  根据GenBank中已报道的ETEC hlyA基因的序列,首先合成一对引物(引物5'端与hlyA基因同源,而3'端与pKD3质粒上氯霉素抗性基因cat同源),经PCR扩增后得到具有氯霉素抗性基因和hly基因同源臂的产物,将PCR扩增产物直接转化入大肠杆菌中,在pKD46表达的重组酶作用下,PCR产物两端的hlyA基因同源序列与大肠杆菌染色体上的的同源序列发生同源重组交换,利用抗性筛选得到阳性一次重组菌。利用编码Flp重组酶的质粒pCP20,去除氯霉素抗性基因,最后在染色体上只留下一个FRT位点,得到二次重组菌,通过PCR扩增及测序鉴定缺失株的正确构建。本试验成功构建了大肠杆菌标准株K88ac、K88ad的hlyA基因缺失株。同时我们将表达hlyA基因的pBR322质粒导入缺失株,构建了互补株。
  2、溶血素在大肠杆菌致病过程中作用初探
  在K88ac△hlyA、K88ad△hlyA成功构建的基础上,比较分析了野生株和缺失株相关生物学特性的变化。体外生长实验和酵解实验表明,同样的培养条件下,缺失株K88ac△hlyA、K88ad△hlyA株生长速度及生长周期各个阶段的特性与野生株相比基本没有差异,其分解发酵糖类和氨基酸的能力也未发生改变。同时将6周龄ICR小鼠分为1个对照组和6个攻毒组,经灌胃途径分别对各攻毒组小鼠接种109cfu剂量的大肠杆菌悬液,定期观察接种后小鼠的状态(饮食、饮水、精神状态和死亡情况),对死亡小鼠进行剖检记录病理变化,结果显示:经野生株和回补株攻毒的小鼠有出血死亡的现象,而缺失株没有,说明hlyA会影响大肠杆菌对ICR小鼠的致病性,增强大肠杆菌对ICR小鼠的毒力。在小鼠的十二指肠、空肠、回肠分离细菌,分别进行平板计数和PCR检测,结果表明:大肠杆菌在回肠的粘附能力比在十二指肠和空肠要强,且野生株和回补株比缺失株要强。
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