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摘要:[背景]泥鳅抗菌肽Misgurin是泥鳅非特异性免疫防御系统的重要组成部分,具有广谱和较强的抗菌能力,所以获得大量抗菌肽是很有必要的.[目的]为了实现高效表达泥鳅抗菌肽Misgurin.[方法]将泥鳅抗菌肽的目的基因与pPIC9K表达载体连接,构建重组表达质粒pPIC9K-misgurin,Sal酶切线性化,再通过电击法将其整合到毕赤酵母SMD 1168染色体上.在MD固体培养基挑选阳性克隆子到MD液体培养基中,30℃、200 r/min摇瓶培养96 h,转接到BMMY液体培养基进行诱导表达,每隔24 h加入5%的甲醇.通过比较抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径的大小,筛选出活性较高的菌株pPIC9K-misgurin-22.将该菌株在100 L的发酵罐中诱导表达,48 h后进行活性检测.[结果]经Tricine-SDS-PAGE蛋白胶检测和质谱分析鉴定,pPIC9K-misgurin-22菌株诱导表达的活性物质为抗菌肽Misgurin.发酵罐发酵48 h相对于摇瓶发酵48 h,抗大肠杆菌的生物效价提高了1.47倍,抗金黄色葡萄球菌的生物效价提高了1.43倍;抗菌肽Misgurin对鲍曼不动杆菌、沙门氏菌有较弱的抗菌活性,对致病菌产气荚膜梭菌和益生菌如枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、乳酸菌没有抗菌活性,无明显溶血活性;当温度达到90℃时发酵液的抗菌活性明显减弱,调发酵液的pH值在1.0-12.0之间都有抗菌活性;加入胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K后抗菌活性减弱.[结论]获得了一株在毕赤酵母中表达量较高、有工业化生产潜力的产抗菌肽Misgurin的菌株....
摘要:应用Biolog ECO技术和RDA分析研究了兰州市不同功能区,即风景区(Scenic Area,SA)、交通干线(Main Traffic Line,MTL)、公共服务区(Public Service Area,PSA)、文教区(Culture and Education Area,CEA)空气微生物群落代谢功能多样性及其与环境因子的相关性.结果表明,不同功能区的AWCD值在培养192 h后进入稳定期,对碳源总体利用能力呈现显著的区域性差异,SA>PSA>CEA≈MTL.受环境因素影响,McIn-tosh指数差异明显,SA和PSA物种均一度较高.兰州市空气微生物相对利用率较高的碳源类型是酯类、氨基酸类及醇类,与主成分1显著相关的碳源有10种,其中氨基酸类是导致兰州市空气微生物群落代谢功能区域性差异的主要分异类型.环境因子与空气微生物群落代谢功能密切相关,温度、风速是不同功能区存在差异的主导因子....
摘要:[目的]研究人工构建藻菌共生体系在产油方面的特性.[方法]从BG11培养基中分离、筛选出无菌小球藻,通过人工共培养方法构建了藻菌共生体系,探讨了共生体系中小球藻的生长及产油特性.[结果]相比无菌小球藻,藻菌共生体系对于藻的生长、油脂积累以及产生生物柴油的脂肪酸组分方面都有明显的促进作用,其中细菌(Stenotrophomonas maltophilia)和小球藻构建的共生体系效果最好,小球藻生物量提高了9%,油脂含量提高了36.3%,C18-1的含量提高了259.2%.[结论]进一步说明人工共培养方法构建藻菌共生体系能够提高微藻生物柴油的质量,具有很好的利用价值....
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CSTPCD 北大核心
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摘要:空气微生物是城市生态系统的重要组分,随着城市空气环境恶化以及雾霾污染事件的不断发生,城市空气中微生物的监测研究开始受到高度重视.着重综述了不同城市室内外空气微生物的主要种类,粒径分布特征、浓度分布特征及监测研究方法,并依此提出了以往研究的不足及未来的发展趋势.分子生物学方法将为全面研究城市空气微生物提供有效途径,建议空气微生物污染监测应常态化,并达到实时持续监测的新要求,同时制定有害空气微生物评价体系....
[硕士论文] 姜金融
微生物学 兰州交通大学 2017(学位年度)
摘要:空气微生物是城市生态系统的重要组分,更是评估环境质量的重要指标之一,它既可以造福人类,亦会危害人类的生活和健康。近年来,随着城市空气环境恶化以及雾霾事件的不断发生,对城市空气微生物的研究越来越受到重视。研究兰州市空气微生物浓度分布特征及多样性以期为准确了解兰州市空气微生物群落与生态功能奠定基础,为空气微生物对居民健康、空气环境质量影响评价提供科学依据。
  本研究以兰州市不同功能区,即风景区(Scenic Area, SA)、交通干线(Main TrafficLine,MTL)、公共服务区(Public Service Area,PSA)、文教区(Culture and Education Area,CEA)空气微生物样品为研究材料,采用恢复培养手段和Biolog方法研究空气中微生物浓度、粒径时空分布特征和空气微生物群落碳代谢功能多样性,阐明空气微生物浓度及群落功能多样性与环境因子的相关性,利用分子生物学技术对兰州市春季可吸入肺空气细菌粒子进行群落组成和致病性分析,得到以下主要结果:
  (1)兰州市空气中微生物总浓度、细菌、真菌浓度具有明显的空间、季节和日变化规律,空气微生物浓度变化与环境因子之间具有较好的相关性。兰州市空气微生物总浓度范围为196~3752 CFU/m3,空气细菌浓度范围为83~3344 CFU/m3,空气真菌浓度范围为102~1315 CFU/m3,从均值看,兰州市空气细菌浓度为916 CFU/m3,空气真菌浓度为322 CFU/m3,空气中细菌所占比例较大,为66.5%;四个功能区空气微生物总浓度和细菌浓度大小排列一致:MTL>PSA> CEA> SA,空气真菌浓度大小排列依次为:SA>PSA>CEA>MTL。对兰州市各功能区空气微生物污染状况进行评估,结果显示,MTL、PSA空气细菌为较清洁等级,其他功能区空气微生物总浓度及空气真菌均为清洁等级;空气微生物浓度在春、夏季较高,秋、冬季较低,其中,空气细菌浓度均在秋季达到最低值。由于雾霾天气原因,进入冬季后细菌浓度有所升高,不同功能区空气真菌浓度季节变化差异不大;SA空气微生物浓度均表现为13:00时较高,9:00和17:00较低,MTL、PSA空气总微生物浓度和细菌浓度变化特征为:9:00>17:00>13:00,而真菌浓度变化特征为:13:00>9:00>17:00,CEA空气微生物浓度变化特征为:9:00>17:00>13:00;兰州市空气微生物总浓度、细菌浓度与温度呈显著正相关,与风速、湿度呈负相关,空气真菌浓度与温度、湿度、风速相关性较弱。
  (2)兰州市空气微生物粒径呈现明显的时空分布特征。细菌粒子主要分布在一到三级(>3.3μm),呈偏态分布,而空气真菌粒径呈正态分布,粒径范围在2.1μm~7.0μm的粒子居多;在四个功能区空气中,可吸入肺细菌粒子占23.1%~28.9%,可吸入肺真菌粒子占33.7%~40.7%;一年四季中,可吸入肺细菌粒子浓度在秋冬季较高,可吸入肺真菌粒子浓度在春秋季较高;在一天不同时段,可吸入肺细菌粒子浓度在9:00和13:00时较高,而真菌粒子浓度在9:00和17:00时较高;兰州市空气细菌中值直径约为3.68μm,空气真菌中值直径约为3.15μm,空气细菌中值直径大于空气真菌的中值直径;空气细菌在不同季节中值直径变化范围为3.06μm~4.11μm,在春夏两季中值直径较大,空气真菌中值直径季节变化范围为2.74μm~3.59μm,在夏季中值直径较大;空气细菌中值直径在9:00时段较大,而空气真菌中值直径在17:00时段较大。
  (3)各季节四个功能区空气微生物的碳源利用强度存在显著差异,在春季和秋季,SA和PSA空气微生物碳源代谢强度高于其他两个功能区,夏季SA空气微生物碳代谢强度最高,冬季CEA、PSA、SA空气微生物碳代谢强度较高;各季节不同功能区空气微生物Shannon指数和Simpson指数差异性不大,表明四个功能区空气中微生物群落丰富度和优势度相似,而McIntosh指数差异较大,表明不同功能区空气微生物群落均一度受不同环境地域、气象条件的影响较大;各季节空气微生物群落碳代谢功能呈现区域性差异,且导致这种差异的主要碳源分异类型不同,氨基酸类是导致春秋两季兰州市空气微生物群落碳代谢功能区域性差异的主要分异类型,导致夏季不同功能区空气微生物碳代谢功能差异的主要分异类型是糖类,冬季主要分异类型是醇类。四个功能区不同季节空气微生物碳代谢强度亦存在差异,SA空气微生物碳代谢能力在春、夏季较高,MTL和PSA空气微生物群落碳代谢能力在秋冬季较高,CEA空气微生物碳代谢能力在冬季较高,夏季与秋季差异不大;各功能区不同季节空气微生物Shannon指数和Simpson指数差异性不大,说明同一功能区空气中微生物群落丰富度和优势度随着季节变化不会发生太大的改变,而McIntosh指数季节差异较大,说明同一功能区空气微生物群落均一度受季节环境变化的胁迫以及气象因子的影响较大;四个功能区空气微生物群落碳代谢功能呈现季节性差异,糖类是导致SA和PSA空气微生物群落碳代谢功能季节性差异的主要分异类型,导致MTL和PSA空气微生物碳代谢功能季节差异的主要分异类型是氨基酸类。
  (4)兰州市不同功能区可吸入肺空气细菌群落组成存在差异,共检测出48属,分布在六大门类,分别为Actinobacteria、Cyanobacteria、Deinococcus Thermus、Firmicutes、Proteobacteria、Saccharibacteria;CEA和SA细菌群落相似性较高,MTL、PSA进化过程较独立,具有较大的差异性;可吸入肺带菌粒子粒径小于3.3μm,在空气中停留时间越长,传播距离更远,其导致疾病传播以及人体感染的风险也就越大,兰州市可吸入肺空气细菌中检测到9种致病菌或条件致病菌,致病菌的分布也存在空间差异,且人群密集的功能区检出率更高。
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